亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        等溫滴定量熱法測定酶催化反應(yīng)的熱動力學(xué)參數(shù)

        2016-11-12 06:41:21彭尚孫麗霞熊珍愛周利琴蘭雄雕孫建華童張法廖丹葵
        化工進展 2016年11期
        關(guān)鍵詞:依那普利等溫底物

        彭尚,孫麗霞,熊珍愛,周利琴,蘭雄雕,孫建華,童張法,廖丹葵

        (廣西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院,廣西高校資源化工應(yīng)用新技術(shù)重點實驗室,廣西 南寧 530004)

        等溫滴定量熱法測定酶催化反應(yīng)的熱動力學(xué)參數(shù)

        彭尚,孫麗霞,熊珍愛,周利琴,蘭雄雕,孫建華,童張法,廖丹葵

        (廣西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院,廣西高校資源化工應(yīng)用新技術(shù)重點實驗室,廣西 南寧 530004)

        采用等溫滴定量熱法(ITC)測定豬肺血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)催化水解其體外模擬底物馬尿酰-組氨酰-亮氨酸(Hip-His-Leu,HHL)反應(yīng)的熱動力學(xué)參數(shù),考察了溫度對動力學(xué)參數(shù)的影響。結(jié)果表明,該反應(yīng)的摩爾水解焓ΔHhydr為正值,是吸熱反應(yīng),且隨溫度升高ΔHhydr增大,等壓比熱容cp為0.2126kJ/(mol·K);ACE催化HHL的水解反應(yīng)符合Michaelis-Menten機理,在實驗溫度范圍內(nèi)(298.15~313.15K),米氏常數(shù)Km隨溫度升高而減小,催化常數(shù)kcat隨溫度的升高先增大后減少,在308.15K時達到最大值2.534s-1。將該法與傳統(tǒng)的初始速率法進行比較,傳統(tǒng)法存在的局限性使測得的Km相對偏大。同時使用ITC結(jié)合動力學(xué)分析測得ACE抑制劑藥物依那普利拉為競爭性抑制劑,抑制常數(shù)KI為12.1 nmol/L,與文獻比較證明該法可用于抑制劑類型的判斷,是一種開發(fā)ACE抑制劑的新方法。應(yīng)用該方法確定活性多肽Arg-Tyr-Leu-Gly-Tyr(RY-5)為非競爭性抑制劑,抑制常數(shù)KI為1.0 μmol/L。

        等溫滴定量熱;反應(yīng)動力學(xué);血管緊張素轉(zhuǎn)化酶;熱力學(xué);生物催化

        酶的催化動力學(xué)及抑制劑研究是酶學(xué)研究中非常重要的一個部分,得到的信息能夠預(yù)測催化反應(yīng)的路徑。傳統(tǒng)酶動力學(xué)參數(shù)測定的方法是通過光譜、電化學(xué)或者色譜等檢測手段測定在不同底物濃度下、一定時間內(nèi)酶催化底物生成某種產(chǎn)物的量,該方法較繁瑣且有一定局限性[1-2]。等溫滴定量熱(isothermal titration calorimetry,ITC)技術(shù)作為一種新興的測定方法,可以快速直接準確測量化學(xué)反應(yīng)過程中產(chǎn)生的熱量變化。

        目前,ITC技術(shù)在酶催化反應(yīng)研究中被廣泛應(yīng)用。LONHIENNE等[3]使用ITC在大分子擁擠體系中測量了丙酮酸激酶等多種酶的酶學(xué)常數(shù)。CAI等[4]使用核糖核酸酶催化cCMP反應(yīng)產(chǎn)生的產(chǎn)物3'-CMP抑制劑作為探針測量了核糖核酸酶的動力學(xué)參數(shù),為存在產(chǎn)物抑制的酶反應(yīng)動力學(xué)參數(shù)的測定開辟了新的思路。BIANCONI等[5]與宋熙熙[6]先后使用等溫滴定量熱法測量了脲酶-尿素水解反應(yīng)的動力學(xué)參數(shù)。上述結(jié)果均證實了ITC是一種精確快速研究酶動力學(xué)的方法。

