楊瓊瓊，李 東，屈 戀，張 強(qiáng)，劉雄民

（廣西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，廣西 南寧 530004）

澀柿樹皮單寧的純化及抗氧化活性

楊瓊瓊，李 東，屈 戀，張 強(qiáng)，劉雄民*

（廣西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，廣西 南寧 530004）

選用超聲波法從澀柿樹皮中提取單寧，溶劑法、大孔樹脂法純化粗提物，并考察了不同純度的單寧對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基和羥自由基（·OH）的清除作用。結(jié)果表明：澀柿樹皮單寧的超聲波提取率為5.6%；大孔吸附樹脂純化澀柿樹皮單寧的最佳工藝參數(shù)為：以HPD-500樹脂為吸附樹脂，上柱流速1.5 mL/min，上樣質(zhì)量濃度1.2 mg/mL；洗脫流速1.5 mL/min，乙醇體積分?jǐn)?shù)60%；粗提物、乙酸乙酯萃取物、大孔樹脂純化物、乙酸乙酯萃余物經(jīng)大孔樹脂純化后產(chǎn)物、乙酸乙酯萃取物經(jīng)大孔樹脂純化后產(chǎn)物的純度分別為5.6%、11.5%、19.4%、47.4%、53.3%；當(dāng)質(zhì)量濃度為1 mg/mL時(shí)各純度單寧對DPPH自由基有最大清除率，清除率分別為69.07%、80.19%、92.96%、94.02%、94.05%；清除DPPH自由基的IC50值分別為0.68、0.52、0.13、0.12、0.11 mg/mL；當(dāng)質(zhì)量濃度為0.9 mg/mL時(shí)各純度單寧對·OH有最大清除率，清除率分別為43.04%、73.99%、83.00%、94.68%、96.23%。

單寧；純化；抗氧化活性

柿子（Diospyros kaki Thunb.）為柿科（Ebenaceae）柿屬（Diospyros L.）植物，分為甜柿和澀柿兩大類，廣泛分布在溫帶、熱帶和亞熱帶地區(qū)[1]。中國、西班牙、日本、韓國、美國等為主要栽培國家，其中中國在柿栽培面積和產(chǎn)量上均居世界第一位[2]。柿樹果實(shí)具有降血壓、解蛇毒、解酒、抗癌和抗病毒等多種功能[3]。澀柿樹皮即柿科植物的樹皮，《本草圖經(jīng)》記載澀柿樹皮具有主下血和燙火傷的功效，是我國的一味中草藥之一，也是栲膠原料之一。澀柿樹皮含有豐富的柿單寧[4]。柿單寧是主要由兒茶素、棓兒茶素、兒茶素-3-棓酸和棓兒茶素-3-棓酸4 種單體組成的酚類物質(zhì)[5]。

氧自由基活性極大，具有一個(gè)不配對電子，它能奪取與其相遇的分子中的一個(gè)電子與自己配對，這將致使人體內(nèi)的正常生化過程受到干擾，毀壞正常細(xì)胞，對機(jī)體造成傷害。當(dāng)體內(nèi)氧自由基積累過多，就會(huì)引發(fā)心血管、皮膚老化、內(nèi)分泌、新陳代謝以及各類癌癥等許多慢性疾病[6]。澀柿樹皮中含有豐富的多酚基抗氧化化合物（主要為單寧），該物質(zhì)被證實(shí)通過使機(jī)體免于自由基介導(dǎo)損傷而減小慢性疾病的威脅[7]，而單寧被認(rèn)為具有抗誘變、抗癌、抗氧化活性[8]。

關(guān)于柿單寧的研究情況國內(nèi)外研究報(bào)道較多，就抗氧化性方面，國外學(xué)者Ahn[9]、Han[10]等發(fā)現(xiàn)柿種子和柿葉提取物具有自由基清除能力，并能抑制細(xì)胞中脂質(zhì)過氧化。Gorinstein等[11]研究發(fā)現(xiàn)，柿皮和柿果肉對實(shí)驗(yàn)小鼠具有顯著的抗氧化降膽固醇和降血脂功效。Katsubet等[12]研究發(fā)現(xiàn)柿單寧具有抗低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）氧化能力。國內(nèi)學(xué)者顧海峰等[13]制備了不同分子質(zhì)量的柿子單寧，并研究其抗氧化活性，發(fā)現(xiàn)高分子質(zhì)量柿單寧具有較強(qiáng)清除自由基能力。我國對柿樹的開發(fā)利用僅局限于葉子和果實(shí)，從其樹皮中提取具有抗氧化及清除自由基功能的生物活性物質(zhì)尚未見報(bào)道。澀柿樹皮資源在我國極為豐富，經(jīng)過修剪丟棄的柿樹枝可作為長期大量的植物來源。若能把澀柿樹皮中的單寧提取出來，應(yīng)用于抗氧化、降血壓、解蛇毒等方面，并進(jìn)行合理開發(fā)利用，其應(yīng)用前景廣闊，發(fā)展?jié)摿^大。

