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        益腎排毒方對腺嘌呤所致慢性腎衰竭大鼠腎功能的影響

        2016-11-12 03:29:55楊秀煒
        關(guān)鍵詞:腺嘌呤腎衰竭灌胃

        周 微,楊秀煒

        (遼寧省中醫(yī)藥研究院 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院,沈陽110034)

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        益腎排毒方對腺嘌呤所致慢性腎衰竭大鼠腎功能的影響

        周微,楊秀煒*

        (遼寧省中醫(yī)藥研究院 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院,沈陽110034)

        目的觀察益腎排毒方對腺嘌呤所致慢性腎衰竭大鼠腎功能的影響。方法103只清潔級Wister雄性大鼠,隨機(jī)分為正常組、模型組、對照組(尿毒清顆粒)、治療組(低、中、高劑量)6組,除正常組外,其余組均給予1.5%腺嘌呤混懸液按300 mg/(kg·d)劑量灌胃給藥,造模3周。造模成功后,按大鼠體質(zhì)量2 mL/100 g,灌胃1次/d,連續(xù)8周。正常組、模型組給予自來水灌胃,對照組灌胃尿毒清顆?;鞈乙海委熃M分別按相當(dāng)于人用藥劑量的0.5、1、2倍量灌胃中藥煎劑益腎排毒方。給藥8周后觀察各組大鼠一般情況、腎功能(BUN、Scr)指標(biāo)、免疫(α-SMA)指標(biāo)、電鏡下腎臟組織超微結(jié)構(gòu)形態(tài)變化。結(jié)果與正常組相比,其余各組BUN、Scr水平均顯著升高(P<0.01);與模型組相比,其余各組BUN、Scr水平均顯著下降(P<0.01);與模型組相比,其余各組α-SMA水平均有下降趨勢,治療組(高劑量)水平顯著下降(P<0.01);電鏡下,模型組均有不同程度腎損傷,對照組和治療組腎損傷有所改善。結(jié)論益腎排毒方可降低慢性腎衰竭大鼠血BUN、Scr水平,下調(diào)α-SMA的表達(dá),改善修復(fù)受損腎臟組織,改善腎間質(zhì)纖維化的程度,延緩慢性腎衰竭的進(jìn)程。

        腺嘌呤;慢性腎衰竭;腎功能;α-SMA

        益腎排毒方是我科臨床常用的經(jīng)驗(yàn)方,應(yīng)用廣泛,療效顯著,近年來已通過臨床試驗(yàn)驗(yàn)證[1]。筆者通過本實(shí)驗(yàn)觀察益腎排毒方對腺嘌呤所致慢性腎衰竭大鼠腎功能的影響,為進(jìn)一步探討該藥物的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1材料清潔級Wister雄性大鼠共103只,平均體質(zhì)量(250±20)g,由遼寧長生生物技術(shù)有限公司提供。飲用水為自來水,飼料為標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料,由北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供。

        益腎排毒方:黃芪、當(dāng)歸、菟絲子、生地黃、白術(shù)、茯苓、枸杞子、何首烏、炙甘草、鹿角霜、大黃、黃連、土茯苓、紅花等中藥組成,將上述中藥加水500 mL按中藥常規(guī)煎法制成,由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院制劑室制備,含生藥 0.375 g/mL。尿毒清顆粒(無糖型)5 g/袋,康臣藥業(yè)(內(nèi)蒙古)有限責(zé)任公司生產(chǎn),批號:20131246,臨用配成水溶液,含生藥0.18 g/mL。

        腺嘌呤購自沈陽皇姑區(qū)泰吉區(qū)生物試劑經(jīng)銷部,美國Amresco 0183進(jìn)口分裝,臨用配成1.5%水溶液。大鼠α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒購于沈陽海靈興業(yè)商貿(mào)有限公司。

        1.2方法

        1.2.1實(shí)驗(yàn)分組103只大鼠隨機(jī)分為正常組13只,模型組、對照組(尿毒清顆粒)、治療組(低、中、高劑量)5組,每組18只。

        1.2.2造模制備各組大鼠每周稱重1次,除正常組外,其余組每日上午均給予1.5%腺嘌呤混懸液按300 mg/(kg·d)劑量(即按大鼠體質(zhì)量2 mL/100 g)灌胃給藥[2],造模3周。造模期間死亡8只。造模后隨機(jī)選取4只大鼠,眼眶取血2 mL,送檢化驗(yàn)?zāi)I功能BUN、Scr指標(biāo);而后處死取腎組織觀察其病理顯示為炎性細(xì)胞浸潤、腎間質(zhì)纖維化、腎小管結(jié)晶物沉著,確定造模成功。