        ACE在人體血壓調(diào)節(jié)中起著重要的作用,通過將十肽血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化為八肽血管緊張素Ⅱ從而使血壓升高,其抑制劑可以抑制ACE的活性起到降血壓作用[7]。早期對ACE酶學(xué)性質(zhì)的研究是用初始速率法測定其體外模擬底物馬尿酰-組氨酰-亮氨酸(Hip-His-Leu,HHL)與ACE的酶促反應(yīng)速率來監(jiān)測反應(yīng)進程。本實驗擬以ITC法測量ACE酶促反應(yīng)熱動力學(xué)參數(shù)及其抑制劑依那普利拉的抑制類型,并將所得結(jié)果與傳統(tǒng)法進行比較。將ITC法用于小肽Arg-Tyr-Leu-Gly-Tyr(RY-5)抑制類型的判斷,為開發(fā)ACE抑制劑提供一種新的方法和思路。

        1 實驗部分

        1.1實驗試劑

        試劑:豬肺血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(自提,比活為1.2U/mg,具體方法見參考文獻[8]);馬尿酰-組氨酰-亮氨酸(Hip-His-Leu;HHL),Sigma公司;依那普利拉(Enalaprilat),標準物質(zhì),中國藥品生物制品檢定所;RY-5委托吉爾生化有限公司合成;硼酸、硼砂、氯化鈉,分析純;緩沖溶液均為pH=8.3的0.1mol/L的硼酸緩沖液(含0.3mol/L的NaCl)。

        1.2實驗儀器

        等溫滴定量熱儀NANO ITC(USA TA),量熱池體積為164μL;高效液相色譜儀1260,美國安捷倫;紫外可見分光光度計UV2501pC,日本島津。

        2 實驗方法

        2.1ITC法測定不同溫度下ACE催化HHL反應(yīng)動力學(xué)參數(shù)

        在量熱池中注入0.5μmol/L的ACE酶液至滿,攪拌速度設(shè)定為300r/min,待量熱儀達到實驗溫度且基線穩(wěn)定后開始自動滴加15mmol/L的HHL,共20滴,每滴體積為1μL,時間間隔60s。

        2.2初始速率法測定ACE催化HHL反應(yīng)動力學(xué)參數(shù)

        配制濃度范圍0.5~20mmol/L的HHL溶液,各取40μL加入1.5mL的離心管中,依次加入160μL ACE,在308.15K(催化常數(shù)達到最大值時對應(yīng)的溫度)下保溫反應(yīng)5min,隨后加入150μL濃度為1mol/L的HCl終止反應(yīng)。

        2.3ITC驗證依那普利拉抑制類型

        在量熱池中注入1μmol/LACE與10nmol/L依那普利拉1∶1的混合液至滿,攪拌速度設(shè)定為300r/min,待量熱儀達到308.15K且基線穩(wěn)定后開始自動滴加15mmol/L的HHL,共30滴,每滴體積為1μL,時間間隔60s。將實驗結(jié)果與文獻進行比較,確定ITC是否可用于藥物抑制類型的判斷。

        2.4初始速率法判斷RY-5抑制劑類型

        取12個1.5mL的小離心管,依次加入120μL ACE,每管加入不同濃度的抑制劑以及HHL各40μL。RY-5終濃度為0.86μmol/L和1.72μmol/L。在308.15K下保溫反應(yīng)5min,隨后加入150μL濃度為1mol/L的HCl終止反應(yīng)。

        2.5應(yīng)用ITC判斷RY-5抑制類型

        采用2.3節(jié)的方法判斷RY-5的抑制類型,即將依那普利拉更換為RY-5,濃度為0.8μmol/L,其他條件相同。

        2.6數(shù)據(jù)處理

        實驗直接得到的數(shù)據(jù)為熱功率P,它代表的是單位時間t內(nèi)熱量值Q 的改變量。

        通過式(2)可以計算HHL的摩爾水解焓ΔHhydr。

        催化反應(yīng)的瞬時速率可表示為式(3),可以得知反應(yīng)速率v與P在相同實驗條件下呈固定倍數(shù)關(guān)系,反應(yīng)速率的大小可以直觀的呈現(xiàn)在熱流曲線上。

