劉瑋琳，李 羚，魏富強(qiáng)，韓劍眾*

殼聚糖修飾脂質(zhì)體的環(huán)境壓力和體外消化穩(wěn)定性

劉瑋琳，李 羚，魏富強(qiáng)，韓劍眾*

（浙江工商大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，浙江 杭州 310018）

以殼聚糖修飾的粗脂質(zhì)體和納米脂質(zhì)體為研究對(duì)象，通過(guò)加速氧化（加熱）、紫外照射-自由基誘導(dǎo)和模擬體外消化等處理后的脂質(zhì)體平均粒徑、表面電荷、丙二醛含量等的變化，表征殼聚糖修飾的粗脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)加熱、紫外照射和消化處理后，殼聚糖修飾脂質(zhì)體的穩(wěn)定性明顯比未修飾的脂質(zhì)體高，并且殼聚糖的質(zhì)量濃度越高，脂質(zhì)體抵抗環(huán)境壓力和體外消化穩(wěn)定性越強(qiáng)。

脂質(zhì)體；殼聚糖；消化；穩(wěn)定性

http://www.spkx.net.cn

脂質(zhì)體是由磷脂雙分子層形成的、內(nèi)部包含水相的封閉囊泡，具有緩釋、細(xì)胞親和、組織相容和靶向性等優(yōu)點(diǎn)，已成功應(yīng)用于生物、醫(yī)藥、化工、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域[1]。近年來(lái)，脂質(zhì)體在食品中的應(yīng)用日益受到關(guān)注，主要用于包裹營(yíng)養(yǎng)素、酶、食品添加劑和抗菌劑等[2-5]。然而，脂質(zhì)體作為一種微粒分散體系，在貯藏過(guò)程中易氧化、絮凝，導(dǎo)致粒徑變大和藥物滲漏；而且，脂質(zhì)體經(jīng)口攝入后易被小腸中膽鹽、酶等乳化、水解，降低了包埋物的生物利用率[6]。目前通過(guò)物理化學(xué)作用在脂質(zhì)體表面修飾蛋白、多糖或其他物質(zhì)，用以增加脂質(zhì)體雙層膜結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性和提高芯材的可控性，已成為脂質(zhì)體研究的新熱點(diǎn)。Zhou Wei等[7]制備了果膠修飾的VC脂質(zhì)體并評(píng)價(jià)了其長(zhǎng)期貯存的穩(wěn)定性和皮膚滲透性；Liu Weilin等[8]為了提高脂質(zhì)膜的穩(wěn)定性和防止運(yùn)載的功能成分中鏈脂肪酸的泄漏，采用層層自組裝靜電沉積技術(shù)制備了海藻酸鈉和殼聚糖雙層修飾的納米脂質(zhì)體，表征了該新型脂質(zhì)體的物化性質(zhì)和消化動(dòng)力學(xué)特性。

殼聚糖屬天然高分子多糖，表面帶正電荷，是一種陽(yáng)離子聚合物，是自然界中繼纖維素后的第二豐富的聚合物[9]。目前，利用殼聚糖修飾脂質(zhì)體的研究已有報(bào)道，如帥武平等[10]制備殼聚糖修飾的脂質(zhì)體，考察了不同相對(duì)分子質(zhì)量殼聚糖對(duì)脂質(zhì)體性質(zhì)的影響；Zhao Guodong等[11]研究了運(yùn)載輔酶Q10和α-硫辛酸的殼聚糖修飾脂質(zhì)體抗氧化性；Peng Hailong等[12]發(fā)現(xiàn)了N,N-十六烷基羧甲基/膽固醇脂質(zhì)體可以用于生產(chǎn)含有紅景天或其他生物活性食物成分的功能性食品的潛在載體系統(tǒng)。然而，以往的研究主要關(guān)注于修飾脂質(zhì)體對(duì)包埋物性質(zhì)的提高，而專門研究殼聚糖修飾脂質(zhì)體的穩(wěn)定性及體外消化特性較少，特別是從特殊人群如嬰兒等消化的角度來(lái)探討更是鮮見(jiàn)報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)，脂質(zhì)體在模擬體外消化過(guò)程中其結(jié)構(gòu)易受小腸中酶、膽鹽等影響，在胃部變化較小[13]。因此，本研究以牛奶脂肪球膜（milk fat globular membrane，MFGM）中提取的磷脂為原料，采用傳統(tǒng)的薄膜分散法制備粗脂質(zhì)體，并用微孔濾膜處理得到納米脂質(zhì)體，再用殼聚糖修飾脂質(zhì)體表面，表征其外觀及物化性質(zhì)；以平均粒徑、Zeta電位、丙二醛（malondiadehyde，MDA）為指標(biāo)，通過(guò)加速氧化（加熱處理）和紫外照射-自由基誘導(dǎo)，同時(shí)從嬰兒這種特殊人群的角度建立體外模擬小腸環(huán)境（成人對(duì)照）進(jìn)行脂質(zhì)體的模擬消化，研究修飾與未修飾脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。