單寧粗提物中含有大量的蛋白質(zhì)、色素、脂類和糖等雜質(zhì)，因此需要進(jìn)一步分離純化。單寧的分離純化技術(shù)有有機(jī)溶劑萃取法、大孔樹脂法等。乙酸乙酯能夠溶解低聚的縮合單寧和多種水解單寧[14]。大孔吸附樹脂具有吸附量大、吸附速率快、選擇性好、方便再生處理等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于天然產(chǎn)物的初步分離純化[15]。

本研究采用超聲波輔助提取的方法對澀柿樹皮單寧進(jìn)行了提取，分別采用乙酸乙酯萃取法、大孔吸附樹脂法、乙酸乙酯萃取法與大孔吸附樹脂法聯(lián)用分離純化澀柿樹皮粗提物，考察了不同純度的單寧清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基和羥自由基（·OH）的能力，評價(jià)了其抗氧化性能，為澀柿樹皮的開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

澀柿樹皮：2014年7月上旬采自廣西南丹縣，將修剪的枝干剝?nèi)淦とバ静牟糠值玫綐淦?，將樹?0 ℃烘干后粉碎，40 目過篩后低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

DPPH 美國Sigma公司；AB-8、HPD-500、D-101型大孔樹脂 南開大學(xué)化工廠；兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品（分析純） 中國藥品生物制品檢定所；甲醇、濃硫酸、香草醛、無水乙醇均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

多用途恒溫超聲波提取儀 上海比朗儀器有限公司；UV-2550型紫外-可見分光光度計(jì) 日本島津公司。

1.3 方法

1.3.1 澀柿樹皮單寧的提取

將新鮮的澀柿樹皮在恒溫干燥箱中60 ℃烘干，將其粉碎過40 目篩，得到干燥的澀柿樹皮粉末原料。準(zhǔn)確稱取100 g干燥澀柿樹皮粉末加2 000 mL石油醚在60 ℃、360 W、40 min的超聲提取條件下對原料進(jìn)行脫脂，然后揮干石油醚得到干燥脫脂澀柿樹皮粉末。采用超聲波法在提取條件為料液比1∶20（m/V）、70 ℃、360 W條件下提取40 min得到粗提物。

1.3.2 單寧的定量分析[16]

采用香草醛-硫酸法進(jìn)行，分別準(zhǔn)確量取質(zhì)量濃度為0.025、0.050、0.075、0.100、0.125、0.150、0.175、0.200、0.225 mg/mL的兒茶素標(biāo)準(zhǔn)溶液各0.5 mL于9 支10 mL的棕色容量瓶中，依次加入30 mg/mL香草醛-甲醇溶液、30%硫酸-甲醇溶液各2.5 mL，搖勻，30 ℃水浴條件下放置30 min。以甲醇和相應(yīng)體積的試劑做參比液，以0.150 mg/mL兒茶素標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品溶液顯色后，在400～600 nm波長范圍內(nèi)掃描，確定最大吸收波長，再在最大吸收波長處測定系列質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度。以質(zhì)量（X，mg）為橫坐標(biāo)、吸光度（A500nm）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取0.5 mL提取液，與標(biāo)準(zhǔn)樣品同樣方法測定其在工作波長處的吸光度，計(jì)算澀柿樹皮單寧的提取率。

1.3.3 澀柿樹皮單寧樣品的分離與純化

1.3.3.1 乙酸乙酯萃取

100 mL粗提液，用石油醚100 mL萃取1 次，收集水相，水相再用一倍體積的氯仿萃取3 次，收集水相，水相再用二倍體積的乙酸乙酯萃取6 次，合并6 次萃取的乙酸乙酯相，收集乙酸乙酯相和乙酸乙酯萃余相，分別在40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，40 ℃恒溫烘干得到澀柿樹皮單寧的乙酸乙酯萃取物和乙酸乙酯萃余相純化樣品。

