韓群

（青島市黃島區(qū)檢驗檢測中心，山東青島 266555）

凝膠凈化-氣相色譜法測定植物油脂中特丁基對苯二酚

韓群

（青島市黃島區(qū)檢驗檢測中心，山東青島 266555）

采用凝膠凈化色譜進行樣品前處理，氣相色譜法定量測定油脂樣品中特丁基對苯二酚。研究了二次凈化對測定結(jié)果的影響，結(jié)果顯示在16.5～32.5 min進行二次凈化，方法回收率在92.6%～94.1%之間，特丁基對苯二酚的檢出限為1 μg/mL，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 8，4水平加標樣品測定結(jié)果的相對標準偏差為2.34%～6.19%（n=6）。該法測量精密度和準確度滿足方法學(xué)要求，適用于大批量植物油樣品中特丁基對苯二酚的檢測。

凝膠凈化色譜；氣相色譜法；植物油；特丁基對苯二酚

特丁基對苯二酚（Tert-butyl hydroquinone，TBHQ）是食品中比較常見的抗氧化劑，與傳統(tǒng)的丁基羥基茴香醚、 2，6-二丁基羥基甲苯等抗氧化劑相比，其抗氧化性能更強［1］；另外，TBHQ對熱相對穩(wěn)定［2］，添加在油脂樣品中無任何異味。但TBHQ對人體有一定的毒性［3］，長期儲存或反復(fù)烹飪會使TBHQ分解，其代謝物特丁基對苯醌具有較大毒性［4］。GB 2760-2014中明確規(guī)定食用植物油中TBHQ最大添加量為200 mg/kg。

TBHQ常見的檢測方法有比色法、液相色譜法、氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法等［5］。筆者采用凝膠色譜凈化去除油脂，以氣相色譜法進行定量，該法操作簡便，測定快速，測定結(jié)果準確。

1　實驗部分

1.1主要儀器與試劑

氣相色譜儀：7890A型，安捷倫科技有限公司；全自動凝膠凈化色譜儀（GPC）：Preplinc EV3型，配自動濃縮系統(tǒng)，美國J2公司；

乙酸乙酯、環(huán)己烷：色譜純，德國Merck試劑公司；

TBHQ標準品：含量不小于98.5%，上海安譜科學(xué)儀器公司；

一級大豆油：市購。

1.2凝膠色譜條件

色譜柱：Bio Beads（S-X3）型玻璃柱（400 mm×25 mm）；流動相：乙酸乙酯-環(huán)己烷混合液（體積比為1∶1），流量為5 mL/min；檢測器：UV；檢測波長：254 nm。

1.3氣相色譜條件

色譜柱：DB-17MS型毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；進樣口溫度：230℃；進樣體積：1 μL；進樣方式：不分流進樣；柱溫箱溫度：起始溫度為80℃，保持1 min，以10℃/min升溫至250℃，保持2 min；載氣：N2，流量為1 mL/min；檢測器溫度：250℃；氫氣流量：30 mL/min；空氣流量：300 mL/min；尾吹氣流量：30 mL/min。

1.4實驗方法

準確稱取1 g左右的油脂樣品于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯-環(huán)己烷混合液定容，過0.45 μm濾膜，轉(zhuǎn)移至GPC進樣管中，按照1.2條件進行前處理，定容至2 mL，最后導(dǎo)入氣相色譜儀分析［6］。

1.5結(jié)果計算

植物油樣品中TBHQ的含量按式（1）計算：

式中：X——植物油樣品中TBHQ的含量，mg/kg；

c——植物油樣品溶液中TBHQ的質(zhì)量濃度，μg/mL；

V——植物油樣品溶液的定容體積，mL；

m——植物油樣品的質(zhì)量，g；

f——稀釋因子。

2　結(jié)果與討論

2.1GPC收集時間的選擇

利用GPC對植物油樣品進行前處理凈化時，收集時間是影響檢測結(jié)果準確性的重要參數(shù)。配制100 mg/L的TBHQ標準溶液，按照1.2條件進行前處理，分別觀測TBHQ標準品、純植物油和加標TBHQ的植物油樣品在GPC紫外檢測器上的響應(yīng)信號。稱取50 mg TBHQ標準品溶解于50℃左右的植物油中，配制成TBHQ含量為500 mg/kg的加標樣品，經(jīng)GPC凈化分離后，見圖1。

圖1　加標植物油樣品GPC分離圖

由圖1可以看出，植物油樣品進樣10 min后開始從凝膠色譜柱流出，在第19 min時完全通過；而TBHQ則從進樣約17 min開始由凝膠色譜柱中流出，約32 min完全通過。植物油脂與TBHQ的出峰時間有部分重合，為保證良好回收率，選擇自進樣16.5 min開始收集，在第32.5 min收集完畢，顯然這樣會導(dǎo)致部分植物油被收集。為避免油脂樣品對TBHQ測定結(jié)果造成影響［7-8］，可對收集的樣品濃縮后進行二次凈化。