1 材料與方法

1.1 試劑

2,2’-偶氮二（2-甲基丙基咪）二鹽酸鹽（2,2’-azobis (2-methylpropionamidine) dihydrochloride，AAPH） 上海阿拉丁生化科技股份有限公司；牛奶脂肪球膜中提取的磷脂（milk fat globular membrane，MFGM） 新西蘭恒天然公司；膽固醇（C7529）、吐溫-80（V900507）、VE（T3251）、殼聚糖（C8503）、尼羅紅（Nile red）72485、異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）46950、胰酶（P1750）、膽鹽（B8631）等 美國(guó)Sigma公司；丙二醛檢測(cè)試劑盒 南京建成生物工程研究所；實(shí)驗(yàn)用水均為超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

721型可見(jiàn)分光光度計(jì) 上海光譜有限公司；RE52-98型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠；D11971型超純水系統(tǒng)、高速冷凍離心機(jī) 美國(guó)Thermo公司；Nano-ZS粒度儀 英國(guó)Malvern公司；MD ImageXpress Micro高內(nèi)涵圖像處理系統(tǒng) 美國(guó)分子儀器公司。

1.3 方法

1.3.1 殼聚糖修飾脂質(zhì)體的制備

1.3.1.1 粗脂質(zhì)體的制備

參照Liu Weilin等[14]的方法，以MFGM中提取的磷脂為主要原料，采用薄膜分散法制備粗脂質(zhì)體，步驟如下：將MFGM磷脂、膽固醇、吐溫-80和VE按質(zhì)量比為6∶1∶1.8∶0.12混合溶解在一定量的無(wú)水乙醇中，用恒溫磁力攪拌器在40 ℃攪拌2 h使各成分溶解完全，然后采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀抽真空除去乙醇形成脂質(zhì)薄膜，緩緩加入0.05 mol/L pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液（phosphate buffered saline，PBS），在低速旋轉(zhuǎn)條件（60 r/min）條件下充分洗膜約1 h，獲得脂質(zhì)質(zhì)量濃度約為8 mg/mL的粗脂質(zhì)體，制備過(guò)程全程避光。

1.3.1.2 納米脂質(zhì)體的制備

采用0.22 μm的微孔濾膜將粗脂質(zhì)體過(guò)篩處理，分別得到了1、2、4、8、12 次過(guò)篩的脂質(zhì)體溶液，通過(guò)平均粒徑的測(cè)定，選擇最佳過(guò)膜次數(shù)。

1.3.1.3 殼聚糖修飾脂質(zhì)體的制備

分別將粗脂質(zhì)體和納米脂質(zhì)體緩慢滴入1 g/L和6 g/L的殼聚糖溶液中，體積比為1∶1，調(diào)節(jié)pH值為5.5，得到4 個(gè)樣品，分別為：1 g/L殼聚糖修飾納米脂質(zhì)體a、6 g/L殼聚糖修飾納米脂質(zhì)體b、1 g/L殼聚糖修飾粗脂質(zhì)體c和6 g/L殼聚糖修飾粗脂質(zhì)體d，另外以未修飾的粗脂質(zhì)體e為對(duì)照。

殼聚糖溶液的制備：分別稱取0.05、0.3 g的殼聚糖粉末溶解在50 mL體積分?jǐn)?shù)1%的乙酸溶液中，并用磁力攪拌器于常溫過(guò)夜攪拌使其溶解充分，分別用濾紙過(guò)濾，獲得澄清透明的1 g/L和6 g/L的殼聚糖溶液。

1.3.2 殼聚糖修飾脂質(zhì)體的物化性質(zhì)表征

1.3.2.1 物理性質(zhì)

