徐文泱，廖燕芝，孫桂芳，陳同強，黃忠意，李燦

（湖南省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院，長沙 410017）

氣相色譜-質(zhì)譜法檢測豆制品中的二甲基黃＊

徐文泱，廖燕芝，孫桂芳，陳同強，黃忠意，李燦

（湖南省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院，長沙 410017）

建立氣相色譜-質(zhì)譜法測定豆制品中二甲基黃的方法。考察了不同樣品前處理方法對回收率的影響。試樣用dSPE純化管超聲凈化后，以10 mL乙腈提取。樣品溶液經(jīng)毛細管氣相色譜柱HP-5MS分離，以質(zhì)譜檢測器（MSD）測定其中的二甲基黃含量。二甲基黃的質(zhì)量濃度在0.05～1.5 ng/mL范圍內(nèi)與響應值呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.999 1，檢出限為0.005 mg/kg。加標水平為0.005～1.0 mg/kg時的平均回收率為70%～88%，測定結(jié)果的相對標準偏差為2.5%～8.0%（n=6）。該方法凈化效果好，靈敏度高，適合于豆制品中二甲基黃的檢測。

氣相色譜-質(zhì)譜法；二甲基黃；豆制品；dSPE純化管

二甲基黃（即對二甲氨基偶氮苯）常被用于工業(yè)染色劑，具有著色能力強的特點。二甲基黃的價格與食品水溶性色素相仿，但其著色能力卻是食品水溶性色素的100倍，主要用于石蠟、聚氯乙烯、石油和肥皂的著色染色。偶氮類物質(zhì)多含有R-N=N-R鍵和其它芳香環(huán)或其衍生物的結(jié)構(gòu)，其在人體內(nèi)代謝物苯胺和萘胺分別被國際癌癥機構(gòu)列為三級致癌物和一級致癌物［1-2］。因此二甲基黃作為偶氮類化合物被禁止用作食品添加劑。

2014年香港食物安全中心曾公布，臺灣德昌制造的黑胡椒豆干檢出不準在食物中使用的染色料二甲基黃，但目前食品中二甲基黃的定量測定尚未有國家、地方或行業(yè)標準，文獻也鮮有報道。Ferrer Amate［3］以乙腈提取調(diào)味品中的二甲基黃，并以LC-MS-MS進行分析，得到加標量在0.05～0.5 mg/kg之間其回收率為85%～155%，檢出限視調(diào)味料基質(zhì)不同而有所區(qū)別，最低的為0.05 mg/kg。張協(xié)光［4］采用固相萃取的前處理方式，通過UPLC-MS-MS對調(diào)味品、雞蛋以及夾心餅干的二甲基黃進行了測定，線性范圍為2.5～2 500 μg/kg。

目前二甲基黃檢測方法的研究雖然較少，但很多食用著色劑及非法添加工業(yè)色素的分析方法已經(jīng)很成熟，其中色譜類儀器分析發(fā)揮著重要的作用［5-9］。Calbianl［10］等采用LC-TQ-MS/MS法測定辣椒、番茄醬、乳酪調(diào)味料中的蘇丹紅I-IV，用電噴霧離子源檢測，定量限小于50 μg/kg。喻凌寒［11］等研究了高效液相色譜-電噴霧離子阱質(zhì)譜聯(lián)用儀測定辣椒粉和辣椒油中蘇丹紅B、蘇丹紅G、蘇丹紅7B、甲苯胺紅等7種工業(yè)染料的方法。筆者通過對不同前處理方法進行試驗，確定采用氣相色譜-質(zhì)譜法測定豆制品中的二甲基黃，用分散固相萃取法對樣品進行前處理，該方法除雜效果好，檢出限低、精密度高，可用于豆制品的二甲基黃日常檢測，為地方標準、國家標準的制定提供技術(shù)依據(jù)。

