張 艷 喬煒超 孫 影 張雪鵬▲

1.華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤外科，河北唐山063000；2.華北理工大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)系，河北唐山063000

FoxM1和ADAM17在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義

張 艷1喬煒超2孫 影2張雪鵬1▲

1.華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤外科，河北唐山063000；2.華北理工大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)系，河北唐山063000

目的探討叉頭框蛋白M1（FoxM1）與ADAM17在乳腺癌中的表達(dá)、相關(guān)性及臨床意義。方法采用免疫組織化學(xué)法檢測2014年6月～2015年12月華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院浸潤性乳腺癌（乳腺癌組）62例、乳腺纖維腺瘤（乳腺纖維腺瘤組）33例和正常乳腺組織（對照組）31例中FoxM1和ADAM17的表達(dá)，分析兩者之間的關(guān)系以及其與乳腺癌臨床病理特征的相關(guān)性。結(jié)果FoxM1和ADAM17在對照組、乳腺纖維腺瘤組、乳腺癌組中的染色指數(shù)分別為0.49±0.11、2.13±0.25、9.58±0.95和0.56±0.17、1.87±0.22、9.40±1.17。乳腺癌組FoxM1和ADAM17表達(dá)顯著高于乳腺纖維腺瘤組，乳腺纖維腺瘤組FoxM1、ADAM17表達(dá)高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。乳腺癌組FoxM1和ADAM17呈高表達(dá)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組FoxM1及ADAM17的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與患者年齡、腫瘤大小無相關(guān)性（P＞0.05）。FoxM1和ADAM17在乳腺癌中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.68，P＜0.05）。結(jié)論浸潤性乳腺癌中FoxM1和ADAM17高表達(dá)，兩者存在正相關(guān)性。FoxM1和ADAM17表達(dá)與浸潤性乳腺癌患者年齡、腫瘤大小無關(guān)但與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

乳腺癌；解聚素-金屬蛋白酶17；FoxM1；免疫組織化學(xué)染色

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重影響著女性的身心健康，乳腺癌發(fā)生重要臟器的轉(zhuǎn)移常常是其死亡的主要原因［1-2］。近年來人們保健意識增強(qiáng)，對乳腺癌的治療要求日益提高，乳腺癌的常規(guī)治療手段和治療效果還不盡如人意。研究表明治療乳腺癌的過程中，分子靶向藥物治療不但能延長乳腺癌患者的生存期，也大大提高了患者的生活質(zhì)量［3］。因此，探尋影響乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵分子和信號通路，在分子水平尋找到乳腺癌可能的治療靶點(diǎn)已經(jīng)倍受人們關(guān)注。FoxM1是一種典型的與細(xì)胞增殖相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，可以調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的變化，在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中的作用具有重要意義。關(guān)于ADAM17和乳腺癌的關(guān)系本課題組成員前期已做了大量的研究，但FoxM1和ADAM17在乳腺癌中的表達(dá)及其作用和意義國內(nèi)外均鮮有報(bào)道。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014年6月～2015年12月華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院病理科存檔的石蠟標(biāo)本，共納入62例浸潤性乳腺癌（乳腺癌組）、33例乳腺纖維腺瘤（乳腺纖維腺瘤組）和31例正常乳腺組織（利用乳腺癌改良根治術(shù)標(biāo)本，距癌灶＞7.0 cm處切取0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm大小的乳腺組織，對照組）。上述病理診斷均過經(jīng)兩位高年資病理醫(yī)師確認(rèn)。所有標(biāo)本的患者均為首次發(fā)病女性，年齡31～71歲，中位年齡51歲，所有患者術(shù)前均未行放、化療及其他治療。

1.2 方法

1.2.1 材料和試劑兔抗人FoxM1多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，F(xiàn)oxM1工作液按1∶100稀釋；兔抗人ADAM17單克隆抗體由北京博奧森生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；DAB顯色試劑盒由福州邁新生物技術(shù)公司生產(chǎn)。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色法石蠟切片經(jīng)脫蠟、抗原修復(fù)后，不同濃度酒精水化，室溫下用3%H2O2孵育5～10 min，水洗4 min，4次。血清封閉后，滴加抗FoxM1、ADAM17的一抗（1∶100稀釋），放在4℃冰箱孵育過夜。次日用PBS沖洗4次，4 min/次，滴加相應(yīng)二抗工作液，37℃孵育30 min。PBS緩沖液沖洗，滴加SABC（鏈酶親和素-生物素-過氧化物酶），然后DAB顯色3 min，蘇木精復(fù)染，脫水至透明，放在400倍光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察。陰性對照是以PBS液代替一抗。