分別取樣品a、b、c、d、e稀釋3 倍，使用Malvern粒度分析儀測(cè)量平均粒徑、多分散度（polydispersity index，PDI）和Zeta電位。

1.3.2.2 形貌

外觀形貌：取a、b、c、d、e 5 個(gè)樣品各裝入潔凈干燥的試管中拍照。

微觀結(jié)構(gòu)：用0.25 mg/mL的Nile red對(duì)脂質(zhì)體染色，染色液與脂質(zhì)體溶液體積比為1∶20；用2.8 mg/mL的FITC對(duì)殼聚糖染色，體積比為1∶25。用高內(nèi)涵圖像處理系統(tǒng)中的共聚焦功能拍照，觀察脂質(zhì)體的微觀圖像。

1.3.3 環(huán)境壓力穩(wěn)定性

1.3.3.1 加速氧化（熱處理）穩(wěn)定性

參照Klinkesorn等[15]的方法并做部分修改。取一定量的新鮮樣品a、b、c、d、e分別于70 ℃水浴中避光加熱2 h，同時(shí)取同體積的樣品不做加熱處理，于避光條件下保存2 h作為對(duì)照，測(cè)定加熱前后脂質(zhì)體的平均粒徑和Zeta電位，另外使用MDA檢測(cè)試劑盒測(cè)定脂質(zhì)體磷脂膜的氧化程度。

1.3.3.2 紫外（ultraviolet light，UV）照射穩(wěn)定性

參照Wang Jiayu等[16]的方法并做部分修改。將新制備的a、b、c、d、e樣品分別加入AAPH，采用UV照射30 min，同時(shí)以加入AAPH但不進(jìn)行UV照射的脂質(zhì)體作為對(duì)照，AAPH在體系中的濃度均為0.05 mol/L。測(cè)量樣品的平均粒徑和Zeta電位，另外使用MDA檢測(cè)試劑盒測(cè)定脂質(zhì)體磷脂膜的氧化程度。

1.3.4 體外小腸消化穩(wěn)定性

1.3.4.1 模擬小腸溶液（simulated intestinal fluid，SIF）的制備

參照Dupont等[17]的方法，配制體外模擬嬰兒和成人的小腸消化液，pH值為7.4，配方如表1所示。

表1 模擬小腸液配方Table 1 Formulations of simulated intestinal fluid

1.3.4.2 消化反應(yīng)

將a、b、c、d分別與嬰兒和成人SIF溶液混合，體積比為1∶1.5，另取脂質(zhì)體e分別與嬰兒、成人SIF溶液混合，體積比為1∶3，使得5 種樣品中脂質(zhì)體均占1/4的體積分?jǐn)?shù)。調(diào)節(jié)混合液的pH值為7.4，在37 ℃水浴恒溫?fù)u床（95 r/min）中混勻預(yù)熱。胰酶先用相應(yīng)的SIF溶液溶解，反應(yīng)開始計(jì)時(shí)為加入酶的瞬間。當(dāng)脂質(zhì)體消化1、5、60、120 min時(shí)，分別取樣于95 ℃的恒溫水浴鍋中加熱2 min使酶失活，用于測(cè)平均粒徑和Zeta電位。

2 結(jié)果與分析

2.1 殼聚糖修飾脂質(zhì)體環(huán)境壓力穩(wěn)定性質(zhì)表征

表2 脂質(zhì)體的平均粒徑、PDI和Zeta電位TTaabbllee 22 AAvveerraaggee ddiiaammeetteerr,, PPDDII aanndd ZZeettaa ppootteennttiiaall ooff lliippoossoommeess

如表2所示，1 g/L殼聚糖修飾納米脂質(zhì)體a、6 g/L殼聚糖修飾納米脂質(zhì)體b、1 g/L殼聚糖修飾粗脂質(zhì)體c、6 g/L殼聚糖修飾粗脂質(zhì)體d、未修飾的粗脂質(zhì)體e這5 種脂質(zhì)體的平均粒徑和Zeta電位各有不同，說(shuō)明了脂質(zhì)體粒徑大小與殼聚糖及其質(zhì)量濃度有直接關(guān)系。未修飾的脂質(zhì)體平均粒徑最小，呈負(fù)電性；隨著修飾在表面的殼聚糖質(zhì)量濃度增大，粒徑隨之變大，Zeta電位為正值且有所升高。殼聚糖的質(zhì)量濃度提高可以使脂質(zhì)體的修飾層厚度增加，導(dǎo)致其粒徑的變大。同時(shí)，脂質(zhì)體本身帶負(fù)電，而殼聚糖表面帶正電荷，故正電荷隨著殼聚糖的量增加而有所增大。而PDI值整體較大，說(shuō)明以薄膜分散法制備的脂質(zhì)體粒徑分布較不均勻，而當(dāng)殼聚糖修飾后粒徑分布更加不均勻。張激等[18]也認(rèn)為薄膜分散法制備得到的脂質(zhì)體為大多囊脂質(zhì)體，其所表現(xiàn)出的多分散度較大。

