鐘金鳳　方熱軍

(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，長(zhǎng)沙410128)

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環(huán)磷酰胺免疫抑制機(jī)制及在動(dòng)物模型上的應(yīng)用①

鐘金鳳方熱軍

(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，長(zhǎng)沙410128)

近年來，環(huán)境污染、生態(tài)失衡等引發(fā)的人與動(dòng)物免疫抑制性疾病逐年上升。為進(jìn)一步研究此類疾病，免疫抑制模型的建立顯得尤為重要。環(huán)磷酰胺(Cyclophosphamide，CTX)是制備動(dòng)物免疫抑制模型中應(yīng)用廣泛的藥物，它最早可追溯到第一次世界大戰(zhàn)，耶魯大學(xué)Louis Goodman和Alfred Gilman教授解剖戰(zhàn)死于生化武器的士兵時(shí)發(fā)現(xiàn)芥子氣有殺死淋巴組織的效果，由此揭開免疫抑制劑的序幕。1935年人工合成毒性較低但作用與芥子氣相似的氮芥(Nitrogen mustard)，試驗(yàn)證明其對(duì)淋巴肉瘤和白血病有療效，但副作用大；隨后以氮芥為基礎(chǔ)，合成眾多的免疫抑制劑，其中CTX能通過殺傷免疫細(xì)胞而影響免疫的各階段而得以廣泛的應(yīng)用[1]。

1　CTX在體內(nèi)的吸收、代謝

CTX易溶于水和酒精，在體內(nèi)易于吸收，生物利用率為85%～100%，小部分藥品在肝臟和腸道出現(xiàn)首過效應(yīng)[2]。無論是經(jīng)口服還是靜脈注射的CTX在體內(nèi)主要由肝臟進(jìn)行代謝，在肝細(xì)胞色素P450酶的作用下，CTX首先發(fā)生4位C羥化，生成初級(jí)代謝產(chǎn)物4-羥基環(huán)磷酰胺，4-羥基環(huán)磷酰胺易通過被動(dòng)擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞[3]，并產(chǎn)生同分異構(gòu)體——醛磷酰胺，兩種混合物入血后與血漿蛋白結(jié)合而快速分布全身，毒性低。極少部分4-羥基環(huán)磷酰胺和醛磷酰胺可氧化生成4-酮環(huán)磷酰胺和羧基磷酰胺，無細(xì)胞毒作用，絕大部分隨尿排出體外；大部分未經(jīng)氧化的醛磷酰胺可部分降解為活性代謝產(chǎn)物磷酰胺氮芥和丙烯醛，羧基磷酰胺轉(zhuǎn)化為去甲氮芥[4](圖1)。

磷酰胺氮芥通過共價(jià)結(jié)合于DNA上，引起DNA-DNA、DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)和雙鏈DNA斷裂，破壞快速生長(zhǎng)的細(xì)胞[5]。丙烯醛將DNA中鳥嘌呤N-7烷基化生成兩種產(chǎn)物：一種產(chǎn)物是烷基化產(chǎn)生乙基和羥乙基兩種取代基的胺，另一種產(chǎn)物是產(chǎn)生兩個(gè)乙基交聯(lián)胺，它們分別是：N-2-乙基-N7-鳥嘌呤-N-2-羥乙基胺{N-[2-(N7-guaninyl) ethyl]-N-[2-hydroxyethyl]-amine，G-NOR-OH}單加成物和N,N-2-二乙基-N7-鳥嘌呤交聯(lián){N,N-bis[2-(N7-guaninyl) ethyl] amine cross-links，G-NOR-G}，G-NOR-G交聯(lián)具有強(qiáng)烈的細(xì)胞毒性，是CTX生物活性的主要成分[6]。去甲氮芥可引起組蛋白H2A的變異體H2A.X和P53的磷酸化，引起DNA受損[7]。