1　實驗部分

1.1主要儀器與試劑

氣相色譜質(zhì)譜儀：7890A-5975C型，美國Agilent公司；

高速冷凍離心機：5804R型，德國Eppendorf公司；

電子天平：BS224s型，北京賽多利斯公司；

超聲波清洗器：KQ-250DB型，昆山市超聲儀器有限公司；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：RE52A型，上海亞榮生化儀器廠；

dSPE分散固相萃取袋裝緩沖鹽、dSPE純化管：上海安譜科學儀器有限公司；

二甲基黃標準品（CAS 60-11-7）：純度不低于98.5%，美國Supelco Analytical公司；

乙腈：色譜純；

二甲基黃標準溶液：準確稱取二甲基黃50 mg于10 mL容量瓶中，以乙腈定容至標線，于-20℃保存，使用時以乙腈稀釋成標準工作溶液，于4℃下保存；

豆制品樣品：由長沙牙癢癢食品有限公司提供（不含二甲基黃）；

實驗用水為二次去離子水。

1.2儀器工作條件

1.2.1色譜條件

色譜柱：HP-5 MS柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；柱溫：60℃（保持1 min），以20℃/min升至180℃（保持3 min），以10℃/min升至280℃（保持2 min）；進樣口溫度：220℃；進樣方式：不分流進樣；進樣體積：1 μL。

1.2.2質(zhì)譜條件

四極桿溫度：150℃；離子源溫度：230℃；輔助加熱口溫度：270℃；電離方式：EI；電離能量：70 eV；溶劑延遲時間：5 min。

采用選擇離子檢測掃描方式（SIM）監(jiān)測，若在16.5 min（±0.5%）附近有峰出現(xiàn)，定性離子77，106，120，206都出現(xiàn)，且各碎片離子的相對豐度比及允許的相對誤差符合表1要求，則確定樣品中含有二甲基黃。

表1　定性測定時相對離子豐度的最大允許誤差

1.3樣品處理方法

稱取5 g豆干樣品，加入5 mL水和dSPE分散固相萃取袋裝緩沖鹽后超聲10 min，再加入10 mL乙腈渦混10 min后，提取上清液，并在40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，定容至1 mL，加入PSA凈化，離心后取清液上機。

2　結(jié)果與討論

2.1色譜柱的選擇及色譜條件的確定

二甲基黃為弱極性偶氮類化合物，經(jīng)查閱文獻［12-13］可知，對二甲基黃的氣相色譜-質(zhì)譜檢測采用弱極性色譜柱，因此本實驗以HP-5MS作為分離柱。若將升溫程序的初始溫度升高會產(chǎn)生較多的干擾雜峰，在保證分離效果的前提下將初始溫度設置為60℃。目標色譜峰約在280℃左右出峰，如果此段時間升溫速率過快，則雜質(zhì)峰增多，干擾測定結(jié)果；若升溫速率較慢，則將延長分析時間，不利于分析效率的提高。因此檢測目標峰附近的程序升溫速率選擇為10℃/min。

2.2樣品凈化方法的選擇

在不含二甲基黃的豆制品中添加二甲基黃標準品，添加水平為0.01 mg/kg，按以下3種方法對樣品進行處理，然后分別平行測定3次，計算加標回收率，結(jié)果見表2。

方法1：稱取5 g 豆干樣品，加入5 mL水和4 g NaCl后超聲10 min，加入10 mL乙腈渦混10 min后離心提取上清液，并在40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，定容至1 mL后離心上機。

方法2：稱取5 g 豆干樣品，加入5 mL水和4 g NaCl后超聲10 min，加10 mL乙腈渦混10 min后離心，上清液過MIP-SDR柱，并在40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，定容至1 mL后離心上機。

方法3：見1.3中的方法。

表2　不同樣品處理方法回收率結(jié)果

由表2可知，方法1直接提取不經(jīng)凈化后濃縮上機，儀器上的目標物響應值不高，回收率偏低；方法2選取了檢測蘇丹紅染料常用的SPE小柱進行前處理，儀器上未出現(xiàn)目標峰，有可能是因為該小柱填料為強極性吸附劑，不適合處理二甲基黃此類極性偏弱的化合物；方法3為改進的QuECHERS方法，一般在提取過程中使用乙腈為溶劑進行萃取，同時加入無水硫酸鎂和氯化鈉促使液液分離并除去水分，隨后通過乙二胺基-N-丙基等固相材料吸附樣品提取液中的類脂雜質(zhì)，將凈化后的上清液進行測定。由于稱樣量較少，為提高儀器的響應值，故將乙腈萃取離心的上清液濃縮后再進行凈化，回收率符合GB/T 27404-2008 《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測》附錄F的相關(guān)要求。綜合考慮，本實驗采用方法3對樣品進行前處理。