圖1 脂質(zhì)體的外觀形貌和微觀結(jié)構(gòu)Fig.1 Appearance and ultrastructure of liposomes

由圖1A可知，修飾脂質(zhì)體和未修飾脂質(zhì)體的外觀并無(wú)明顯的差別，主要可能是脂質(zhì)體與殼聚糖溶液本身的顏色并無(wú)太大差異，肉眼無(wú)法觀察到區(qū)別。另外，用高內(nèi)涵共聚焦功能觀察脂質(zhì)體的微觀結(jié)構(gòu)（圖1B～1G）。修飾脂質(zhì)體分內(nèi)外兩層，外層呈現(xiàn)外層包裹狀的為FITC標(biāo)記的殼聚糖，內(nèi)層中空囊泡狀的為Nile red標(biāo)記的脂質(zhì)體；而未修飾脂質(zhì)體只呈現(xiàn)囊泡結(jié)構(gòu)，殼聚糖只為點(diǎn)狀結(jié)構(gòu)。圖1B和1C分別為1 g/L殼聚糖修飾納米脂質(zhì)體與6 g/L殼聚糖修飾納米脂質(zhì)體，兩者粒徑差距不大（符合粒徑測(cè)量結(jié)果）。圖1D和1E分別為1 g/L殼聚糖修飾粗脂質(zhì)體和6 g/L殼聚糖修飾粗脂質(zhì)體，由于被修飾的是粗脂質(zhì)體，因此兩個(gè)樣品外觀明顯比1 g/L與6 g/L殼聚糖修飾納米脂質(zhì)體樣品顆粒大，與粒度儀測(cè)量結(jié)果吻合。從未修飾脂質(zhì)體，可以明顯觀察到脂質(zhì)體小球內(nèi)部中空結(jié)構(gòu)；從修飾與未修飾的粗脂質(zhì)體也可以明顯觀察到脂質(zhì)體的中空結(jié)構(gòu)。而由于納米脂質(zhì)體粒徑太小、顯微鏡放大倍數(shù)有限，較難清晰觀察到脂質(zhì)體的囊泡結(jié)構(gòu)。單純的殼聚糖（圖1G），并未加脂質(zhì)體，視野中只有呈現(xiàn)點(diǎn)狀顆粒結(jié)構(gòu)，用于和其他圖作對(duì)比。

2.2 環(huán)境壓力穩(wěn)定性研究

圖2 加熱前后脂質(zhì)體的平均粒徑（A）和Zeta電位（B）變化Fig.2 Changes in average diameter (A) and Zeta potential (B) of liposomes before and after heat treatment