1.3.3.2 大孔樹脂的靜態(tài)篩選

稱取已預(yù)處理的AB-8、HPD-500、D-101型大孔樹脂各2 g，分別裝入250 mL三角瓶中，然后加入50 mL已知質(zhì)量濃度的單寧粗提液，置于搖床中，設(shè)置溫度為30 ℃，振蕩速率為110 r/min，振蕩24 h后過濾，然后用體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇50 mL洗脫樹脂，分別測定濾液及洗脫液中單寧的含量，計(jì)算樹脂的吸附率和解吸率，選出最佳大孔吸附樹脂。

1.3.3.3 HPD-500樹脂對澀柿樹皮單寧的分離工藝考察

量取15 mL已預(yù)處理的HPD-500大孔吸附樹脂，濕法裝柱。每次量取300 mL樣品溶液上柱，設(shè)定一定的流速，用分部收集器收集流出液。通過改變上樣液流速（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL/min）和上樣液質(zhì)量濃度（0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mg/mL）確定其最適上樣流速和上樣液質(zhì)量濃度。

吸附完成后，通過改變洗脫流速（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL/min）和乙醇體積分?jǐn)?shù)（20%、40%、60%、80%、90%、95%）的實(shí)驗(yàn)，考察其最適洗脫流速和洗脫劑體積分?jǐn)?shù)。

1.3.4 單寧抗氧化性的測定

1.3.4.1 ·OH的清除作用[17-19]

依次取10 mL容量瓶分別編號(hào)，各加入7.5 mmol/L鄰二氮菲溶液1.0 mL、pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液（phosphate buffered saline，PBS）2.0 mL和7.5 mmol/L FeSO4溶液l.0 mL，混勻后分別加入1.0 mL不同質(zhì)量濃度的樣品溶液，再各加入0.1%的H2O2溶液l.0 mL，并加蒸餾水定容至10 mL。搖勻后，37 ℃水浴保溫1 h，在 510 nm波長處測定其吸光度A1，以蒸餾水代替試樣的吸光度A2，以蒸餾水代替試樣及H2O2的吸光度A0，以消除樣品本身影響，以抗壞血酸作為對照，以蒸餾水作參比液。自由基清除率可用以下公式計(jì)算。

1.3.4.2 DPPH自由基的清除作用[20]

配制濃度為2h10－4mol/L的DPPH自由基-無水乙醇溶液。取樣品溶液2 mL和2 mL DPPH自由基溶液，搖勻，放置30 min，以提取溶劑無水乙醇調(diào)零，在517 nm波長處測定吸光度記為Ai，2 mL無水乙醇加入2 mL DPPH自由基溶液，搖勻，測定吸光度Ac，2 mL樣品溶液加入2 mL無水乙醇，搖勻，測定吸光度Aj。每個(gè)濃度平行測3 次，取平均值。以抗壞血酸（VC）作陽性對照，依照上述方法測定，根據(jù)下式分別計(jì)算樣液和VC對DPPH自由基的清除率。

式中：Aj為樣品自身吸光度；Ac為DPPH自由基本身吸光度；Ai為樣品對DPPH自由基作用后的吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 單寧的定性與定量分析

2.1.1 單寧定性分析結(jié)果

圖1 兒茶素、粗提物溶液的紫外-可見吸收光譜Fig.1 Uv-visible absorption spectra of catechin and the crude extract

由圖1可知，澀柿樹皮中的單寧與兒茶素的光譜特征相似，說明樣品中含有單寧。

2.1.2 單寧定量分析結(jié)果

經(jīng)香草醛-硫酸法顯色后，兒茶素標(biāo)準(zhǔn)溶液在500 nm波長處有最大吸收，以吸光度A500nm和兒茶素質(zhì)量X得到回歸方程為：A500nm=6.185 1X+0.006 6（R2=0.999 5）。由此可得澀柿樹皮單寧的提取率為5.6%。

2.2 澀柿樹皮單寧分離純化工藝的確定

2.2.1 大孔樹脂的篩選

表1 3 種大孔樹脂對樣品中單寧的靜態(tài)吸附和解吸結(jié)果Table 1 Adsorption and desorption efficiency of tannin using three types of resins