        反應(yīng)池底物濃度變化如式(4)所示。

        無抑制劑、競爭性抑制劑和非競爭性抑制劑存在下的米氏方程及抑制常數(shù)KI的計算,如式(5)~式(8)。

        3 結(jié)果與討論

        3.1ACE催化HHL反應(yīng)的摩爾水解焓

        采用ITC法測定反應(yīng)速率需要知道ΔHhydr,建立熱量與反應(yīng)速率的關(guān)系。表1為298.15~313.15K溫度下,計算得到ACE催化HHL反應(yīng)的ΔHhydr及等壓熱容cp,ΔHhydr均為正值,說明該反應(yīng)為吸熱反應(yīng),且其數(shù)值隨著溫度的升高而增大,較小的cp說明了底物與ACE的結(jié)合以剛性結(jié)合占主導(dǎo),酶與底物結(jié)合主要由結(jié)構(gòu)的互補性(如較好的三圍結(jié)構(gòu)契合以及合適的非共價的離子鍵和氫鍵作用力)決定[9]。

        表1 不同溫度的摩爾水解焓

        3.2溫度對ACE催化HHL反應(yīng)動力學(xué)參數(shù)的影響

        不同溫度ACE催化HHL水解反應(yīng)的等溫滴定曲線如圖1,由式(3)可知,熱功率的變化反映了催化反應(yīng)速率的變化。

        在每一次底物剛滴入量熱池中時,由于此時底物濃度最大,反應(yīng)速率達到最大值,且反應(yīng)速率會隨著底物的消耗而下降。為了測定酶的動力學(xué)常數(shù),需要對底物濃度進行累積。隨著底物濃度趨于飽和,反應(yīng)速率的增加量逐漸變小。

        BIANCONI[5]報道了該方法測定脲酶水解尿素的動力學(xué)參數(shù),其熱流曲線呈臺階式增長(例如圖1中298.15K時的熱量曲線圖),即每一滴產(chǎn)生的熱流曲線中有一段時間熱功率值基本保持不變,這一階段被認為是勻速反應(yīng)。本文作者認為,在底物濃度較低時,反應(yīng)速率都會受底物濃度影響,這一階段反應(yīng)速率也會因為底物被不斷消耗從而降低,圖中呈臺階式的原因是因為這一階段底物消耗的量相對于這一滴底物增加的量是非常小的,所以在熱流曲線圖中表現(xiàn)不明顯。從而可以得知,傳統(tǒng)的初始速率法對于一些反應(yīng)速率較快的酶的動力學(xué)參數(shù)的測量是存在較大誤差的。

        圖1 不同溫度下ACE催化HHL水解反應(yīng)的等溫滴定量熱曲線

        根據(jù)式(3)計算v,根據(jù)式(4)計算S,作出S與v的關(guān)系圖,并通過origin8進行雙曲線擬合,結(jié)果見圖2,得到的催化常數(shù)kcat與米氏常數(shù)Km的值如表2。

        由表2可知,Km的值隨著溫度的升高而變小,升高溫度有利于增加底物與ACE分子碰撞概率,底物更容易進入ACE內(nèi)部并與活性中心結(jié)合,表現(xiàn)出底物與ACE更好的親和力。表2中kcat在298.15~303.15 K時變化非常明顯,隨溫度升高而急劇增大,在303.15~313.15K時變化緩慢且有下降的趨勢,下降的原因是因為溫度過高會使部分酶失活,而Km與酶濃度無關(guān),所以Km在這一溫度范圍內(nèi)不會下降。

        圖2 不同溫度下ACE酶促反應(yīng)動力學(xué)曲線

        表2 不同溫度下Km、kcat的值

        3.3初始速率法與ITC法比較

        初始速率法中采用高效液相測定不同HHL濃度下反應(yīng)液中馬尿酸對應(yīng)的峰面積,根據(jù)馬尿酸標準曲線[8]計算出v。以S為橫坐標,v為縱坐標繪制ACE酶促反應(yīng)動力學(xué)曲線,如圖3所示。