使用Malvern粒徑電位儀測(cè)量加熱前后（加速氧化穩(wěn)定性）的殼聚糖修飾脂質(zhì)體的平均粒徑和Zeta電位。如圖2結(jié)果為：a：1 g/L殼聚糖修飾納質(zhì)體加熱前后粒徑分別為（318.5±4.9） nm和（205.5±2.9） nm，電位分別為（29.4±1.5） mV和（25.8±1.5） mV；b：6 g/L殼聚糖修飾納米脂質(zhì)體加熱前后粒徑分別為（512.0±11.8） nm和（625.0±22.8） nm，電位分別為（38.4±3.1） mV和（32.0±2.0） mV；c：1 g/L殼聚糖修飾粗脂質(zhì)體加熱前后粒徑分別為（567.7±36.6） nm和（286.4±7.4） nm，電位分別為（34.1±2.3） mV和（32.9±3.6） mV；d：6 g/L殼聚糖修飾粗脂質(zhì)體加熱前后粒徑分別為（909.2±24.5） nm和（606.1±29.3） nm，電位分別為（37.0±1.8） mV和（39.4±1.4） mV；e：粗脂質(zhì)體原液加熱前后粒徑分別為（208.6±4.3） nm和（253.9±12.1） nm，電位分別為（－17.0±1.2） mV和（－18.0±0.7） mV。粗脂質(zhì)體e在加熱前后，脂質(zhì)體的Zeta電位整體呈現(xiàn)負(fù)電位性，是由于MFGM磷脂制備的脂質(zhì)體本身在中性環(huán)境帶負(fù)電荷；而殼聚糖在pH 5.5時(shí)帶正電荷，修飾于脂質(zhì)體表面后整體電荷呈正值。經(jīng)熱處理后5 種脂質(zhì)體樣品電位各有不同程度改變，Thompson等[19]亦發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體經(jīng)加熱處理會(huì)引起顆粒聚集和粒徑、電位的變化。這可以說(shuō)明加熱對(duì)脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)造成破壞，使殼聚糖和磷脂壁發(fā)生一定程度的降解，導(dǎo)致平均粒徑以及Zeta電位的改變。

圖3 脂質(zhì)體經(jīng)AAPH誘導(dǎo)-紫外照射前后的平均粒徑（A）和Zeta電位（B）變化Fig.3 Changes in average diameter (A) and Zeta potentials (B) of liposomes before and after combined treatment with AAPH-induced oxidation and UV irradiation

另外，采用Malvern粒徑電位儀測(cè)量AAPH誘導(dǎo)-紫外照射前后的殼聚糖修飾脂質(zhì)體的平均粒徑和Zeta電位，同時(shí)以AAPH誘導(dǎo)氧化但不作紫外處理的脂質(zhì)體為對(duì)照，結(jié)果見(jiàn)圖3。a：1 g/L殼聚糖修飾納米脂質(zhì)體的粒徑分別為（281.0±2.7） nm和（288.4±2.8） nm，電位分別為（17.4±1.4）mV和（18.3±1.4） mV；b：6 g/L殼聚糖修飾納米脂質(zhì)體的粒徑分別為（269.2±7.4） nm和（276.9±4.6） nm，電位分別為（21.5±1.5） mV和（28.3±3.3） mV；c：1 g/L殼聚糖修飾粗脂質(zhì)體的粒徑分別為（439.3±19.9） nm和（474.1±20.5） nm，電位分別為（22.9±0.2） mV和（20.9±1.6） mV；d：6 g/L殼聚糖修飾粗脂質(zhì)體的粒徑分別為（426.7±32.4） nm和（460.5±22.2） nm，電位分別為（23.5±2.0） mV和（24.3±1.2） mV；e：粗脂質(zhì)體原液的粒徑分別為（384.7±2.9） nm和（268.8±8.5） nm，電位分別為（－3.7±0.5） mV和（－3.4±0.1） mV。經(jīng)紫外照射后，a、b、c、d脂質(zhì)體的平均粒徑整體上略微有所增大，但增幅不明顯；而e（粗脂質(zhì)體）的粒徑卻大幅度減小，表明未修飾的脂質(zhì)體經(jīng)AAPH誘導(dǎo)-紫外照射后，脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)所有變化，穩(wěn)定性較差。賀然等[20]在研究對(duì)脂質(zhì)體穩(wěn)定性影響時(shí)提到，AAPH是一種自由基引發(fā)劑，在水溶液中可以自發(fā)產(chǎn)生羥自由基，從而引發(fā)磷脂的氧化，而紫外線可以直接作用于磷脂的脂肪酸側(cè)鏈，產(chǎn)生自由基，引發(fā)磷脂氧化反應(yīng)。Nieto等[21]也有類似報(bào)道，指出經(jīng)AAPH誘導(dǎo)氧化，脂質(zhì)體的氧化速率明顯加快。這是利用AAPH作為誘導(dǎo)氧化劑加速實(shí)驗(yàn)進(jìn)程的依據(jù)。另外，與加熱前后電位變化趨勢(shì)類似，脂質(zhì)體的Zeta電位在紫外照射后整體呈上升趨勢(shì)；a、b、c、d樣品皆為正電位，e樣品為負(fù)。

