王　慶，鄭樹(shù)城，李瑩瑩，曾偉偉，王英英，任　彤，石存斌

（1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部漁藥創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省水產(chǎn)動(dòng)物免疫技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州　510380；2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上?！?01306；3.北京出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，北京　101113）

錦鯉皰疹病毒病的傳入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

王慶，鄭樹(shù)城1，2，李瑩瑩1，曾偉偉1，王英英1，任彤3，石存斌1

（1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部漁藥創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省水產(chǎn)動(dòng)物免疫技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510380；2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海201306；3.北京出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，北京101113）

錦鯉皰疹病毒?。↘HVD）自1997年首次報(bào)道以來(lái)，在全球多個(gè)國(guó)家傳播流行，給鯉魚(yú)及錦鯉養(yǎng)殖業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。我國(guó)是鯉魚(yú)養(yǎng)殖和貿(mào)易大國(guó)，KHVD嚴(yán)重威脅著我國(guó)鯉魚(yú)的健康養(yǎng)殖。本文分析了KHVD在全球的流行分布情況和不同地區(qū)的病原差異，并在此基礎(chǔ)上評(píng)估了病毒跨界傳播的風(fēng)險(xiǎn)，預(yù)測(cè)了KHVD的流行形勢(shì)，提出了相應(yīng)的防控建議，為我國(guó)KHVD防控措施的制定提供了參考。

錦鯉皰疹病毒；疫病預(yù)警；風(fēng)險(xiǎn)分析

錦鯉皰疹病毒（Koi herpe-svirus，KHV），又稱為鯉皰疹病毒3型（Cyprinid herpesvirus 3，CyHV-3）、魚(yú)間質(zhì)性腎炎及鰓壞死病毒（Carp interstitial nephritis and gill necrosis virus，CNGV），是鯉魚(yú)和錦鯉皰疹病毒?。↘HVD）的病原。KHVD于1997年在德國(guó)被首次報(bào)道，之后陸續(xù)在全球多個(gè)國(guó)家被發(fā)現(xiàn)，范圍覆蓋亞洲、歐洲、北美洲和非洲等地區(qū)。我國(guó)將該病列為二類動(dòng)物疫病，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須通報(bào)的疫病。我國(guó)大陸地區(qū)最早于2002年在進(jìn)口的錦鯉中檢測(cè)到CyHV-3，之后國(guó)內(nèi)多個(gè)地區(qū)均出現(xiàn)由CyHV-3感染引起的鯉魚(yú)和錦鯉暴發(fā)性死亡。KHVD給我國(guó)及世界多個(gè)國(guó)家的鯉魚(yú)及錦鯉養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

1　風(fēng)險(xiǎn)分析的范圍

本文主要分析KHV隨水生動(dòng)物進(jìn)入我國(guó)的可能性及其后果。其宿主在沒(méi)有新的資料前僅限定在水生動(dòng)物，內(nèi)容限定在疾病方面的影響（不考慮進(jìn)口品種對(duì)生態(tài)環(huán)境的影響問(wèn)題）。

2　病原及流行病學(xué)

2.1病原因子

KHV隸屬皰疹病毒目（Herpesvirales）異皰疹病毒科（Alloherpesviridae）鯉皰疹病毒屬（Cyprinivirus）。

目前，對(duì)KHV存在三種不同的基因分型方法。第一種，基于擴(kuò)增的Sph I-5片段、9/5片段，以及TK（Thymidine kinase）基因，將KHV分為A基因型（亞洲型）和E基因型（歐洲型），其中A基因型有2個(gè)變異體，分別為A1和A2；而E基因型存在7個(gè)變異體（E1～E7）。亞洲型主要分布于中國(guó)、日本、韓國(guó)及東南亞國(guó)家，歐洲型主要流行于歐洲和北美國(guó)家。第二種，根據(jù)兩個(gè)分子遺傳標(biāo)記，設(shè)計(jì)雙重PCR基因分型。研究發(fā)現(xiàn)KHV流行株中至少存在5種基因型，分別為 I--II-型（CyHV3-U和CyHV3-I）、I++II+型（CyHV3-J）、I-+II-型（CyHV3-GZ11）、I++II-型和I++II+△。第三種，利用可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列（Variable number of tandem repeats，VNTR）進(jìn)行基因多態(tài)性分型。研究發(fā)現(xiàn)即使是同一地區(qū)的分離株也顯示出較大的VNTR等位基因差異（如同一時(shí)間、同一地點(diǎn)采集的印度尼西亞樣本 I-08-4 和I-08-6，在8個(gè)VNTR中只有3個(gè)共同的等位基因），說(shuō)明KHV存在復(fù)雜的基因多樣性。實(shí)際上，每一種分型方法都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，基于TK全長(zhǎng)序列的分型再結(jié)合其他分型方法是一種較全面且有效的分型方法。關(guān)于KHV基因型的分類及時(shí)空分布，仍需更多分子流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)進(jìn)一步證實(shí)，而這也將為KHV起源和進(jìn)化研究提供重要依據(jù)。