        圖4為兩種不同方法在308.15K下的Lineweaver-Buck雙倒數(shù)圖,擬合直線在橫軸上的截距為-1/Km,可以看出初始速率法測得的Km要比等溫滴定量熱法大,計算得到308.15K時初始速率法測定Km為1.8mmol/L,而等溫滴定量熱法則為0.712 mmol/L。

        圖3 ACE酶促反應(yīng)動力學(xué)曲線

        圖4 兩種不同方法的動力學(xué)曲線

        造成初始速率法測出的米氏常數(shù)偏大的原因是測定的速率為反應(yīng)過程5min的平均速率,在底物不飽和時,反應(yīng)速率是隨著底物濃度變化而變化的,所以測得的速率與實際初速率相比是偏小的,隨著底物濃度的增加,這種偏差越來越小,這樣勢必造成結(jié)果的偏差,即Km值偏大。而等溫滴定量熱法反應(yīng)速率可以實時的反映在熱功率的變化上,每滴熱功率極值即為在該濃度下的最大反應(yīng)速率,相比5min的平均速率法,該方法較大的提高了實驗結(jié)果的精確度。

        Km作為酶的特征常數(shù),可以一定程度上用于酶的定性,劉宏等[10]與吳瓊英等[11]報道了Km范圍為0.174~3.168mmol/L,均是使用初始速率法測得,且酶活反應(yīng)溫度在308.15~313.15K之間,從量熱曲線中可以看出,這一溫度范圍內(nèi)反應(yīng)速率隨底物消耗波動較大。由于ACE來源及提取工藝的不同,與底物的親和力會有所差異,但對于同一實驗得到的ACE來說,ITC法測得的Km會更接近真實值。所以ITC法與初始速率法相比,操作簡單,測量精確,是值得被廣泛運用,并可以通過進一步完善來提高精確度的生物檢測手段。

        3.4依那普利拉抑制類型

        在ACE與HHL反應(yīng)的體系中加入依那普利拉,ITC結(jié)果見圖5,隨著底物濃度不斷增加,依那普利拉實驗組的熱功率值越來越趨近于空白組的熱功率值,說明隨著底物濃度的增加依那普利拉抑制效果變?nèi)?,而競爭性抑制劑的特點就是底物與抑制劑共同競爭活性位點,濃度的高低決定競爭力的強弱,所以可判斷依那普利拉為競爭性抑制劑,與ANDUJAR-SANCHEZ等[12]報道的相符。即ITC可應(yīng)用于抑制劑類型的判斷。

        根據(jù)式(3)計算v,根據(jù)式(4)計算S,做出L-B雙倒數(shù)圖,有/無依那普利拉的兩條擬合直線相交于縱軸的正半軸,符合典型的競爭性抑制劑雙倒數(shù)圖特點[13]。根據(jù)式(8)計算得到抑制常數(shù)KI=12.1nmol/L,根據(jù)Cheng-Prusoff方程[14]KI=IC50/(1+I/Km),I為抑制劑的濃度,其值遠小于Km值,所以IC50≈KI,在CECONI等[15]報道的2~36nmol/L范圍之內(nèi)。

        圖5 有/無依那普利拉時ACE催化HHL水解反應(yīng)的等溫滴定量熱曲線

        圖6 ITC法依那普利拉對ACE的L-B雙倒數(shù)圖

        3.5RY-5抑制類型

        用初始速率法測定RY-5的抑制類型,根據(jù)3.3節(jié)的方法計算出S與v,作RY-5濃度分別為0、0.86μmol/L、1.72μmol/L時對ACE的抑制動力學(xué)L-B雙倒數(shù)圖,如圖7,不同濃度的抑制劑擬合直線相交于橫軸的負半軸,說明RY-5是非競爭性抑制劑。

        將ITC法應(yīng)用于活性多肽抑制類型的判斷,即在ACE與HHL反應(yīng)體系中加入RY-5,ITC結(jié)果見圖8,RY-5實驗組的熱流曲線趨近平緩后與空白組的熱功率差值基本保持不變,說明RY-5的抑制效果與底物濃度無關(guān),這符合非競爭性抑制劑的特點。