圖4 加熱（A）和AAPH誘導(dǎo)-紫外照射（B）前后的MDA含量變化Fig.4 Changes in malondialdehyde (MDA) of before and after heating (A) and combined treatment with AAPH induced-oxidation and UV irradiation (B)

除平均粒徑與表面電位外，還測(cè)量了脂質(zhì)體在加熱和紫外照射前后MDA含量變化，結(jié)果如圖4所示。MDA是非酶系統(tǒng)產(chǎn)生的自由基攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用而產(chǎn)生的脂質(zhì)過(guò)氧化物[22]，其大小可以指示脂質(zhì)體膜被氧化的程度。從整體上看，脂質(zhì)體經(jīng)加熱或紫外處理后MDA值均有所上升。其中，經(jīng)加熱處理的e（未修飾的粗脂質(zhì)體）相比于其他樣品，MDA含量大幅提高，說(shuō)明該脂質(zhì)體磷脂被氧化的程度較高，穩(wěn)定性較差；低質(zhì)量濃度的殼聚糖修飾的脂質(zhì)體較高質(zhì)量濃度殼聚糖修飾的MDA含量變化大，表明殼聚糖質(zhì)量濃度高，形成的外保護(hù)膜層較厚，對(duì)脂質(zhì)體的磷脂膜保護(hù)較明顯。該實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步說(shuō)明，殼聚糖修飾脂質(zhì)體可在一定程度上提高其穩(wěn)定性。

2.3 體外小腸消化穩(wěn)定性

圖5 脂質(zhì)體在模擬嬰兒（A和B）和成人（C和D）小腸液中不同消化時(shí)間的平均粒徑和Zeta電位變化Fig.5 Changes in average diameter and Zeta potential of liposomes during simulated infant (A and B) and adult (C and D) SIF digestion

由圖5可知，脂質(zhì)體在嬰兒小腸環(huán)境中的粒徑比成人中小，Zeta電位都有不同程度的降低，嬰兒的降低幅度比成人小。這說(shuō)明嬰兒腸道對(duì)脂質(zhì)體的影響小于成人，這是由于成人腸液中含有更高濃度的膽鹽和胰酶。脂質(zhì)體本身是一種脂質(zhì)，胰酶中主要為胰蛋白酶、胰淀粉酶與胰脂肪酶，其中的胰脂肪酶是使脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)改變的關(guān)鍵。脂肪酶即三?；视王；饷福纱呋孜镉椭?，生成脂肪酸、甘油和甘油單酯或二酯，導(dǎo)致腸液環(huán)境對(duì)脂質(zhì)體有較大的破壞性[23]。而殼聚糖為多糖，在外層對(duì)脂質(zhì)體有一定的保護(hù)作用，降低了胰酶與脂質(zhì)的接觸機(jī)會(huì)，從而減輕了脂質(zhì)體的破壞程度[24]。Zou Liqiang等[25]研究了殼聚糖修飾納米脂質(zhì)體在模擬消化環(huán)境中的穩(wěn)定性變化，發(fā)現(xiàn)在胃腸道環(huán)境下的顆粒大小沒(méi)有明顯變化，但與模擬腸液混合后立即形成沉淀物，也證明了腸液對(duì)脂質(zhì)體穩(wěn)定性的影響更大。

3 結(jié) 論

本研究通過(guò)顯微鏡觀察得知脂質(zhì)體和修飾脂質(zhì)體已成功制備；殼聚糖修飾與未修飾脂質(zhì)體經(jīng)加熱（加速氧化）、AAPH誘導(dǎo)-紫外照射和模擬小腸液體外消化處理結(jié)果表明：當(dāng)脂質(zhì)體受外界環(huán)境影響時(shí)，殼聚糖修飾的脂質(zhì)體明顯比未修飾的脂質(zhì)體穩(wěn)定；高質(zhì)量濃度殼聚糖修飾的脂質(zhì)體比低濃度殼聚糖修飾的脂質(zhì)體具有更高的穩(wěn)定性；相比在嬰兒小腸液的消化，脂質(zhì)體在成人小腸液消化過(guò)程中結(jié)構(gòu)變化更為明顯。

[1] TAYLOR T M, DAVIDSON P M, BRUCE B D, et al. Liposomal nanocapsules in food science and agriculture[J]. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 2005, 45(7/8): 587-605. DOI:10.1080/10408390591001135.