按1.3中的方法對樣品進行前處理，在1.2儀器工作條件下進行測定，二甲基黃標準物質(zhì)及加標豆制品樣品的TIC圖和SIM圖分別見圖1、圖2、圖3。由圖1～圖3可知，采用本方法可以分離豆制品中的二甲基黃并進行分析。

圖1　二甲基黃標準物質(zhì)的總離子流圖

圖2　二甲基黃標準物質(zhì)的質(zhì)譜圖

圖3　加標豆干樣品的總離子流圖

2.3標準曲線及檢出限

取空白樣品，用1.3中的方法3進行處理，然后用所得的空白基質(zhì)溶液將二甲基黃標準溶液稀釋至0.05，0.1，0.5，1.0，1.5 ng/mL的系列標準工作溶液，分別測定。以二甲基黃的質(zhì)量濃度（x）為橫坐標，以響應值（y）為縱坐標進行線性回歸，得線性方程為y=2.910×105x，線性相關(guān)系數(shù)r=0.999 1，線性滿足GB/T 27404-2008 《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測》附錄F的要求。以S/N=3時計算檢出限，經(jīng)計算該方法測定二甲基黃的檢出限為0.005 mg/kg。

2.4精密度和回收率

在不含二甲基黃的豆制品樣品中添加標準物質(zhì)，添加水平分別為0.005，0.02，1.0 mg/kg。平行測定6次，計算相對標準偏差和加標回收率，結(jié)果見表3。由表3可知，加標回收率在70%～88%之間，相對標準偏差不超過10%，表明在規(guī)定的測定條件下，回收率較高，重現(xiàn)性良好。

表3　精密度與回收試驗結(jié)果

3　結(jié)語

建立了dSPE固相萃取結(jié)合GC-MS測定豆制品中的二甲基黃的方法，該方法操作簡便，凈化效果好，回收率、精密度等參數(shù)均滿足檢測要求，可用于豆制品中二甲基黃的定量分析。

［1］ Ali M，Al-Ghor A K，Sharaf H，et al. Genotoxic effects of the food color （carmoisine）on the chromosome of bone marrow cells of rat［J］.Toxicol Lett，1998，95∶ 44-44.

［2］ Sweenery E，Chipman J，F(xiàn)orsythe S. Evidence for direct-acting oxidative genotoxicity by reduction products of azo dyes［J］. Environ Health Perspecft ，1994，102（6）∶ 119-122.

［3］ Ferrer Amate C，Unterluggauer H，F(xiàn)ischer R J，et al. Development and validation of a LC-MS/MS methods for the simultaneous determination of aflatoxins，dyes and pesticides in spices［J］. Anal Bioanal Chem，2012，397∶ 93-107.

［4］ 張協(xié)光，曾泳艇，黎永樂.固相萃取-超高效液相串聯(lián)質(zhì)譜同時測定食品中蘇丹橙G、二甲基黃、蘇丹黑B［J］.廣東化工，2012（1）∶ 109-110.

［5］ 劉劭鋼，梁逸曾，龔小娟.豆制品中“金黃粉”含量的測定［J］.分析化學研究報告，2004（32）∶ 697-697.

［6］ 蘇小川，黃梅，甘賓賓，等.氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定調(diào)味品中蘇丹紅I、Ⅱ色素［J］.理化檢驗：化學分冊，2006，42（12）∶1 003-1 006.

［7］ 劉永波，趙海峰，張明霞.超聲波提取-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測定蘇丹紅I殘留量［J］.分析試驗室，2006，25（4）∶ 86-88.

［8］ 吳彥蕾，林曉洋，胡靖，等.高效液相色譜法快速檢測食品中18種色素［J］.食品工業(yè)科技，2013，34∶ 49-56.

［9］ Leonardo D D，Loredana M，F(xiàn)abio M，et al. Assay of sudan I contamination of foodstuff by atmospheric pressure chemical ionization tandem mass spectrometry and isotope dilution［J］. Anal Chem，2004，76（17）∶ 5 104-5 108.