1.2.3 結(jié)果判定方法FoxM1蛋白表達(dá)于細(xì)胞核和細(xì)胞漿，而ADAM17蛋白表達(dá)于細(xì)胞漿。兩者的陽性染色呈淡黃、棕黃色甚至棕褐色。根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度判斷：無著色則為陰性（0分），淡黃色為弱陽性（1分），棕黃色為陽性（2分），棕褐色為強(qiáng)陽性（3分）。根據(jù)陽性細(xì)胞在觀察細(xì)胞中所占比例分為：全部陰性為0分，陽性細(xì)胞數(shù)≤10%（1分），10%＜陽性細(xì)胞數(shù)≤50%（2分），50%＜陽性細(xì)胞數(shù)≤75%（3分），陽性細(xì)胞數(shù)＞75%為（4分）。染色指數(shù)即為染色強(qiáng)度評分與陽性細(xì)胞百分比評分的乘積，取5個(gè)高倍視野的平均值，得分0～12分，依據(jù)分?jǐn)?shù)分成4個(gè)等級：陰性≤1分、1分＜弱陽性≤3分、3分＜陽性≤6分、強(qiáng)陽性＞6分［4］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Spearman等級相關(guān)性檢驗(yàn)分析FoxM1與ADAM17的相關(guān)性，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FoxM1的表達(dá)

FoxM1表達(dá)主要位于細(xì)胞核和細(xì)胞漿。對照組中微量表達(dá)或無表達(dá)（0.49±0.11），乳腺纖維腺瘤組（2.13±0.25）為弱陽性表達(dá)，乳腺癌組中呈強(qiáng)陽性表達(dá)（9.58±0.95）。結(jié)果顯示乳腺癌組FoxM1蛋白的表達(dá)顯著高于乳腺纖維腺瘤組，乳腺纖維腺瘤組中FoxM1的表達(dá)高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖1）。

2.2 ADAM17的表達(dá)

ADAM17蛋白陽性表達(dá)主要位于胞漿。對照組中很少表達(dá)或不表達(dá)，以陰性表達(dá)為主（0.56±0.17）；乳腺纖維腺瘤組（1.87±0.22）中呈弱陽性表達(dá)；在乳腺癌組中表達(dá)明顯增強(qiáng)，呈強(qiáng)陽性表達(dá)（9.40±1.17）。ADAM17在乳腺癌組的表達(dá)高于乳腺纖維腺瘤組，乳腺纖維腺瘤組中ADAM17的表達(dá)高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖2）。

圖1 各組FoxM1免疫組化檢測結(jié)果（400×）

圖2 各組ADAM17免疫組化檢測結(jié)果（400×）

2.3 FoxM1和ADAM17的表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

FoxM1和ADAM17在乳腺癌組呈高表達(dá)，腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組二者的表達(dá)強(qiáng)度均明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，乳腺癌中FoxM1和ADAM17的表達(dá)與有無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P＜0.05）；與患者年齡、腫瘤大小無相關(guān)性（P＞0.05）。FoxM1和ADAM17在乳腺癌中的表達(dá)呈正相關(guān)性（r=0.68，P＜0.05）。見表1。

表1 FoxM1、ADAM17蛋白的表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系［n（%）］

3 討論

FoxM1屬于叉頭框轉(zhuǎn)錄因子家族，該基因有嚴(yán)格的細(xì)胞核定位，具有一段特定的“翼狀螺旋結(jié)構(gòu)”的DNA保守序列。人類FoxM1編碼基因由10個(gè)外顯子構(gòu)成，染色體位置為12p13-3c，含110個(gè)氨基酸［5］。FoxM1屬于增殖特異性蛋白質(zhì)，在靜止或未分化細(xì)胞中不表達(dá)或低表達(dá)，在增殖細(xì)胞中高表達(dá)。FoxM1作為一個(gè)刺激細(xì)胞增生的轉(zhuǎn)錄因子，在乳腺癌、胃癌、卵巢癌、前列腺癌、結(jié)腸癌等多種癌組織中均高表達(dá)［6-10］。ADAM17具有典型的金屬蛋白酶活性，可調(diào)節(jié)多個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄活化，與腫瘤的關(guān)系非常密切。已有相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明FoxM1是一個(gè)可能調(diào)控ADAMs的轉(zhuǎn)錄因子。

研究發(fā)現(xiàn)FoxM1在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中表達(dá)明顯增高，其表達(dá)強(qiáng)度與腫瘤大小、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及雌激素受體表達(dá)均相關(guān)，與患者的年齡、孕激素受體、HER-2無明顯關(guān)系［11］。艾振華等［12］率先在細(xì)胞與分子水平闡釋了FoxM1對于乳腺癌細(xì)胞增殖的調(diào)控機(jī)制。國外亦有研究表明FoxM1在乳腺癌中存在異常高表達(dá)現(xiàn)象，其表達(dá)量明顯高于癌旁正常乳腺組織，對乳腺癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤及轉(zhuǎn)移起重要作用［13］。本課題研究結(jié)果顯示，對照組中FoxM1微量表達(dá)或不表達(dá)，在乳腺纖維腺瘤組織中其表達(dá)略有增強(qiáng)，乳腺癌組織中染色呈棕黃色或棕褐色，表達(dá)明顯增強(qiáng)。乳腺癌組與乳腺纖維腺瘤組，乳腺纖維腺瘤組與對照組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。乳腺癌中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的FoxM1陽性表達(dá)率為76.7%（33/43）；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組FoxM1陽性表達(dá)率為52.6%（10/19）；根據(jù)有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，F(xiàn)oxM1陽性表達(dá)差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），由此提示FoxM1蛋白表達(dá)增強(qiáng)與乳腺癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