[2] THOO Y Y, ABAS F, LAI O M, et al. Antioxidant synergism between ethanolic Centella asiatica extracts and α-tocopherol in model systems[J]. Food Chemistry, 2013, 138(2): 1215-1219. DOI:10.1016/ j.foodchem.2012.11.013.

[3] MAHERANI B, ARAB-TEHRANY E, KHEIROLOMOOM A, et al. Influence of lipid composition on physicochemical properties of nanoliposomes encapsulating natural dipeptide antioxidant L-carnosine[J]. Food Chemistry, 2012, 134(2): 632-640. DOI:10.1016/ j.foodchem.2012.02.098.

[4] NONGONIERMA A B, ABRLOVA M, KILCAWLEY K N. Encapsulation of a lactic acid bacteria cell-free extract in liposomes and use in cheddar cheese ripening[J]. Foods, 2013, 2(1): 100-119. DOI:10.3390/foods2010100.

[5] LIU W L, YE A Q, LIU W, et al. Liposomes as food ingredients and nutraceutical delivery systems[J]. Agro Food Industry Hi-Tech, 2013, 24(2): 68-71. DOI:10.1533/9780857095909.3.287.

[6] LIU W L, YE A Q, LIU W, et al. Behaviour of liposomes loaded with bovine serum albumin during in vitro digestion[J]. Food Chemistry, 2015, 175: 16-24. DOI:10.1016/j.foodchem.2014.11.108.

[7] ZHOU W, LIU W, ZOU L Q, et al. Storage stability and skin permeation of vitamin C liposomes improved by pectin coating[J]. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 2014, 117: 330-337. DOI:10.1016/j.colsurfb.2014.02.036.

[8] LIU W, LIU J H, LIU W, et al. Improved physical and in vitro digestion stability of a polyelectrolyte delivery system based on layerby-layer self-assembly alginate-chitosan-coated nanoliposomes[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2013, 61(17): 4133-4144. DOI:10.1021/jf305329n.

[9] PANYA A, LAGUERRE M, LECOMTE J, et al. Effects of chitosan and rosmarinate esters on the physical and oxidative stability of liposomes[J]. Journal of Agricultural Food Chemistry, 2010, 58: 4679-5684. DOI:10.1021/jf100133b.

[10] 帥武平, 張幸國(guó), 陳金亮, 等. 殼聚糖修飾脂質(zhì)體的制備和性質(zhì)研究[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志, 2007, 42(15): 1159-1163. DOI:10.3321/ j.issn:1001-2494.2007.15.011.

[11] ZHAO G D, SUN R, NI S L, et al. Development and characterisation of a novel chitosan-coated antioxidant liposome containing both coenzyme Q10 and alpha-lipoic acid[J]. Journal of Microencapsulation, 2015: 157-165. DOI:10.3109/02652048.2014.973072.

[12] PENG H L, LI W J, NING F J, et al. Amphiphilic chitosan derivativesbased liposomes: synthesis, development, and properties as a carrier for sustained release of salidroside[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2014, 62(3): 626-633. DOI:10.1021/jf4039925.

[13] LIU W, YE A Q, LIU W, et al. Stability during in vitro digestion of lactoferrin-loaded liposomes prepared from milk fat globule membrane-derived phospholipids[J]. Journal of Dairy Science, 2013, 96(4): 2061-2070. DOI:10.3168/jds.2012-6072.

[14] LIU W L, YE A Q, LIU C M, et al. Structure and integrity of liposom es prepared from milk- or soybean-derived phospholipids during in vitro digestion[J]. Food Research International, 2012, 48(2): 499-506. DOI:10.1016/j.foodres.2012.04.017.

[15] KLINKESORN U, MCCLEMENTS D J. Influence of chitosan on stability and lipase digestibility of lecithin-stabilized tuna oil-inwater emulsions[J]. Food Chemistry, 2009, 114(4): 1308-1315. DOI:10.1016/j.foodchem.2008.11.012.

[16] WANG J Y, MARKS J, LEE K Y C. Nature of interactions between PEO-PPO-PEO triblock copolymers and lipid membranes: (I) effect of polymer hydrophobicity on its ability to protect liposomes from peroxidation[J]. Biomacromolecules, 2012, 13(9): 2616-2623. DOI:10.102-1/bm300847x.

[17] DUPONT D, MANDALARI G, MOLLE D, et al. Comparative resistance of food proteins to adult and infant in vitro digestion models[J]. Molecular Nutritio n and Food Research, 2010, 54(6): 767-780. DOI:10.1002/mnfr.200900142.