2.2物理和化學(xué)性質(zhì)（環(huán)境影響因素）

KHV對(duì)乙醚、Triton X-100、紫外線和溫度很敏感，4.0×103μWs/cm2的紫外線，50 ℃ 以上加熱1 min，200 mg/L 的碘伏、60 mg/L潔爾滅溶液、30% 乙醇 20 min或3 mg/L的含氯溶液可使病毒完全失活。KHV毒力在-30 ℃或更低溫度下處于穩(wěn)定狀態(tài)。

2.3流行病學(xué)

2.3.1歷史、地理分布及現(xiàn)況。KHVD自1997年首次在德國(guó)暴發(fā)以來(lái)，在亞洲、歐洲、北美及非洲等地區(qū)的多個(gè)國(guó)家均有發(fā)生，幾乎每年都有國(guó)家暴發(fā)KHVD。據(jù)OIE 2012年的不完全統(tǒng)計(jì)，至少有28個(gè)國(guó)家暴發(fā)過(guò)該病，實(shí)際暴發(fā)疫情的國(guó)家數(shù)量可能更多。KHV病毒株基因型與地理分布存在密切聯(lián)系。亞洲地區(qū)的流行株主要是以CyHV3-J為代表的A型，而歐美地區(qū)的流行株主要是以CyHV3-U/I為代表的E型。但不同基因型病毒株在不同地區(qū)之間存在相互輸入的現(xiàn)象，亞洲和歐洲地區(qū)都相互分離到E型和A型病毒株。

2.3.2易感動(dòng)物。到目前為止，僅發(fā)現(xiàn)在鯉魚(yú)、錦鯉及其變種中暴發(fā)過(guò)KHVD。但研究發(fā)現(xiàn)其他魚(yú)類也有可能感染KHV，并可能作為病毒攜帶者傳播病毒（表1）。如金魚(yú)和異育銀鯽能否成為病毒宿主及傳播源還存在爭(zhēng)議。對(duì)浮游生物的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，病毒量與輪蟲(chóng)數(shù)目呈正相關(guān)，推測(cè)病毒有可能通過(guò)輪蟲(chóng)富集。

2.3.3傳播方式和傳染源。KHVD一般多發(fā)于春秋季節(jié)，高溫的夏季和低溫的冬季不發(fā)病，發(fā)病溫度為18～28 ℃，最適增殖溫度為15～25 ℃。低于10 ℃或大于30 ℃病毒不復(fù)制或病毒量很低，但可以潛伏在體內(nèi)。當(dāng)恢復(fù)至適宜溫度時(shí)，病魚(yú)可重新出現(xiàn)疾病的臨床癥狀，并導(dǎo)致感染魚(yú)死亡。KHV主要通過(guò)水、池塘沉積物、病魚(yú)糞便及魚(yú)體相互接觸傳播。

2.4臨床癥狀和潛伏期

病魚(yú)臨床癥狀包括：食欲不振，呼吸困難，游泳行為不規(guī)則；體色發(fā)黑，腹部腫大，腹腔和鰓出血，鰓發(fā)白并且顏色不規(guī)則；兩眼凹陷，皮膚出現(xiàn)白色斑點(diǎn)并有粗糙感和粘液分泌過(guò)多等現(xiàn)象。KHV主要潛伏位點(diǎn)是B淋巴細(xì)胞。另外，腦、腎臟、脾臟、肝臟、胰臟、鰓、心臟、腸道和眼睛等器官也可能是潛伏位點(diǎn)，但關(guān)于潛伏期還沒(méi)有明確的研究。

表1　可能成為KHV攜帶者的物種

2.5發(fā)病機(jī)理及病理變化

KHV可通過(guò)咽部牙周粘膜和皮膚入侵魚(yú)體，隨后病毒復(fù)制傳播至魚(yú)體其他部位并大量增殖，魚(yú)體之間可通過(guò)相互接觸而感染疾病。鰓、腎臟、脾臟等器官是病毒增殖的主要位點(diǎn)。