［10］ Calbiani F，Carer1 M，Elvir1 L，et al. Development and inhouse validation of a liquid chromatography electrospray tandem mass spectrometry for the simultaneous determination of Sudan in hot chili product［J］. J Chromatogr A，2004，1 042∶ 123-130.

［11］ 喻凌寒，宋之光，蘇流坤，等.高效液相色譜-離子阱質(zhì)譜聯(lián)用測定食品中7種蘇丹紅類染料［J］.質(zhì)譜學報，2006，27（4）∶221-225.

［12］ 李桂生，陳桂琴，楊戈，等.凝膠色譜凈化/氣質(zhì)聯(lián)用法測定即食豆制品中二甲基黃［J］.分析試驗室，2015（12）∶ 1 399-1 402.

［13］ 夏棟，丁安幫，施祖灝，等.氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定豆干中的二甲基黃［J］.糧油加工：電子版，2015（8）∶ 56-58.

國家藥典委員會啟動國外藥品標準追蹤與研究項目

為了深入了解國外藥典標準情況，借鑒國外先進經(jīng)驗，提升中國藥品標準水平，國家藥典委于2016年3月10日在京組織部分省市藥檢所的專家就啟動國外藥品標準追蹤與研究課題項目召開研討會。

經(jīng)過熱烈的討論，與會同志一致認為，組織開展國外藥品標準情況追蹤研究工作，不僅對我國藥品標準事業(yè)發(fā)展意義重大，還可以為促進世界各國藥典機構(gòu)的交流與合作搭建平臺，并為擴大中國藥典的國際影響力創(chuàng)造機遇和空間。

研討會進一步明確了項目的具體實施辦法，與會各方依據(jù)自身優(yōu)勢主動認領(lǐng)任務，對藥品標準跟蹤研究按照國別進行了分工。

研討會明確了項目研究成果可通過世界藥典之窗網(wǎng)站、《中國藥品標準》雜志和專題報告等載體多角度、多層次、多維度地展現(xiàn)，使業(yè)界快捷、準確、全面了解各國藥品標準動態(tài)，促進藥品標準的完善和藥品質(zhì)量的提高。

會議一致認為該項目的啟動勢在必行，符合中央提出的建立“最嚴謹?shù)臉藴省焙蛧鴦赵翰渴鸬摹皩藝H先進標準，實施藥品標準提高行動”的要求。

研討會還就藥品標準工作成果認定評估工作進行了研究。

（儀器信息網(wǎng)）

質(zhì)檢總局成立國家計量戰(zhàn)略專家咨詢委員會

4月8日，國家計量戰(zhàn)略專家咨詢委員會成立暨委員會第一次全體會議在京召開。質(zhì)檢總局局長支樹平到會致辭，并為委員會委員頒發(fā)聘書。質(zhì)檢總局副局長吳清海主持會議。質(zhì)檢總局黨組成員李元平、總工程師韓毅出席會議。中國工程院院士、清華大學精密儀器與機械學系教授金國藩受聘為主任委員，中國政法大學終身教授應松年、全國人大環(huán)境和資源委員會委員蒲長城受聘為副主任委員。

支樹平在致辭中指出，計量不僅是控制質(zhì)量、提升質(zhì)量、創(chuàng)造更高質(zhì)量的基礎，也是經(jīng)濟運行、社會發(fā)展的保障。特別是在科技迅速發(fā)展和經(jīng)濟全球化的今天，計量被賦予新的內(nèi)涵和使命。質(zhì)檢總局作為計量工作主管部門，成立專家咨詢委員會，就是要邀請專家提出前瞻性、專業(yè)化、建設性的政策建議，發(fā)揮好咨政建言、理論創(chuàng)新、輿論引導、社會服務等作用，為計量事業(yè)發(fā)展提供智力支持。