ADAM17能調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞使其黏附于相鄰細(xì)胞及ECM，這也許是腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的第一步。此外，ADAM17屬于基質(zhì)金屬蛋白酶，其過表達(dá)能產(chǎn)生蛋白水解酶樣作用，能夠降解細(xì)胞基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)，造成癌細(xì)胞向周圍侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。國內(nèi)外研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ADAM17在乳腺組織中微量表達(dá)或不表達(dá)，在乳腺纖維腺瘤中表達(dá)高于乳腺組織，在乳腺癌組織中表達(dá)顯著增多，且其表達(dá)隨腫瘤惡性程度增加、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而增多［14-15］。本研究結(jié)果與國內(nèi)外研究結(jié)果一致，顯示ADAM17在乳腺纖維腺瘤組、乳腺癌組中表達(dá)較對照組增多，且ADAM17表達(dá)在乳腺癌組與乳腺纖維腺瘤組，乳腺纖維腺瘤組與對照組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。將62例乳腺癌有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的43例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的19例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組ADAM17陽性率為88.4%（38/43）；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組ADAM17陽性表達(dá)率為63.2%（12/ 19）；兩組間ADAM17陽性表達(dá)率差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示ADAM17蛋白過表達(dá)與乳腺癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。ADAM17陽性表達(dá)的腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為更具有侵襲性，往往提示該患者預(yù)后不良。

FoxM1作為Forkhead Box轉(zhuǎn)錄因子家族中一員，參與調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化，也參與多種致癌信號途徑的調(diào)控作用。目前已知ADAM17可調(diào)節(jié)多個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄活化，但對其本身是如何調(diào)節(jié)的研究較少。Kim等［16］研究發(fā)現(xiàn)ADAM17受FoxM1的調(diào)控。FoxM1和ADAM17在乳腺癌中的聯(lián)合檢測有利于乳腺癌臨床預(yù)后判斷，深入研究FoxM1和ADAM17在乳腺癌中的作用，有利于闡明乳腺癌的發(fā)病機(jī)制。

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Expression and clinical significance of FoxM1 and ADAM17 in breast cancer

ZHANG Yan1QIAO Weichao2SUN Ying2ZHANG Xuepeng1▲
1.Department of Surgical Oncology，Affiliated Hospital，North China University of Science and Technology，Hebei Province，Tangshan063000，China；2.Department of Pathology，Basic Medical Science College，North China University of Science and Technology，Hebei Province，Tangshan063000，China

Objective To explore expression and clinical significance of FoxM1 and ADAM17 in human breast cancer. Methods Expression of FoxM1 and ADAM17 were detected in 62 cases of invasive breast cancer（breast cancer group），32 cases of breast fibroadenoma（breast fibroadenoma group）and 31 cases of normal breast tissue（control group）by immunohistochemical staining.All patients were treated in Affiliated Hospital，North China University of Science and Technology from June 2014 to December 2015.The correlation between immunohistochemical staining results and clinical pathological features of breast cancer group were analyzed.Results Staining index of FoxM1 and ADAM17 in the control group，breast fibroadenoma group and breast cancer group were 0.49±0.11，2.13±0.25，9.58±0.95 and 0.56± 0.17，1.87±0.22，9.40±1.17，respectively.Expression of FoxM1 and ADAM17 in breast cancer group were significant higher than that in breast fibroadenoma group（P＜0.05）.Compared with control group，expression of FoxM1 and ADAM17 in breast fibroadenoma group were much higher（P＜0.05）.The expression of FoxM1 and ADAM17 was not associated with age and tumor size in patients with breast cancer（P＞0.05），but it was associated with the metastasis of axillary lymph nodes（P＜0.05）.Correlation analysis showed that the expression of FoxM1 and ADAM17 in breast cancer was positively correlated（r=0.68，P＜0.05）.Conclusion There is high level of FoxM1 and ADAM17 in invasive carcinoma，and a positive correlation between them.Positive expression of FoxM1 and ADAM17 is positive association with axillary lymph node metastasis，but not with age and tumor size in patients with invasive carcinoma of the breast.

Breast cancer；Adisintegrin and metalloprotease 17（ADAM17）；FoxM1；Immunohistochemical staining

R737.9

A

1673-7210（2016）07（b）-0092-04

2016-04-03本文編輯：任念）

河北省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（C2010001767）。

▲通訊作者