最主要的病變發(fā)生在鰓：鰓上皮細(xì)胞增生、壞死，鰓小瓣上的呼吸道上皮細(xì)胞腫脹或出現(xiàn)空泡化，并出現(xiàn)蒼白化、核碎裂以及核內(nèi)邊緣色素過(guò)多；鰓呼吸道上皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞、脾臟細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞以及少數(shù)腎臟造血細(xì)胞、肝細(xì)胞均可形成核內(nèi)包涵體。用病毒感染敏感細(xì)胞，均出現(xiàn)嚴(yán)重空泡化。

2.6診斷

現(xiàn)場(chǎng)診斷見(jiàn)臨床癥狀及病理變化。

病原檢測(cè)和鑒定方法：KHV的診斷方法包括細(xì)胞培養(yǎng)病毒分離、電鏡觀察、分子生物學(xué)方法、免疫學(xué)方法和原位雜交技術(shù)等。由于細(xì)胞培養(yǎng)、病毒分離困難且耗時(shí)，不容易成功，并非KHV診斷的首推方法。PCR及其延伸技術(shù)因其在檢測(cè)方面具有便捷、應(yīng)用性強(qiáng)等特點(diǎn)，成為OIE首先推薦的檢測(cè)方法。其他診斷技術(shù)雖有各自的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)，但在實(shí)際診斷中應(yīng)用不多，多作為輔助診斷手段。

國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)：OIE《 水生動(dòng)物疾病診斷手冊(cè)》2.3.6章推薦的病毒檢測(cè)方法主要是PCR。

國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)：《鯉皰疹病毒檢測(cè)方法》（SC/ T7212.1—2011）。

2.7危害

KHV能感染多種淡水魚(yú)類，并使鯉魚(yú)、錦鯉及其變種發(fā)病，病死率高達(dá)80%～100%。病毒可通過(guò)水、魚(yú)體相互接觸、糞便等進(jìn)行橫向傳播，傳播范圍覆蓋全球多個(gè)國(guó)家。同時(shí)，KHV可在鯉魚(yú)和錦鯉中潛伏感染，一旦條件惡化，就有疾病暴發(fā)的可能，對(duì)全球錦鯉和鯉魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展產(chǎn)生嚴(yán)重危害和威脅。

2.8防治

目前該病沒(méi)有可行的治療方法。

疫苗：自從KHVD暴發(fā)以來(lái)，多個(gè)國(guó)家的研究人員開(kāi)始尋求有效的疫苗來(lái)預(yù)防該病。2003年以色列率先研發(fā)出KHV減毒活疫苗并實(shí)現(xiàn)商品化，但疫苗使用效果存在爭(zhēng)議。因?yàn)镵HV存在潛伏感染的特性，免疫后攜帶者是否會(huì)將病毒傳播給其他接觸者，不得而知，因此疫苗目前仍沒(méi)有得到廣泛應(yīng)用。目前研究的疫苗包括減毒活疫苗、DNA疫苗和基因缺失減毒疫苗。隨著科技的進(jìn)步，通過(guò)基因工程手段獲得的某些重要毒力基因缺失的減毒重組病毒疫苗可能會(huì)克服傳統(tǒng)疫苗的缺點(diǎn)，在未來(lái)具有一定的開(kāi)發(fā)前景。

抗病育種：家養(yǎng)鯉魚(yú)品種Nasˇice（N）、Dor-70（D）分別與野生型鯉魚(yú)品種 Sassan（S）進(jìn)行雜交。D×S雜交品種的抗性最強(qiáng)（存活率為60.7%），N×N雜交品種的敏感性最弱（存活率為8.0%）?？共∑贩N仍需要進(jìn)行更多的選育工作。

水環(huán)境監(jiān)控：有研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用陽(yáng)離子鍍膜過(guò)濾器能有效濃縮水中的KHV，在沒(méi)有暴發(fā)病史的河流中可檢測(cè)到KHV DNA，而KHV很可能在外界條件的誘導(dǎo)下使魚(yú)發(fā)生急性感染；定期對(duì)鯉魚(yú)或錦鯉養(yǎng)殖場(chǎng)周邊的河流、湖泊進(jìn)行水環(huán)境監(jiān)控，提前預(yù)知并做好有效防護(hù)，可避免因疾病暴發(fā)帶來(lái)的損失。

3　風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

3.1風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別

流行病的發(fā)生涉及傳染源、傳播途徑和傳播對(duì)象三個(gè)環(huán)節(jié)。本文評(píng)估的風(fēng)險(xiǎn)因子為KHV，需確定一切可能攜帶KHV進(jìn)入我國(guó)的各種因素，并逐一評(píng)估這些因素的風(fēng)險(xiǎn)大小（傳入評(píng)估），在此基礎(chǔ)上提出防范措施。