2　CTX免疫抑制機(jī)制

2.1CTX對(duì)細(xì)胞周期的影響機(jī)制

2.1.1ATM/ATR-Chk1/Chk2(人共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張性突變基因/人共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張性突變基因Rad3相關(guān)蛋白-細(xì)胞周期監(jiān)控點(diǎn)激酶1/細(xì)胞周期監(jiān)控點(diǎn)激酶2)路徑調(diào)節(jié)機(jī)制連續(xù)分裂的細(xì)胞從一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂結(jié)束的全過程稱為一個(gè)細(xì)胞周期，包含G1、S、G2和M期，并通過一套嚴(yán)格有效的細(xì)胞周期監(jiān)測(cè)點(diǎn)來保證遺傳物質(zhì)的正確復(fù)制[8]。CTX代謝活性物G-NOR-G交聯(lián)影響維持基因組穩(wěn)定的重要因子來改變細(xì)胞周期(圖2)。G-NOR-G交聯(lián)導(dǎo)致DNA受損后，ATM/ATR-Chk1/Chk2被激活，致p53的Ser15、20、37磷酸化，活化的p53從而使細(xì)胞周期停滯于S期[9,10]。

圖1　CTX在體內(nèi)代謝過程[3，4]Fig.1　Metabolic processes of CTX in body[3，4]

2.1.2Cyclin D1/CDK4(細(xì)胞周期蛋白D1/細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4)路徑調(diào)節(jié)機(jī)制真核細(xì)胞的分裂周期由調(diào)控細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(Cyclin-dependent kinases，CDKs)家族調(diào)節(jié)，CDK4和細(xì)胞周期蛋白D1(Cyclin D1)結(jié)合形成的配合物是一個(gè)重要控制細(xì)胞增殖過程中的G1期的元件[11]。Cyclin D1是細(xì)胞周期蛋白亞型之一，能夠促進(jìn)細(xì)胞周期由G1期轉(zhuǎn)向S期。3周齡BALB/c雄性小鼠連續(xù)7 d腹腔注射80 mg/(kg·d) CTX用以誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞抑制，采用免疫印跡法分析Cyclin D1/CDK4蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示試驗(yàn)組Cyclin D1/CDK4蛋白表達(dá)顯著低于空白對(duì)照組[12]，導(dǎo)致細(xì)胞停滯于G1期。

2.2CTX對(duì)細(xì)胞凋亡的影響機(jī)制

2.2.1Fas/Fas L(脂肪酸合成酶/脂肪酸合成酶配體)系統(tǒng)介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡CTX可影響死亡受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路Fas/Fas L介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡(圖3)[13]。脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase，F(xiàn)as)是一種跨膜蛋白，屬于腫瘤壞死因子受體超家族成員，它與脂肪酸合成酶配體(Fas ligand，F(xiàn)as L)結(jié)合后，再募集Fas相關(guān)死亡閾蛋白(Fas-associated death domain protein,FADD蛋白)，構(gòu)成死亡誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合體，由此激活下游蛋白caspases(含半胱氨酸的天門冬氨酸蛋白水解酶，cysteinyl aspartate specific proteinase)產(chǎn)生，引起細(xì)胞凋亡不可逆進(jìn)行[14]。大鼠胸腺細(xì)胞暴露于70 mg/kg CTX 4～48 h，免疫組織化學(xué)測(cè)定

圖2　CTX通過ATM/ATR-Chk1/Chk2信號(hào)通路調(diào)節(jié)機(jī)制[8]Fig.2　Regulation mechanism of CTX through ATM/ATR-Chk1/Chk2 signaling pathway[8]Note: ATM.Ataxia telangiectasia mutated；ATR.Atm-rad 3-related；Chk1.Checkpoint kinase 1；Chk2.Checkpoint kinase 2；p53.p53 gene；P.Phosphorylation.

結(jié)果顯示：在4～8 h內(nèi)試驗(yàn)組Fas抗原蛋白表達(dá)量與對(duì)照組相比顯著升高(P<0.05)[15]。人淋巴瘤Jurkat細(xì)胞系單獨(dú)或用含有2 mg/kg CTX培養(yǎng)基培養(yǎng)3 d，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)出試驗(yàn)組細(xì)胞表面含有Fas抗原蛋白，對(duì)照組則無Fas抗原蛋白，結(jié)果表明，CTX可能是通過Fas途徑介導(dǎo)細(xì)胞凋亡[16]。除此，CTX能顯著誘導(dǎo)Caspases蛋白產(chǎn)生(P<0.05)[17]。