以樹脂對單寧的吸附能力與解吸能力為指標(biāo)，通過樹脂靜態(tài)吸附與解吸實(shí)驗(yàn)選擇樹脂類型，結(jié)果如表1所示。在實(shí)驗(yàn)條件下，HPD-500型樹脂對澀柿樹皮中單寧的吸附作用最好，吸附率達(dá) 70.95%，解吸率為95.66%。D101型樹脂解吸率雖然最高，達(dá)97.44%，但吸附率比HPD-500型樹脂稍低。綜合比較這兩種樹脂，選用HPD-500型大孔樹脂進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)。

2.2.2 吸附流速對HPD-500樹脂吸附澀柿樹皮單寧的影響

由圖2可知，樹脂的吸附率隨著流速的增加而降低。當(dāng)上柱流速在0.5～1.5 mL/min時(shí)吸附率均達(dá)到86%以上且差別不大，之后流速加大吸附率降低顯著，這是因?yàn)樯现魉龠^大，大量單寧還來不及被樹脂充分吸附便流出樹脂柱。雖然較低的流速對吸附率大，但流速過低，耗時(shí)長，工作效率低，經(jīng)綜合考慮確定，以1.5 mL/min的流速進(jìn)行上柱較為適宜。

圖2 不同流速對HPD-500樹脂吸附澀柿樹皮單寧效果的影響Fig.2 Effect of sample loading flow rate on adsorption efficiency of tannin

2.2.3 上樣質(zhì)量濃度對HPD-500樹脂吸附澀柿樹皮單寧的影響

圖3 樣液質(zhì)量濃度對HPD-500樹脂吸附澀柿樹皮單寧效果的影響Fig.3 Effect of sample concentration on adsorption efficiency of tannin

如圖3所示，HPD-500型大孔樹脂的吸附量隨單寧質(zhì)量濃度的升高而增大，吸附率隨單寧質(zhì)量濃度增大而降低。雖然單寧質(zhì)量濃度為0.4 mg/mL時(shí)吸附率最大，但其吸附量僅為5.77 mg/g，樹脂吸附能力未得到充分發(fā)揮。質(zhì)量濃度為1.2 mg/mL時(shí)，吸附率為88.74%，樹脂吸附量已達(dá)10.51 mg/g，吸附率和吸附量均較高。綜合考慮，選擇質(zhì)量濃度為1.2 mg/mL比較適宜。

2.2.4 不同解吸流速對澀柿樹皮單寧洗脫的影響

如圖4所示，樹脂的解吸率隨著流速的增加而降低。當(dāng)流速在0.5～1.5 mL/min時(shí)吸附率均達(dá)到94%以上且差別不大，之后流速加大解吸率降低顯著，這可能是因?yàn)榱魉龠^快，洗脫劑未能與被吸附的單寧充分作用而將其從大孔樹脂的吸附位點(diǎn)上置換出來。雖然較低的流速解吸率大，但流速過低，耗時(shí)長，工作效率低，經(jīng)綜合考慮確定，以1.5 mL/min的流速進(jìn)行解吸較為適宜。

圖4 不同洗脫流速對澀柿樹皮單寧解吸的影響Fig.4 Effect of elution flow rate on desorption efficiency

2.2.5 不同洗脫劑體積分?jǐn)?shù)對澀柿樹皮單寧洗脫的影響

澀柿樹皮單寧類化合物經(jīng)樹脂柱吸附后，再將其從樹脂上洗脫下來才能達(dá)到分離純化的目的。水和乙醇溶液的洗脫效果較好[21]。考慮到澀柿樹皮一般應(yīng)用在中藥行業(yè)中，本實(shí)驗(yàn)選用無毒性的乙醇-水作解吸劑，研究乙醇體積分?jǐn)?shù)對解吸率的影響，其結(jié)果如圖5所示。由于單寧化合物能與大孔樹脂間產(chǎn)生強(qiáng)烈的氫鍵作用，所以吸附在樹脂上的單寧類物質(zhì)不會(huì)被水洗脫下來。澀柿樹皮單寧的性質(zhì)不同與大孔樹脂之間的吸附作用強(qiáng)度也不同。體積分?jǐn)?shù)較低的乙醇只能使少部分單寧洗脫下來，并且隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加，樹脂的解吸率顯著增加。當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)增加到60%時(shí)，解吸率達(dá)到最大，之后略有降低。故選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%。

圖5 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇對澀柿樹皮單寧洗脫效果的影響Fig.5 Effect of ethanol concentration on desorption efficiency