        1.2.3給藥方法各組大鼠每周稱重1次,按大鼠體質(zhì)量2 mL/100 g灌胃,1次/d,連續(xù)8周。正常組、模型組給予自來水灌胃,其余組根據(jù)大鼠與成人體質(zhì)量等效藥物劑量計(jì)算[3],對照組按相當(dāng)于成人用藥劑量最大量(0.18 g/mL)灌胃尿毒清顆?;鞈乙?,分別按相當(dāng)于人用藥劑量的0.5(0.1875 g/mL)、1(0.375 g/mL)、2(0.75 g/mL)倍量灌胃中藥煎劑益腎排毒方。給藥期間各組合計(jì)死亡13只。

        1.2.4標(biāo)本采集及取材給藥8周后禁食水12 h,次日稱體質(zhì)量,2%烏拉坦麻醉后腹主動(dòng)脈采血送檢生化、免疫;每組大鼠取1只,取右腎,觀察外觀大小顏色質(zhì)地等,然后將腎組織腎皮質(zhì)取約2 mm2若干小塊,2.5%戊二醛固定,1%鋨酸后固定,乙醇梯度脫水,環(huán)氧樹脂618包埋,定位后超薄切片,醋酸鈾-檸檬酸鉛雙染色,日立H-7650透射電子顯微鏡下觀察腎組織超微結(jié)構(gòu)[4]。

        2 結(jié)果

        2.1一般情況造模期間正常組13只大鼠均反應(yīng)靈敏,體毛光澤順滑,體質(zhì)量增加快,飲食二便正常,無死亡。其余各組精神萎靡,飲食減少,體毛干枯無光澤,活動(dòng)減少,體質(zhì)量增加慢,小便多,大便稀溏。給予干預(yù)措施后對照組和治療組精神較前有所改善,飲食活動(dòng)較前有所增加,但不如正常組狀態(tài)。各組大鼠治療后體質(zhì)量比較,見表1。

        表1 各組大鼠治療后體質(zhì)量比較±s)

        注:與正常組比較,##P<0.01;與模型組比較,△△P<0.01;與對照組比較,▲P<0.05;與低劑量組比較,★P<0.05

        2.2生化指標(biāo)(BUN、Scr)比較見表2。

        表2 各組大鼠腎功能(BUN、Scr)比較

        注:與正常組比較,##P<0.01;與模型組比較,△△P<0.01;與對照組比較,▲P<0.05;與低劑量組比較,☆P<0.05,與中劑量組比較,★P<0.05

        2.3免疫指標(biāo)(α-SMA) 比較見表3。

        表3 各組大鼠治療后α-SMA比較

        注:與正常組比較,#P<0.05,##P<0.01;與模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01;與低劑量組比較,▲P<0.05,▲▲P<0.01

        2.4腎臟形態(tài)學(xué)改變

        2.4.1肉眼觀察正常組大鼠腎臟大小如花生,顏色暗紅,表面光滑。其余組大鼠腎臟明顯增大,顏色蒼白,表面粗糙不平。

        2.4.2電鏡觀察正常組腎小球數(shù)目正常,無纖維化;腎小管排列緊密,無腫脹變形。模型組腎小球數(shù)目減少,基底膜部分增厚,管腔狹窄,腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)褶線粒體腫脹消失。對照組、治療組(低、中劑量)腎小球基底膜部分增厚,腎小管上皮細(xì)胞線粒體腫脹。治療組(高劑量)腎小球基底膜完整,腎小管上皮細(xì)胞線粒體完整。

        3 討論

        慢性腎衰竭屬中醫(yī)“溺毒”“癃閉”“關(guān)格”“腎勞”“虛勞”等范疇[5],病機(jī)總屬本虛標(biāo)實(shí),主要為氣血陰陽俱虛,濕濁血瘀內(nèi)蘊(yùn),筆者根據(jù)病機(jī)研制出益氣補(bǔ)血、調(diào)補(bǔ)陰陽、解毒泄?jié)嶂婺I排毒方。方中黃芪、白術(shù)、當(dāng)歸、何首烏、茯苓益氣補(bǔ)血,健脾除濕;菟絲子、生地黃、枸杞子、鹿角霜調(diào)補(bǔ)陰陽;大黃泄?jié)崤哦荆稽S連、土茯苓清熱利濕;紅花活血化瘀。現(xiàn)代藥理表明:黃芪具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、抗氧化、神經(jīng)修復(fù)等廣泛功效[6]。白術(shù)、菟絲子能抗氧化、參與體內(nèi)多種免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)、增強(qiáng)免疫力[7-8]。當(dāng)歸具有抵抗血小板凝集,促進(jìn)人體造血作用[9]。何首烏具有提高免疫、促進(jìn)造血細(xì)胞生長、抗菌抗炎等作用[10]。茯苓具有抗腫瘤、抗纖維化、抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等多方面的藥理作用[11]。枸杞子具有增強(qiáng)免疫功能和保護(hù)腎功能作用[12]。生地黃具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng),參與維護(hù)機(jī)體穩(wěn)定的作用[13]。大黃主要具有顯著減少腎間質(zhì)病變,改善抑制腎間質(zhì)纖維化的作用[14]。紅花具有抗血小板聚集、降低血液黏度、擴(kuò)張微細(xì)動(dòng)脈、改善微循環(huán)以及清除氧自由基、抗氧化的作用[15]。