2.2.2Bax/Bcl-2(B淋巴細(xì)胞瘤-2相關(guān)X蛋白/B淋巴細(xì)胞瘤-2)介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡細(xì)胞脂肪變性與氧應(yīng)激使Bcl-2相關(guān)X蛋白(bcl-2 assaciated x protein，Bax)合成增多且轉(zhuǎn)移至線粒體外膜形成同源二聚體，引起線粒體PT孔打開，釋放細(xì)胞色素C，誘發(fā)細(xì)胞凋亡；而分布于線粒體外膜的Bcl-2可與Bax結(jié)合，避免Bax同源二聚體形成，抑制PT孔開放，體現(xiàn)抗凋亡作用。CTX能顯著增加成年雄性Wistar大鼠心臟組織Bax mRNA表達(dá)水平(P<0.05)，而降低抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表達(dá)(P<0.05)[18]。單劑量150 mg/kg CTX作用活體小鼠，第二天紅細(xì)胞生成受到影響，凋亡增大，細(xì)胞密度減少，骨髓龕受嚴(yán)重干擾，檢測(cè)顯示Bax mRNA表達(dá)明顯[19]。由此可見，CTX可增加促凋亡基因同時(shí)抑制抗凋亡基因mRNA表達(dá)，從而達(dá)到誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的目的。

2.3CTX對(duì)細(xì)胞因子的影響機(jī)制CTX對(duì)細(xì)胞因子的影響主要通過(樹突狀細(xì)胞相關(guān)C-型凝集素-1 Dectin-1，dendritic cell-associated c-type lectin-1)、Toll樣受體2(Toll-like receptor 2，TLR2)和Toll樣受體4，(Toll-like receptor 4，TLR4)信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)。Dectin-1主要表達(dá)在單核巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等細(xì)胞上，與細(xì)胞成熟、免疫狀態(tài)有關(guān)，它與TLR2和TLR4最終通過NF-κB途徑影響細(xì)胞因子分泌(圖4)[20，21]。CTX可抑制小鼠肺部Dectin-1 mRNA表達(dá)，使得對(duì)真菌敏感[22]。24只雌性昆明小鼠腹腔注射CTX150 mg/kg制備免疫抑制模型，4 h后肺泡巨噬細(xì)胞TLR2 mRNA表達(dá)與對(duì)照組相比極顯著下降；8 h后TLR4 mRNA表達(dá)顯著降低[23]。BALB/c小鼠于第1、4天腹腔注射150 mg/kg CTX建立免疫抑制模型，第9天取脾臟測(cè)定相關(guān)mRNA，研究發(fā)現(xiàn)：模型組小鼠Th2細(xì)胞因子IL-4、GATA-3mRNA(表達(dá)于Th2細(xì)胞的鋅指狀結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子)相對(duì)表達(dá)顯著高于對(duì)照組，而Th1細(xì)胞因子IL-2、T-bet mRNA與對(duì)照組無顯著差異，結(jié)果表明：CTX可調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞因子[24，25]。

圖3　CTX通過Fas/Fas L系統(tǒng)介導(dǎo)細(xì)胞凋亡機(jī)制[13]Fig.3　Mechanism of CTX-mediated apoptos by Fas/Fas L system[13]Note: Fas.Fatty acid synthase；Fas L.Fas ligand；FADD.Fas-associated death domain protein；caspases.Cysteinyl aspartate specific proteinase.

2.4CTX對(duì)細(xì)胞過氧化的影響機(jī)制CTX對(duì)脂質(zhì)過氧化的影響主要通過超氧化歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSHpx)等關(guān)鍵酶而起作用。在線粒體呼吸鏈電子傳遞過程中，極少部分單電子從呼吸鏈中漏出，直接傳遞給O2生成氧自由基，形成脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，如丙二醛 (Malonaldehyde,MDA)等，引發(fā)細(xì)胞氧化損傷，正常生理狀態(tài)時(shí)，自由基不斷產(chǎn)生，通過SOD和GSHpx不斷清除，但在用藥或病理狀態(tài)下，此平衡有所改變(圖5)[26]。Tripathi等[27]以100 mg/kg腹膜注射小鼠表明CTX能降低SOD和GSH含量，增加MDA含量；將CTX按30、90、150、300和450 mg/kg的劑量腹膜內(nèi)給藥于昆明雌性小鼠，4 h后，GSH活性顯著降低(P<0.05)[28]。CTX可引起氧化應(yīng)激，以SOD和GSH含量減少為表現(xiàn)[29]，較多的自由基潴留于體內(nèi)，引起蛋白質(zhì)、脂質(zhì)過氧化，DNA損傷等。