2.2GPC凈化對回收率的影響

將植物油加標樣品按照1.2條件進行處理，分別進行兩次凈化，第1次和第2次凈化的回收率結(jié)果見表1。

表1　兩次凈化后TBHQ的回收率

由表1中數(shù)據(jù)可知，經(jīng)GPC前處理后，第1次凈化回收率大于94%，而經(jīng)過第2次凈化后回收率有所下降，但TBHQ損失較小，回收率依然在92%以上，能夠滿足檢測要求，故選擇在16.5～32.5 min收集并對樣品進行2次凈化。

2.3線性關(guān)系及檢出限

配制質(zhì)量濃度分別為10，50，100，200 μg/mL的TBHQ系列標準溶液，按照1.3中氣相色譜條件進行分析，計算得到TBHQ標準溶液的質(zhì)量濃度與色譜峰面積的標準工作曲線線性方程及相關(guān)系數(shù)。結(jié)果表明，在10～200 μg/mL范圍內(nèi)，線性方程為Y=10.443 588X-29.393 741，相關(guān)系數(shù)為0.999 8。將10 μg/mL TBHQ標準溶液按一定的倍數(shù)稀釋，然后按照1.2條件進行前處理，再進行色譜分析，直至稀釋至色譜響應(yīng)值為基線噪聲的3倍［9］，對應(yīng)的TBHQ標準溶液質(zhì)量濃度為1 μg/mL，即為本方法檢出限。

2.4精密度試驗

加入適量TBHQ標準品于陰性植物油樣品中，使TBHQ含量分別為50，100，150，200 mg/kg，每個樣品檢測6次，計算測定結(jié)果的相對標準偏差，結(jié)果見表2。由表2可知，4種加標水平下測定結(jié)果的相對標準偏差為2.34%～6.19%，滿足GB/T 27404-2008 《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測》中對檢測重復(fù)性的要求［10］。

表2　精密度試驗結(jié)果

3　結(jié)語

采用凝膠凈化色譜對植物油樣品進行前處理，2次凈化除去樣品中的油脂，然后用氣相色譜法測定其中TBHQ的含量，回收率、測量精密度滿足方法學(xué)要求。該方法采取自動濃縮定容前處理，適于大批量植物油樣品的檢測，亦能有效保證檢測人員身體不受有毒有機溶劑侵害。

［1］ 余以港，黃偉，林華山.特丁基對苯二酚（TBHQ）應(yīng)用與檢測［J］.糧食與油脂，2003（3）： 42-43.

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［3］ 白廣東.食用動物油脂中抗氧化劑BHA、BHT和TBHQ測定方法的探討［J］.化工管理，2014（14）： 28-31.

［4］ 畢艷蘭，王宏雁，郭諍. TBHQ及其合成過程中衍生物在常溫和高溫下抗氧化活性的研究［J］.中國糧油學(xué)報，2005（2）： 36-37.

［5］ 黃永忠.氣相色譜法檢測食品中抗氧化劑BHA、BHT和TBHQ［J］.廣東化工，2015（3）： 41-42.

［6］ 林春曉，付斌，葉澤群，等.氣相色譜法檢測食用油脂中BHA、BHT樣品前處理方法研究［J］.中國熱帶醫(yī)學(xué)，2005（4）： 52-54.

［7］ 穆同娜，許華，李偉.凝膠滲透色譜-氣相色譜法測定食用油脂中抗氧化劑BHA、BHT［J］.食品工業(yè)科技，2007（1）： 23-26.

［8］ 乙小娟，朱加葉，王莉.氣質(zhì)聯(lián)用法測定食品中特丁基對苯二酚［J］.食品科學(xué)，2007（6）： 33-34.

［9］ 潘媛，張曉紅. HPLC和GC對食用油脂中抗氧化劑BHA，BHT，TBHQ的測定［J］.云南大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2008（s1）：32-33.

［10］ GB/T 27404-2008 實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測［S］.

Determination of Tert-Butyl Hydro-quntone in Vegetable Oil by Gel Permeation-Gas Chromatography

Han Qun
（Huangdao District Inspection and Testing Center， Qingdao 266555， China）

Being treated with gel permeation chromatography， tert-butyl hydroquinone（TBHQ） in oil samples was determined by gas chromatography. The influence of two times purification on test results was studied， the results showed that when second purification performed in 16.5-32.5 min， the recovery rates were 92.6%-94.1%. The detection limit of TBHQ was 1 μg/mL， the linear correlation coefficient was 0.999 8， the relative standard deviations of detection results for four level of standard addition samples were 2.34%-6.19%（n=6）. The method meets the detection requirements in precision and accuracy， and it is suitable for large batch sample determination of TBHQ in vegetable oil.

gel permeation chromatography； gas chromatography； vegetable oil； tert-butyl hydro-quinone

O657.7

A

1008-6145（2016）02-0066-03

10.3969/j.issn.1008-6145.2016.02.019

聯(lián)系人：韓群；E-mail： 30147879@qq.com

2016-01-20