        按照3.4節(jié)的方法處理數(shù)據(jù),做出L-B雙倒數(shù)圖,見圖9。RY-5與無抑制劑的擬合直線相交于橫軸的負半軸,符合典型的非競爭性抑制劑雙倒數(shù)圖特點[13]。計算得到RY-5的抑制常數(shù)KI為1.0μmol/L。RY-5的IC50為0.7μmol/L[16],實驗結(jié)果與之接近,且與3.3節(jié)中初始速率法得到的抑制劑類型一致,而目前發(fā)現(xiàn)的大多數(shù)活性多肽類ACE抑制劑均屬于非競爭性抑制劑,說明等溫滴定量熱法能夠用于這類抑制劑類型的判斷,是一種開發(fā)ACE抑制劑的新方法。

        圖7 初始速率法RY-5對ACE的L-B雙倒數(shù)圖

        圖8 有/無抑制劑時ACE催化HHL水解反應(yīng)的等溫滴定量熱曲線

        圖9 ITC法RY-5對ACE的L-B雙倒數(shù)圖

        4 結(jié) 論

        采用ITC研究血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)催化其模擬體外底物馬尿酰-組氨酰-亮氨酸(HHL)生成馬尿酸與二肽HL的過程,測定不同溫度下的摩爾水解焓ΔHhydr、米氏常數(shù)Km與催化常數(shù)kcat,同時采用傳統(tǒng)的初始速率法與該方法進行比較。結(jié)果表明,這一過程為吸熱過程,ΔHhydr的數(shù)值隨溫度升高而增大,等壓熱容cp為0.2126kJ/(mol·K);Km在測定范圍內(nèi)隨溫度升高而減??;催化常數(shù)kcat在溫度較低時,隨溫度升高而增大,溫度過高會使酶變性從而下降;傳統(tǒng)的初始速率法由于采用平均速率來代替初速率使得相同溫度測得的Km偏大,因此在酶學(xué)性質(zhì)的研究中ITC法明顯優(yōu)于傳統(tǒng)法。通過底物對酶與依那普利拉的混合溶液進行滴定,從熱量曲線中即可直觀的判斷依那普利拉為競爭性抑制劑,與文獻結(jié)果一致,即ITC法可用于ACE抑制劑的開發(fā)。經(jīng)計算得到依那普利拉抑制常數(shù)KI值為12.1nmol/L,將這一方法應(yīng)用于小肽ACE抑制劑Arg-Tyr-Leu -Gly-Tyr(RY-5)的抑制類型測定,結(jié)果顯示RY-5為非競爭性抑制劑且與初始速率法測得的結(jié)果一致,KI值為1.0μmol/L。實驗結(jié)果說明等溫滴定量熱法用于酶及其抑制劑的相關(guān)研究較為精確、簡單和快捷。

        符 號 說 明

        cp—— 等壓比熱容,kJ/(mol·K)

        [E] —— 酶的濃度,mol/L

        ΔHhydr—— 摩爾水解焓,J/mol

        [I] —— 抑制劑濃度,mol/L

        kcat—— 催化效率,s-1

        KI—— 抑制常數(shù),mol/L

        Km—— 米氏常數(shù),mol/L

        n —— 底物的物質(zhì)的量

        P —— 熱功率,J/s

        Q —— 熱量值,J

        [S] —— 底物濃度,mol/L

        [S0] —— 底物初始濃度,mol/L

        T —— 熱力學(xué)溫度,K

        t —— 時間,s

        V —— 反應(yīng)池體積,L

        v —— 反應(yīng)速率,mol/(s·L)

        α——表觀系數(shù)

        [1] ELLIS R J. Macromolecular crowding:obvious but underappreciated[J]. Trends Biochem. Sci.,2001,26(10):597-604.

        [2] OLSEN S N. Application of isothermal titration calorimetry to measure enzyme kinetics and activity in complex solutions [J]. Thermochim Acta,2006,448(1):12-18.

        [3] LONHIENNE T G A,WINZOR D J. A potential role for isothermal calorimetry in studies of the effects of thermodynamic non-ideality in enzyme-catalyzed reactions[J]. Journal of Molecular Recognition,2004,17(5):351-361.