圖4　CTX通過dectin-1、TLR2和TLR4信號(hào)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子相關(guān)機(jī)制Fig.4　Mechanism of CTX regulating cell factors through Dectin-1,TLR2 and TLR4 signaling pathwayNote: Dectin-1.Dendritic cell-associated c-type lectin-1；TLR2.Toll-like receptor 2；TLR4.Toll-like receptor 4；NF-κB.Nuclear factor-Kappa B.

3　CTX在動(dòng)物抑制模型上的運(yùn)用

CTX作為免疫抑制劑被廣泛運(yùn)用在動(dòng)物，主要集中在豬、雞和小鼠上，而羊、牛、馬等動(dòng)物未見報(bào)道，且多選擇無特定病原體(SPF)或清潔級(jí)動(dòng)物，通過肌肉注射或者腹腔注射，建立免疫抑制模型。CTX施藥劑量差異甚大，最大的單次劑量為200 mg/kg、總劑量為500 mg/kg，最小的單次劑量為4 mg/kg、總劑量為10 mg/kg，從總體趨勢(shì)看，在單次劑量為200 mg/kg、總劑量為500 mg/kg的范疇內(nèi)，隨著劑量越大，CTX作用緯度越廣，持續(xù)時(shí)間越長(zhǎng)(表1)。

3.1CTX對(duì)模型動(dòng)物免疫器官的影響一定劑量的CTX可顯著抑制動(dòng)物的外周免疫器官。馮焱等[42]研究表明用80、120 mg/kg CTX作用的AA雞法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)顯著(P<0.01)低于對(duì)照組；朱曉彤等[43]也表明80 mg/kg CTX可顯著降低雞群的脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)，160 mg/kg可顯著降低雞群的胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)。連續(xù)注射3 d給3周齡雞注射4 mg/(kg·d)CTX，法氏囊指數(shù)極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)[38]。究其原因，可能是CTX顯著提高脾臟、法氏囊和胸腺細(xì)胞凋亡率(P<0.05)[30]。

圖5　CTX對(duì)脂質(zhì)過氧化影響機(jī)制[26]Fig.5　Mechanism of CTX on lipid peroxidation[26]Note: SOD.Superoxide dismutase；GSHpx.Glutathione peroxidase；GSH.Glutathione；GSSG.Oxidized glutathione；GSR.Glutathione reductase.

表1CTX在動(dòng)物抑制模型上運(yùn)用

Tab.1Literatures of CTX about animal models

LiteraturesExperimentalanimalsDrugdeliveryDrugdoseChenetal[30]one-day-older-huang-chickensintramuscularinjection40mg/kg,everyfourthdayfor3timesFickenetal[31]7-to-8-week-oldfemaleNicholasturkeysintramuscularinjection0-100mg/kg,onceadayfor3successivedaysMedleauetal[32]dogsintramuscularinjection10mg/kg,asingledoseMiao[33]mouseintraperitonealinjection80mg/kg,onceadayfor3successivedaysHaradaetal[34]pigsintraperitonealinjection15mg/kg,fiveinjectionsHuyanetal[35]specified-pathogen-freemaleBalb/cmouseintramuscularinjection50-200mg/kg,twoinjectiononday1andday4Fanetal[36]1-day-oldWhiteRomanchickens(male)intramuscularinjection80mg/kg,onceadayfor3successivedaysFanetal[37]1-day-oldWhiteRomanchickens(male)intramuscularinjection80mg/kg,onceadayfor3successivedaysElabasyetal[38]3-week-oldinbredchickensintramuscularinjection4mg/(kg·d),onceadayfor3successivedaysDerbyshireetal[39]5-week-oldspecified-pathogen-freepigletsintraperitonealinjection100mg/kg,asingledoseNakamuraetal[40]4-week-oldspecified-pathogen-freechickensintraperitonealinjection50mg/kg,onceadayfor3successivedaysHanetal[41]weanedpigsintraperitonealinjection50mg/kg,asingledose