        本實(shí)驗(yàn)觀察益腎排毒方對腺嘌呤致慢性腎衰竭大鼠腎功能的影響,結(jié)果表明益腎排毒方能有效地降低慢性腎衰竭大鼠的BUN、Scr水平,尤其是高劑量組效果更為顯著,低、中劑量組療效和對照組療效相當(dāng),與模型組比較均有顯著差異(P<0.01),證實(shí)了益腎排毒方的療效,也間接證實(shí)了中醫(yī)劑量與臨床療效之間的關(guān)系。同時(shí),通過電鏡對慢性腎衰竭大鼠模型腎臟組織的觀察,模型組腎組織腎小球基底膜增厚,管腔狹窄,腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)褶線粒體腫脹消失。通過藥物干預(yù)后,對照組、治療組(低、中劑量)腎小球基底膜部分增厚,腎小管上皮細(xì)胞線粒體腫脹減輕;治療組(高劑量)腎小球基底膜完整,腎小管上皮細(xì)胞線粒體完整。證實(shí)益腎排毒方能修復(fù)腎小球和腎小管的損害病變[16-17]。本研究中觀察了慢性腎衰竭大鼠的血清α-SMA水平,研究結(jié)果表明模型組、對照組、各治療組α-SMA均較正常組升高,尤其以模型組水平最高;治療組(高劑量)水平雖較正常組升高但無明顯差異。與模型組相比,其余各組α-SMA水平均有下降趨勢,其中治療組(中、高劑量)水平顯著下降。與對照組相比,各治療組(低、中、高劑量)水平無明顯差異,治療組組間相比,治療組(中劑量)水平下降;治療組(高劑量)水平顯著下降。本研究結(jié)論提示中藥益腎排毒方治療組可下調(diào)α-SMA的表達(dá),從而減少ECM的過度沉積而改善腎間質(zhì)纖維化的程度,最終達(dá)到延緩慢性腎衰竭的進(jìn)程。

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        Yishen Paidu formula on renal function in rats with chronic renal failure caused by adenine

        ZHOU Wei,YANG Xiuwei*

        (Liaoning Institute of Traditional Chinese Medicine,The Second Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Shenyang 110034,China)

        ObjectiveTo explore the clinical effect of Yishen Paidu Formula on the renal function in rats with Chronic renal failure caused by Adenine.MethodsThe 103 clean male Wister rats have been randomly divided into six groups,these are normal group,model group,control group (niaoduqing granules),treatment group (low-dose,meta-dose,and high-dose).Except for the normal group,the other groups are given 1.5% adenine mixed suspension with 300 mg/kg.d intragastrically administration,and the model is established for 3 weeks.After the model is established,each rat is lavaged based on its weight 2 mL/100 g one time a day,and the process lasts for 8 weeks.The normal group and model group are lavaged with running water,the control group is lavaged with niaoduqing granules mixed suspension,three treatment groups are lavaged with half,one time and twice dosages traditional Chinese medicine Yishen Paidu Formula respectively.After eight weeks of lavage,to rats in each group,the general state of health,renal function (BUN,Scr) indicator,α-SMA with immunohistochemistry and kidney tissue ultrastructure morphological change under electron microscope were observed.ResultsCompared with the normal group,the BUN and Scr levels in the other groups increase significantly (P<0.01).Compared with the model group,the BUN and Scr levels in the other groups decreases significantly (P<0.01),the α-SMA levels in the other groups decreases and in the treatment group(high-dose) decreases significantly (P<0.01).Under electron microscope,there are kidney damages with different degrees in each rat in model group,and there are improved kidney damages in each rat in control and treatment group.ConclusionYishen Paidu Formula can reduce the chronic renal failure rats blood BUN,Scr andα-SMA level,improve and repair the damaged kidney tissue,reduce interstitial fibrosis and prolong the process of CRF.

        adenine;chronic renal failure;renal function;α-SMA

        10.13463/j.cnki.cczyy.2016.05.007

        遼寧省科學(xué)事業(yè)公益研究基金項(xiàng)目“益腎排毒方治療腺嘌呤致慢性腎衰竭大鼠模型的藥效學(xué)研究”(2012002012);沈陽市科技計(jì)劃項(xiàng)目“益腎活血降濁法治療腺嘌呤致大鼠慢性腎衰竭的實(shí)驗(yàn)研究”(F15-139-9-41)。

        周微(1981-),女,碩士,主治醫(yī)師,主要從事中西醫(yī)結(jié)合治療慢性腎臟病。

        楊秀煒,女,碩士,主任醫(yī)師,電話-13514282347,電子信箱-weiweium@126.com

        R285.5

        A

        2095-6258(2016)05-0898-04

        2016-05-10)

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