        [4] CAI L F,CAO A N,LAI L H. An isothermal titration calorimetric method to determine the kinetic parameters of enzyme catalytic reaction by employing the product inhibition as probe[J]. Analytical Biochemistry,2001,299(1):19-23.

        [5] BIANCONI M L. Calorimetry of enzyme-catalyzed reactions [J]. Biophysical Chemistry,2007,126(1/2/3):59-64.

        [6] 宋熙熙. 等溫滴定量熱法測定脲酶催化尿素水解反應(yīng)動力學(xué) [J].浙江大學(xué)學(xué)報,2009,36(2):175-179.

        [7] 周敬豪,徐存華,李玉嬋,等. 磁性殼聚糖微球的合成及其在固定化血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的應(yīng)用 [J]. 化工進展,2013,32(10):2440-2445.

        [8] 周利琴,廖丹葵,孫建華. 豬肺血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的提取與純化[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報,2014,45(4):639-642.

        [9] TELLEZ-SANZ R,GARCIA-FUENTES L,BARON C. Calorimetric analysis of lisinopril binding to angiotensin Ⅰ—converting enzyme[J]. Febs Letters,1998,423(1):75-80.

        [10] 劉宏,陳蘭英. 血管緊張素轉(zhuǎn)化酶純化和性質(zhì)研究[J]. 中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報,2000(6):788-792.

        [11] 吳瓊英,馬海樂,崔恒林,等. 豬肺血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的提取純化及其性質(zhì)研究[J]. 食品科學(xué),2004(9):71-73.

        [12] ANDUJAR-SANCHEZ M,CAMAR-ARTIGAS A,JARA-PEREZ V. A calorimetric study of the binding of lisinopril,enalaprilat and captopril to angiotensin converting enzyme [J]. Biophysical Chemistry,2004,111(2):183-189.

        [13] 彭益強,劉鵬,鄧峰,等. 源于馬鈴薯的多酚氧化酶活性中心必需基團組成與抑制機理 [J]. 化工進展,2012,31(2):406-411.

        [14] CHENG Y,PRUSOFF W H. Relationship between the inhibition constant(Ki)and the concerntration of an inhibitor that causes a 50% inhibition (I50) of an enzymatic reaction [J]. Biochemical Pharmacology,1973,22(1):3099-3108.

        [15] CECONI C,F(xiàn)RANCOLINI G,OLIVARES A,et al. Angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitors have different selectivity for bradykinin binding sites of human somatic ACE [J]. European Journal of Pharmacology,2007,577(1/2/3):1-6.

        [16] CONTRERAS M D,CARRON R,MONTERO M J,et al. Novel casein-derived peptides with antihypertensive activity [J]. International Dairy Journal,2009,19(10):566-573.

        Thermodynamics and kinetics of an enzyme-catalyzed reaction determined by isothermal titration calorimetry

        PENG Shang,SUN Lixia,XIONG Zhen'ai,ZHOU Liqin,LAN Xiongdiao,SUN Jianhua,TONG Zhangfa,LIAO Dankui
        (School of Chemistry and Chemical Engineering,Guangxi University,Guangxi Colleges and Universities Key Laboratory of New Technology and Application in Resource Chemical Engineering,Nanning 530004,Guangxi,China)

        Thermodynamic and kinetic parameters of angiotensin converting enzyme(ACE)catalyzed hydrolysis of simulating substrate Hippuryl-Histidyl-Leucine(HHL)in vitro were determined by isothermal titration calorimetry(ITC). The effect of temperature on kinetic parameters was investigated;the results showed that the ACE-catalyzed reaction was endothermic with a small constant pressure specific heat capacity [cp=0.2126kJ/(mol·K)]. The value of molar hydrolysis enthalpy ΔHhydrwas positive and increased as temperature rose. The reaction mechanism was in accordance with the Michaelis-Menten model in the temperature range (298.15—313.15K);the effect of temperature on the Michaelis constant(Km)was negative,while catalytic constant(kcat)first increased then decreased with the increase of temperature,reaching the maximum value of 2.534s-1at 308.15K. Initial rate method was also used in order to compare with ITC method. The Kmmeasured by the initial rate method was relatively large because of the limitation in itself. The inhibitory type of the drug enalapril,known as ACE inhibitor,was determined by ITC and enzymatic kinetics analysis. The results show thatthe inhibitor was a competitive inhibitor with inhibition constant KI=12.1nmol/L. The ITC method is applicable for determining the inhibitor type in comparison with literature. It is a new approach for the development of ACE inhibitors. We determined that the active peptides Arg-Tyr-Leu-Gly-Tyr (RY-5)were noncompetitive inhibitors with KIof 1.0μmol/L by using this method..