一定劑量的CTX對(duì)肝臟也有影響。雄性ICR小鼠腹腔注射100、150、200 mg/(kg·d) CTX，連續(xù)5，7 d后試驗(yàn)組肝組織SOD和GSH含量有所下降，MDA含量顯著升高，肝臟線粒體膜電位則隨CTX劑量增大呈下降趨勢(shì)，另外，低劑量CP有抑制小鼠肝臟線粒體電壓依賴性陰離子通道蛋白(VDAC)轉(zhuǎn)錄的趨勢(shì)。由此表明，CP對(duì)肝臟的損傷作用主要是改變線粒體VDAC的表達(dá)量從而降低線粒體細(xì)胞脂質(zhì)氧化能力[44]。

3.2CTX對(duì)模型動(dòng)物免疫細(xì)胞的影響CTX對(duì)動(dòng)物非特異性淋巴細(xì)胞的影響非常廣泛。用0～100 mg/kg CTX對(duì)7～8周尼古拉斯雌性火雞作用3日，血液學(xué)參數(shù)顯示白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血小板和異嗜性細(xì)胞顯著減少[31]。Medleau等[32]等用10 mg/kg CTX肌肉注射健康狗，3 d后外周血白細(xì)胞顯著降低(P<0.05)。給昆明種小鼠連續(xù)注射3 d 80 mg/kg CTX，7 d后小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率極顯著降低[33]。8頭3～4月齡約克豬于0、2、4、6、8 d腹腔注射15 mg/kg CTX，總白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞在2～12 d顯著低于對(duì)照組，中性粒細(xì)胞在4～10 d顯著低于對(duì)照組[34]，這可能與成髓細(xì)胞有絲分裂活動(dòng)受抑制和淋巴細(xì)胞尤其是B淋巴細(xì)胞有絲分裂靜止有關(guān)[45]。

CTX對(duì)動(dòng)物特異性免疫細(xì)胞影響顯著。Huyan等[35]給無特定病原體的雄性BALB/c小鼠于第1天和第4天肌肉注射50、75、100、125、150、175、200 mg/kg CTX，結(jié)果表明：除 50 mg/kg組，其余組白細(xì)胞在第1天呈現(xiàn)劑量依賴型減少，在第4天達(dá)到最低，第10天反彈，第17天再度回落； 100～150 mg/kg在第4天呈現(xiàn)出CD3+T、CD4+T顯著減少，CD8+T顯著增加，在第10天CD19+T顯著減少。經(jīng)CTX處理禽的免疫器官的滑囊中T細(xì)胞分布未觀察到顯著改變，但B淋巴細(xì)胞顯著減少，甚至消失[46]。

3.3CTX對(duì)模型動(dòng)物免疫分子的影響CTX對(duì)非特異性免疫分子的影響是廣泛而顯著的。Fan等[36]用80 mg/kg劑量對(duì)11日齡白羅曼公仔雞連續(xù)肌注3次，第7天和第28天血清IL-12顯著低于對(duì)照組，IL-6在第7、14、21天顯著低于對(duì)照組。Fan等[37]用CTX對(duì)11日齡白羅曼公仔雞以80 mg/kg劑量連續(xù)3 d肌注，結(jié)果顯示：模型組血清IgG、IgM、IFN-γ、IL-6在第7、14、21和28天顯著低于對(duì)照組。給昆明種小鼠腹腔注射CTX 50 mg/kg，隔日1次，共3次，結(jié)果表明：模型組IL-2極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，IL-4顯著低于對(duì)照組(P<0.05)[26]。

CTX可抑制抗體分子生成。于肌肉注射方式連續(xù)3 d給3周齡雞注射4 mg/(kg·d) CTX，在28 d和35 d靜脈注射0.1 ml混合抗原(包含綿羊紅細(xì)胞 SRBC 5×108和熱滅活牛布魯氏菌 BA 1×109)，42 d和49 d SRBC抗體滴度顯著低于對(duì)照組，42 d BA抗體滴度顯著低于對(duì)照組(P<0.05)[38]。Han等[41]也證明CTX可降低實(shí)驗(yàn)組牛血清白蛋白抗體滴度。這可能是CTX降低脾臟抗體形成細(xì)胞的數(shù)量[43]。

