李潤成，馬　攀，李　淼

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410128）

生豬豬衣原體感染的PCR診斷

李潤成，馬攀，李淼

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410128）

衣原體是介于細菌和病毒之間的一種微生物，豬衣原體可引起生豬結(jié)膜炎、腸炎和肺炎。2015年4月湖南省益陽某規(guī)模豬場，約40%的120～160日齡育肥豬出現(xiàn)眼結(jié)膜發(fā)紅、流淚等癥狀，筆者采用PCR方法檢測了6份鼻拭子和2份眼睛分泌物拭子，并進行了藥物防治，報告如下。

1　發(fā)病情況

2015年4月起，湖南省益陽某規(guī)模豬場120～160日齡的豬群中陸續(xù)出現(xiàn)生豬眼結(jié)膜潮紅，流淚，但食欲和精神狀態(tài)沒有明顯異常，使用磺胺類藥物以及保肝護肝類藥物沒有效果，發(fā)病率約40%左右，一般發(fā)病20 d左右可自行恢復(fù)。

2　實驗室診斷

2.1樣本采集選取發(fā)病癥狀明顯的生豬，采集眼結(jié)膜分泌物棉拭子2份、鼻拭子6份。

2.2PCR檢測

2.2.1DNA的提取將采集的棉拭子放于1 mL滅菌PBS當(dāng)中，混勻后2份眼分泌物棉拭子作為1個樣本，6份鼻拭子2份合成1份作3個樣本進行檢測，共4個樣本。1個樣本各取200 μL提取基因組DNA。提取方法按照試劑盒說明書進行。

2.2.2衣原體的PCR擴增參照文獻［1］合成衣原體科外膜蛋白基因通用引物，以提取的基因組為模板進行PCR擴增。結(jié)果眼分泌物棉拭子和1個鼻拭子混合樣本擴增出了預(yù)期大小的特異性條帶（見圖1）。將PCR產(chǎn)物進行測序（序列已登錄GenBank，登錄號為：KT003536）分析發(fā)現(xiàn)測出序列同豬衣原體相應(yīng)序列同源性達到91.7%

3　防治

選取衣原體敏感藥物強力霉素+葡萄糖+電解多維拌料連喂7 d，觀察豬群情況，進行藥物效果評價。全群飼喂7 d后，沒有新發(fā)病例出現(xiàn)，已發(fā)病的生豬逐漸康復(fù)，眼結(jié)膜恢復(fù)正常，再拌藥飼喂7 d，豬群基本全部恢復(fù)正常。

圖1　衣原體PCR鑒定結(jié)果

4　討論

本文從出現(xiàn)眼結(jié)膜潮紅、流淚的生豬眼分泌物拭子、鼻拭子，通過PCR方法擴增到了豬衣原體基因，共檢測了4個樣本，只有眼分泌物拭子和1個鼻拭子樣本檢測為豬衣原體陽性，其原因可能有：該豬群主要表現(xiàn)為眼睛問題、鼻拭子中豬衣原體檢出率本身較低；DNA提取時模板質(zhì)量不好或是模板濃度過高可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果［2］；陰性樣本來源豬沒有豬衣原體感染；陰性樣本來源豬感染過豬衣原體，但采樣時病原濃度已很低。

本文從出現(xiàn)眼結(jié)膜潮紅、流淚的生豬眼分泌物拭子、鼻拭子，通過PCR方法檢測到了豬衣原體，同時筆者還將拭子進行了細菌分離鑒定，分離到了葡萄球菌、摩拉克菌，鼠鼻羅菌，但未見到巴氏桿菌或波氏桿菌，證明該次生豬眼結(jié)膜潮紅、流淚與萎縮性鼻炎沒有關(guān)系，此外，豬場使用衣原體敏感的藥物可起到控制疫病的作用。因此，可以推斷該豬群眼結(jié)膜炎可能與豬衣原體感染有較大的關(guān)系，至于是否完全是豬衣原體感染引起的結(jié)膜炎，由于只在4個樣本中2個樣本檢測到豬衣原體陽性結(jié)果。但豬衣原體的感染可呈高發(fā)性無癥狀感染或?qū)е律i結(jié)膜炎、關(guān)節(jié)炎、心包炎、漿膜炎、腸炎、肺炎、母豬流產(chǎn)和公豬精囊炎［3］，應(yīng)該受到各養(yǎng)豬工作者及獸醫(yī)的關(guān)注。

［1］李應(yīng)國.動物衣原體分子檢測方法研究和診斷試劑盒的研制及應(yīng)用［D］.重慶：重慶大學(xué)生物工程學(xué)院，2014：37.

［2］閆冬春，董雙林，黃倢.PCR檢測對蝦白斑綜合征病毒（WSSV）中假陰性的探討［J］.海洋與湖沼，2007，38（2）：146-149.

［3］Kristien De Puysseleyr，Leentje De Puysseleyr，Julie Geldhof，et al.Development and Validation of a Real-Time PCR for Chlamydia suisDiagnosis in Swine and Humans［J］.PLOS ONE，2014，9（5）：1-7.

S855.1+1

B

0529-6005（2016）09-0047-01

2015-06-24

李潤成（1979-），男，實驗師，碩士，從事動物傳染病的教學(xué)與研究工作，E-mail：lixuesheng99@126.com