2.3 樣品純度分析

采用不同的純化方法純化樣品液，經(jīng)香草醛-硫酸法顯色測定單寧純度。結(jié)果如表2所示，不同純化方法得到的樣品純度各不相同。粗提物經(jīng)乙酸乙酯萃取后純度約為粗提物的2 倍，經(jīng)大孔樹脂純化后純度約為粗提物的3 倍。乙酸乙酯萃取后的萃余相經(jīng)HPD-500型樹脂純化后所得產(chǎn)物的純度約為粗提物的8 倍，乙酸乙酯萃取后的萃取相經(jīng)HPD-500型樹脂純化后所得產(chǎn)物的純度約為粗提物的10 倍。采用溶劑萃取與大孔樹脂聯(lián)用方法得到的澀柿樹皮單寧純度高于文獻(xiàn)[22]柿葉多酚純度。

表2 樣品純度分析結(jié)果Table 2 Purity of the crude extract and purified samples

可見，單寧粗提物雜質(zhì)含量較多，很難經(jīng)過簡單的某種純化方法達(dá)到很好的分離效果，這也正是天然產(chǎn)物分離的難點(diǎn)，如果能解決這一問題，將有利于促進(jìn)我國中藥現(xiàn)代化進(jìn)程。

2.4 澀柿樹皮單寧對DPPH自由基的清除效果

考察了單寧酸、不同純度的單寧質(zhì)量濃度在0.10～1.00 mg/mL時(shí)對DPPH自由基的清除率（圖6），在實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，清除率隨各試樣質(zhì)量濃度的增加而增大。各試樣均在質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL時(shí)有最大清除率，最大清除率分別為69.07%、80.19%、92.96%、94.02%、94.05%；清除DPPH自由基的IC50值分別為0.68、0.52、0.13、0.12、0.11 mg/mL；其中大孔樹脂純化物、乙酸乙酯萃余物經(jīng)大孔樹脂純化后產(chǎn)物、乙酸乙酯萃取后經(jīng)大孔樹脂純化后產(chǎn)物在質(zhì)量濃度為0.5 mg/mL時(shí)與等質(zhì)量濃度的單寧酸對清除DPPH自由基能力幾乎相同，均達(dá)到90%以上，表現(xiàn)出較高清除能力。依據(jù)IC50值，單寧對DPPH自由基清除能力次序?yàn)椋阂宜嵋阴ポ腿『蠼?jīng)大孔樹脂純化后產(chǎn)物＞乙酸乙酯萃余物經(jīng)大孔樹脂純化后產(chǎn)物＞大孔樹脂純化物＞乙酸乙酯萃取物＞粗提物，與圖6反映的結(jié)果一致。

圖6 不同質(zhì)量濃度樣品對DPPH自由基的清除率Fig.6 Percentage scavenging of different samples for DPPH radical

2.5 澀柿樹皮單寧對·OH的清除效果

考察了單寧酸、不同純度的單寧質(zhì)量濃度在0.10～0.90 mg/mL時(shí)對·OH的清除率，結(jié)果見圖7。在實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，清除率隨各試樣質(zhì)量濃度的增加而增大。各試樣均在質(zhì)量濃度為0.90 mg/mL時(shí)有最大清除率，最大清除率分別為43.04%、73.99%、83.00%、94.68%、96.23%，其中大孔樹脂純化物、乙酸乙酯萃余物經(jīng)大孔樹脂純化后產(chǎn)物、乙酸乙酯萃取后經(jīng)大孔樹脂純化后產(chǎn)物均比同等質(zhì)量濃度的單寧酸對清除·OH能力強(qiáng)。

圖7 不同質(zhì)量濃度樣品對·OH的清除率Fig.7 Percentage scavenging of different samples for ·OH

綜上可知，不同純度的澀柿樹皮單寧的DPPH自由基和 ·OH清除能力差異較大。雖然DPPH自由基和 ·OH清除率數(shù)據(jù)略有區(qū)別，但是總體趨勢一致，即大孔樹脂純化物、乙酸乙酯萃余物經(jīng)大孔樹脂純化后產(chǎn)物、乙酸乙酯萃取后經(jīng)大孔樹脂純化后產(chǎn)物的抗氧化活性較強(qiáng)，粗提物和乙酸乙酯萃取物較弱。造成DPPH自由基和·OH清除率差異的原因可能是兩者的反應(yīng)條件與機(jī)理不同[23]。另外，本實(shí)驗(yàn)中澀柿樹皮單寧的DPPH自由基和·OH清除率高于文獻(xiàn)[24]中柿葉多酚對這兩種自由基的清除率，略低于文獻(xiàn)[25]柿果不同部位單寧對這兩種自由基的清除率，原因可能是澀柿樹皮單寧含量高于柿葉單寧含量，低于柿果單寧含量。