        isothermal titration calorimetry;reaction kinetics;angiotensin converting enzyme;thermodynamic;biocatalysis

        O 642.3

        A

        1000-6613(2016)11-3459-06

        10.16085/j.issn.1000-6613.2016.11.011

        2016-04-27;修改稿日期:2016-07-04。

        國家自然科學(xué)基金面上項目(51372043)、廣西教育廳科研項目(KY2016YB035)、廣西大學(xué)博士啟動項目(XBZ160130)及廣西博士后專項資助項目。

        彭尚(1988—),男,碩士研究生,從事化學(xué)工藝方面的研究。聯(lián)系人:廖丹葵,教授,博士生導(dǎo)師。E-mail liaodk@gxu.edu.cn。

        猜你喜歡
        依那普利等溫底物
        兩種品牌大腸菌群酶底物法檢測試劑性能的比較
        云南化工(2021年6期)2021-12-21 07:30:56
        EPDM/PP基TPV非等溫結(jié)晶行為的研究
        解析參與植物脅迫應(yīng)答的蛋白激酶—底物網(wǎng)絡(luò)
        科學(xué)(2020年2期)2020-08-24 07:57:00
        依那普利聯(lián)合美托洛爾治療慢性心力衰竭的臨床療效分析
        快速檢測豬鏈球菌的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增方法
        納米CaCO3對FEP非等溫結(jié)晶動力學(xué)的影響
        中國塑料(2015年3期)2015-11-27 03:41:54
        泛素連接酶-底物選擇關(guān)系的研究進展
        依那普利聯(lián)合氨氯地平治療高血壓并發(fā)心力衰竭的效果觀察
        酰胺類β成核劑對PP-R非等溫結(jié)晶動力學(xué)影響
        中國塑料(2014年2期)2014-10-17 02:50:59
        纈沙坦與依那普利聯(lián)合治療肺心病心力衰竭的療效觀察
        亞洲綜合一區二區三區無碼| 少妇久久久久久被弄高潮| 人妻体体内射精一区二区| 四虎影视一区二区精品| 亚洲色四在线视频观看| 我揉搓少妇好久没做高潮| 又粗又黑又大的吊av| 精品国产乱码久久久软件下载| 国产成人丝袜网站在线看 | 中文字幕亚洲入口久久 | 男性av天堂一区二区| 日本做受120秒免费视频| 无遮无挡三级动态图| 国产精品白浆免费观看| 久99久精品视频免费观看v| 青青草视频网站免费看| 色综合久久网| 亚洲色欲色欲www在线播放| 久久露脸国产精品WWW| 丝袜美腿诱惑区在线播放| 精品国产免费一区二区三区香蕉| 国产三级在线观看免费| 亚洲AV日韩AV高潮喷潮无码| 91久久国产香蕉熟女线看| 网禁拗女稀缺资源在线观看| 性色av无码一区二区三区人妻| 在线观看日本一区二区| 亚洲综合原千岁中文字幕| 国产av剧情刺激对白| 国产又黄又爽又色的免费| 亚洲伊人久久成人综合网| 久久久国产精品三级av| 欧美老熟妇乱xxxxx| 76少妇精品导航| 色偷偷av一区二区三区人妖| 亚洲中文字幕久久在线| 最近免费mv在线观看动漫| 国产清品夜色一区二区三区不卡| 亚洲成熟中老妇女视频| 亚洲av无码久久精品色欲| 99福利在线|