3.4CTX對(duì)模型動(dòng)物抗病性能的影響CTX在一定程度上可增加動(dòng)物對(duì)疾病的易感性。Griffith等[47]試驗(yàn)表明以20 mg/kg CTX隔天肌肉注射可增加由豬霍亂沙門氏菌孔城道夫變種引起試驗(yàn)豬的死亡。3周齡SPF雞用CTX處理后再感染禽腺病毒血清型8(TR630和Saga97)呈現(xiàn)心包積液和死亡，而未用CTX處理組，既沒有抗體陽性也沒有組織病變[48]。4周齡SPF白來航雞連續(xù)3 d腹腔注射50 mg CTX，再用5×105cfu高毒株(TK 736系)大腸桿菌處理，死亡率為90%，未用CTX處理組死亡率為10%；用1×109cfu低毒株(64-28-Y1-A系)作用時(shí)，CTX處理組的死亡率為30%，未處理組為0%[40]。以上試驗(yàn)顯示：當(dāng)CTX與其他病原微生物同時(shí)進(jìn)入機(jī)體，可加劇微生物對(duì)機(jī)體的病理作用。

綜上，CTX對(duì)免疫性能產(chǎn)生較為廣泛而全面的影響，一定劑量的CTX可顯著抑制動(dòng)物的外周免疫器官如脾臟、法氏囊等，抑制動(dòng)物非特異性和特異性淋巴細(xì)胞，降低細(xì)胞因子和抗體產(chǎn)生；增加動(dòng)物對(duì)疾病的易感性；同時(shí)對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)有一定抑制作用。

4　小結(jié)

CTX在體內(nèi)代謝物磷酰胺氮芥、丙烯醛和去甲氮芥三種主要的活性產(chǎn)物，通過ATM/ATR-Chk1/Chk2和Cyclin D1/CDK4信號(hào)通路對(duì)細(xì)胞周期調(diào)節(jié)，使細(xì)胞周期停滯于S和G1期；通過Fas/Fas L和Bax/Bcl-2兩條途徑介導(dǎo)細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)凋亡不可逆發(fā)生；經(jīng)由Dectin-1、TLR2和TLR4信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)，改變體內(nèi)Th1/Th2平衡；并影響脂質(zhì)過氧化路徑關(guān)鍵酶如SOD、GSH調(diào)節(jié)細(xì)胞過氧化，引起細(xì)胞損傷。雖然對(duì)CTX免疫抑制的機(jī)制已有大量研究，但仍存在諸多問題，尤其是調(diào)節(jié)機(jī)制尚不完全清楚，如CTX如何啟動(dòng)死亡受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路Fas/Fas L的；CTX是否通過除TLR2和TLR4外的其他TLR樣受體調(diào)節(jié)細(xì)胞因子等；需要進(jìn)一步探究。除此，就CTX建立免疫抑制動(dòng)物模型時(shí)，其施藥劑量、施藥方式、作用時(shí)間等差異甚大，對(duì)動(dòng)物的免疫抑制程度及時(shí)效也不盡相同；為此，建議建立用CTX制備免疫抑制模型試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，為免疫調(diào)節(jié)劑的研究提供更為科學(xué)合理的免疫抑制靶動(dòng)物模型。

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[收稿2015-11-28修回2015-12-21]

(編輯許四平)

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.10.029

①本文受國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31572419)和衡陽市科技局項(xiàng)目(2011KN52)資助。

鐘金鳳(1980年-)，女，在讀博士，副教授，主要從事營養(yǎng)與免疫學(xué)的研究，同時(shí)就職于湖南環(huán)境生物職業(yè)技術(shù)學(xué)院，衡陽421005。

及指導(dǎo)教師：方熱軍(1963年-)，男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事生理學(xué)研究，E-mail：fangrj63@126.com。

R392.33

A

1000-484X(2016)10-1541-06