支樹平表示，希望專家咨詢委員會在推動計量事業(yè)發(fā)展方面發(fā)揮突出的指導作用。近年來我國計量科技水平顯著提高，逐步建立起科學的計量工作體系，但在計量科技方面，仍存在一定差距，整體處于從“跟跑”向“并跑”過渡階段，期望各位專家能幫助把握科學技術(shù)和經(jīng)濟社會發(fā)展方向，對接國家重大發(fā)展規(guī)劃和發(fā)展戰(zhàn)略，推動計量事業(yè)發(fā)展。希望專家咨詢委員會在推動計量服務經(jīng)濟社會發(fā)展方面發(fā)揮突出的指導作用。中央對經(jīng)濟社會發(fā)展形勢的新研判，對計量事業(yè)發(fā)展提出新要求。計量工作要全面對接國家戰(zhàn)略，支撐和引領(lǐng)經(jīng)濟社會發(fā)展，讓全社會分享更多的“計量紅利”。期望各位專家加強指導，推動計量工作更好地融入經(jīng)濟社會發(fā)展大局。希望專家咨詢委員會在推動質(zhì)量強國建設方面發(fā)揮突出的指導作用。近年來，我國質(zhì)量總體水平不斷提升，但質(zhì)量水平的提高依然滯后于經(jīng)濟社會發(fā)展，質(zhì)量監(jiān)管能力和供給水平還不能滿足人民群眾日益增長的質(zhì)量安全需求。期望各位專家加強質(zhì)量研究，弘揚質(zhì)量文化，引領(lǐng)全社會關(guān)心質(zhì)量、重視質(zhì)量，掀起加快建設質(zhì)量強國的新高潮。

吳清海指出，計量廣泛應用于經(jīng)濟建設、社會管理和百姓生活的方方面面，是保障經(jīng)濟和社會正常運轉(zhuǎn)的重要技術(shù)手段。專家咨詢委員會的成立能夠更好地從經(jīng)濟、科技、法制、國防等多個維度和角度提供咨政建言，發(fā)揮好我國計量事業(yè)“領(lǐng)頭雁”的作用，當好我國計量服務經(jīng)濟社會發(fā)展的“領(lǐng)航員”，并在建設質(zhì)量強國中擔當國家的“智囊團”。

（儀器信息網(wǎng)）

東盟國家成員到廣研檢測參觀交流

2016年4月14日，廣研檢測迎來了一群特殊的客人——東盟（ASEAN）成員。

4月14日上午10時許，ASEAN的20多名成員到訪廣研檢測參觀考察。公司總經(jīng)理彭兵先生、廣研檢測首席專家賀石中教授熱情接待了來訪客人，并陪同客人參觀了廣研檢測國際領(lǐng)先的油液檢測實驗室、故障診斷中心以及展覽室，雙方進行了友好交流?？腿藢V研檢測智能化實驗室及在線油液監(jiān)測系統(tǒng)給以高度評價。ASEAN是東南亞地區(qū)以經(jīng)濟合作為基礎的政治、經(jīng)濟、安全一體化合作組織，其成員國有馬來西亞、印度尼西亞、泰國、菲律賓、新加坡、文萊、越南、老撾、緬甸和柬埔寨。

（儀器信息網(wǎng)）

Determination of Dimethyl Yellow in Bean Products by Gas Chromatography-Mass Spectrometry

Xu Wenyang， Liao Yanzhi， Sun Guifang， Chen Tongqiang， Huang Zhongyi， Li Can
（Hunan Research Institute of Food Quality Supervision and Inspection， Changsha 410017， China）

A method for determination of dimethyl yellow in bean products with GC-MS was eastablished. The samples were extracted by 10 mL acetonitrile with dSPE purified column. The sample solution was separated by HP-5 MS， then dimethyl yellow in it was detected by MSD. The mass concentration of dimethyl yellow was linear with response value in the range of 0.05-1.5 ng/mL with correlation coefficient of 0.999 1， the detection limit was 0.005 mg/kg. The recoveries of dimethyl yellow were in the range of 70%-88% at spiked levels of 0.005-1.0 mg/kg，the relative standard deviation of detection results were 2.5%-8.0%（n=6）. The method has good sensitivity and purification effect， which is suitable for the determination of dimethyl yellow in bean products.

GC-MS； dimethyl yellow； bean product； dSPE

O657.7

A

1008-6145（2016）03-0034-04

10.3969/j.issn.1008-6145.2016.03.009

*湖南省食品藥品安全科技項目（湘食藥科R201517）

聯(lián)系人：徐文泱；E-mail∶ xuwenyang0714@163.com

2016-03-12