3 結(jié) 論

以澀柿樹皮粗提物為原料，考察各種大孔樹脂對單寧的動(dòng)態(tài)吸附效率，篩選出了對澀柿樹皮單寧純化效果較好的大孔樹脂為HPD-500，其吸附率為70.95%，解吸率為95.66%，HPD-500樹脂動(dòng)態(tài)純化的較適工藝參數(shù)為：上柱流速1.5 mL/min，上樣質(zhì)量濃度1.2 mg/mL，洗脫流速1.5 mL/min，洗脫劑的乙醇體積分?jǐn)?shù)60%。

分離、純化得到了不同純度的澀柿樹皮單寧，并分析了不同純度的澀柿樹皮單寧抗氧化活性。結(jié)果表明，不同純化方法得到單寧樣品純度差異較大，說明單寧類物質(zhì)是個(gè)極復(fù)雜的混合物，很難通過簡單的純化方法得到高純度單寧。不同純度的澀柿樹皮單寧對DPPH自由基和·OH均有一定的清除作用，各單寧樣品的自由基清除能力呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。總體上看，大孔樹脂純化物、乙酸乙酯萃余物經(jīng)大孔樹脂純化后產(chǎn)物、乙酸乙酯萃取物經(jīng)大孔樹脂純化后產(chǎn)物的抗氧化活性較強(qiáng)，值得進(jìn)一步提純與研究。

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Purification and Antioxidant Activity of Tannin from Persimmon Tree Bark

YANG Qiongqiong, LI Dong, QU Lian, ZHANG Qiang, LIU Xiongmin*
(School of Chemistry and Chemical Engineering, Guangxi University, Nanning 530004, China)

Tannin in persimmon tree bark was ultrasonically extracted. The crude extract was purified by organic solvent extraction and macroporous resin adsorption. The free radical scavenging activity of tannin samples with different purities was studied using two different systems. The extraction yield of tannin in the crude extract was 5.6%. The optimum conditions for purifying the crude extract with HPD-500 macroporous resin were as follows: a sample containing 1.2 mg/mL tannin was loaded onto the column at a flow rate of 1.5 mL/min and eluted with 60% ethanol at a flow rate of 1.5 mL/min. The purity of the crude extract was 5.6%, which was increased to 19.4% after macroporous resin purification. After ethyl acetate extraction of the crude extract, the extract phase was purified to a purity of 11.5%. After further purification by macroporous resin adsorption， the purity of the raffinate and extract phases was increased to 47.4% and 53.3%, respectively. The crude extract and the resulting purified samples exhibited maximum percentage （69.07%, 92.96%, 80.19%, 94.02% and 94.05%, respectively) of DPPH radical scavenging activity at 1 mg/mL with an IC50value of 0.68, 0.13, 0.52, 0.12 and 0.11 mg/mL, respectively. The maximum percentage scavenging (43.04%, 83.00%, 73.99%, 94.68% and 96.23%, respectively) of ·OH by the tannin samples with different purities at 0.9 mg/mL was obtained.

tannin； purification； antioxidant activity

10.7506/spkx1002-6630-201607010

TS209

A

1002-6630（2016）07-0050-06

楊瓊瓊, 李東, 屈戀, 等. 澀柿樹皮單寧的純化及抗氧化活性[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(7): 50-55. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201607010. http://www.spkx.net.cn

YANG Qiongqiong, LI Dong, QU Lian, et al. Purification and antioxidant activity of tannin from persimmon tree bark[J]. Food Science, 2016, 37(7): 50-55. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201607010. http://www.spkx.net.cn

2015-05-08

廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)項(xiàng)目（桂科攻 1099061-2；桂科攻 12118008-2）

楊瓊瓊（1989—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物的提取分離純化及活性。E-mail：m15578000363@163.com

*通信作者：劉雄民（1969—），男，教授，博士，研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物的提取分離純化及活性。E-mail：xmliu1@gxu.edu.cn