[18] 張激, 程艷菊, 呂浩, 等. 脂質(zhì)體的研究新進(jìn)展[J]. 南京工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2003, 25(4): 102-106. DOI:10.3969/j.issn.1671-7627.2003.04.024.

[19] THOMPSON A K, HAISMAN D, SINGH H. Ph ysical stability of liposomes prepared from milk fat globule membrane and soya phospholipids[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2006, 54: 6390-6397. DOI:10.1021/jf0605695.

[20] 賀然, 劉國(guó)琴, 李琳. β-谷甾醇對(duì)脂質(zhì)體抗氧化性及膜結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的影響[J]. 中國(guó)油脂, 2012, 37(9): 57-61. DOI:10.3969/ j.issn.1003-7969.2012.09.015.

[21] NIETO G, HUVAERE D, SKIBSTED L H. Antioxidant activity of rosemary and thyme by-products and synergism with added antioxidant in a liposome system[J]. European Food Research and Technology, 2011, 233: 11-18. DOI:10.1007/s00217-011-1486-9.

[22] 魏茂提, 王世鑫, 李玉明, 等. 單純收縮期高血壓和雙相高血壓患者血清NOS活力及MDA水平的變化[J]. 中國(guó)慢性病預(yù)防與控制, 2001, 9(4): 149-150. DOI:10.3969/j.issn.1004-6194.2001.04.0 02.

[23] WILDE P J, CHU B S. Interfacial & colloidal aspects of lipid digestion[J]. Advances in Colloid and Interface Science, 2011, 165(1): 14-22. DOI:10.1016/j.cis.2011.02.004.

[24] GIBIS M, RAHN N, WEISS J. Physical and oxidative stability of uncoated and chitosan-coated liposomes containing grape seed extract[J]. Pharmaceutics, 2013, 5(3): 421-433. DOI:10.3390/ pharmaceutics5030421.

[25] ZOU L Q, PENG S F, LIU W, et al. A novel delivery system dextran sulfate coated amphiphilic chitosan derivatives-based nanoliposome: capacity to improve in vitro digestion stability of (?)-epigallocatechin gallate[J]. Food Research International, 2015, 69: 114-120. DOI:10.1016/j.foodres.2014.12.015.

Environmental Stress and in Vitro Digestion Stability of Chitosan-Coated Liposomes

LIU Weilin, LI Ling, WEI Fuqiang, HAN Jianzhong*
(School of Food Science and Biotechnology, Zhejiang Gongshang University, Hangzhou 310018, China)

Chitosan-modified crude liposomes and nano liposomes were studied for changes in average diameter, surface charge and malondialdehyde content after treatment with accelerated oxidation (heating), UV radiation combined with free radical inducement and in vitro simulated digestion. The results showed that, after each treatment, the stability of the chitosan-coated liposomes was significantly higher than bare liposomes. The higher the concentration of chitosan, the stronger the stability of coated liposomes under environment stress and digestion.

liposomes; chitosan; digestion; stability

10.7506/spkx1002-6630-201601002

TS201.4

A

1002-6630（2016）01-0006-06

劉瑋琳, 李羚, 魏富強(qiáng), 等. 殼聚糖修飾脂質(zhì)體的環(huán)境壓力和體外消化穩(wěn)定性[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(1): 6-11.

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201601002. http://www.spkx.net.cn

LIU Weilin, LI Ling, WEI Fuqiang, et al. Environmental stress and in vitro digestion stability of chitosan-coated liposomes[J]. Food Science, 2016, 37(1): 6-11. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201601002.

2015-03-01

國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（31401482）；浙江省教育廳科研項(xiàng)目（Y201432148）；

浙江省食品科學(xué)與工程重中之重一級(jí)學(xué)科開放基金項(xiàng)目（JYTSP20142011）；

浙江工商大學(xué)研究生科研創(chuàng)新基金項(xiàng)目（3100XJ1514117）

劉瑋琳（1984—），女，講師，博士，研究方向?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)物及其運(yùn)載體系的生物利用。E-mail：lwl512@zjgsu.edu.cn

*通信作者：韓劍眾（1963—），男，教授，博士，研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量安全控制。E-mail：Hanjz@zjgsu.edu.cn