根據(jù)對(duì)病原生物學(xué)特性和流行病學(xué)的分析，推測(cè)可能導(dǎo)致KHV進(jìn)入我國(guó)的因素包括：鯉魚(yú)和錦鯉等敏感動(dòng)物，類型包括活的、冰鮮的、冷凍的；金魚(yú)等非敏感攜帶者，類型包括活的、冰鮮的、冷凍的；污染的水、包裝物、運(yùn)載工具、操作工具和接觸的人員等。其中，錦鯉是最重要的風(fēng)險(xiǎn)因素。

3.2傳入評(píng)估

KHV目前公認(rèn)的敏感宿主是鯉魚(yú)和錦鯉，其攜帶者包括金魚(yú)在內(nèi)的多種淡水魚(yú)類。現(xiàn)已證實(shí)KHV可在急性感染過(guò)后潛伏在宿主體內(nèi)。急性感染階段，魚(yú)體各器官組織均存在病毒顆粒，其中鰓、腎臟、脾臟等器官是病毒增殖的主要位點(diǎn)。潛伏感染階段，B淋巴細(xì)胞是主要潛伏位點(diǎn)，腦、腎臟、脾臟、肝臟、胰臟、鰓、心臟、腸道和眼睛等也可為潛伏位點(diǎn)。KHV主要通過(guò)水、池塘沉積物、病魚(yú)糞便及魚(yú)體相互接觸傳播。外觀無(wú)臨床癥狀的鯉魚(yú)和錦鯉可能處于KHV潛伏感染階段，用普通的PCR方法容易造成假陰性結(jié)果。

鯉魚(yú)是我國(guó)的主養(yǎng)品種。為了追求完美體色和體型，國(guó)內(nèi)很大一部分錦鯉來(lái)自于日本以及東南亞一些國(guó)家。而日本和東南亞國(guó)家曾多次暴發(fā)KHVD而通過(guò)進(jìn)口KHV疫區(qū)的錦鯉，將KHV帶入我國(guó)的風(fēng)險(xiǎn)極高。

3.3后果評(píng)估

KHVD自然暴發(fā)于鯉魚(yú)和錦鯉，其他淡水魚(yú)也可感染。全球已有KHVD報(bào)道的國(guó)家至少達(dá)28個(gè)，涉及亞洲、北美和南非等地區(qū)。KHV宿主范圍廣，且潛伏感染的宿主在外界條件的誘導(dǎo)下可發(fā)生急性感染，目前還沒(méi)有有效的預(yù)防方法，對(duì)鯉魚(yú)和錦鯉養(yǎng)殖威脅較大。KHVD一旦暴發(fā)，對(duì)敏感魚(yú)類可造成80%～100%的死亡率，損失巨大。

3.4風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)

KHV敏感動(dòng)物錦鯉作為一種全球性的名貴觀賞魚(yú)品種，頻繁的貿(mào)易往來(lái)無(wú)疑給KHV更大范圍的傳播提供了有利條件，因此KHV進(jìn)入我國(guó)的風(fēng)險(xiǎn)非常高。由于鯉魚(yú)是我國(guó)的主養(yǎng)品種，KHV一旦進(jìn)入會(huì)迅速擴(kuò)散，在廣大地區(qū)造成疾病流行，嚴(yán)重威脅我國(guó)淡水魚(yú)的健康養(yǎng)殖。因此綜合評(píng)估錦鯉進(jìn)口屬于高風(fēng)險(xiǎn)因素，必須加以嚴(yán)格控制。

4　風(fēng)險(xiǎn)管理

2006年，KHVD 被正式列入OIE 《水生動(dòng)物疾病名錄》。我國(guó)農(nóng)業(yè)部于2008年底發(fā)布新版《一、二、三類動(dòng)物疫病病種名錄》，將其列為二類動(dòng)物疫病。由于KHV在細(xì)胞中增殖困難，目前OIE在診斷手冊(cè)中仍然推薦用PCR方法進(jìn)行KHV檢測(cè)。值得一提的是，目前OIE診斷手冊(cè)中推薦的檢測(cè)方法存在一定的漏檢可能，對(duì)潛伏感染魚(yú)的檢測(cè)靈敏度不夠。由于鯉魚(yú)和錦鯉的輸入具有高的KHV傳入風(fēng)險(xiǎn)，因此對(duì)于KHVD的風(fēng)險(xiǎn)管理，建議不要從疫區(qū)進(jìn)口；在流行季節(jié)對(duì)出口錦鯉的養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行不短于2年的連續(xù)監(jiān)測(cè)，特別是要求出口國(guó)重點(diǎn)檢測(cè)“自然死亡”和瀕死的動(dòng)物；對(duì)出口國(guó)要求進(jìn)行流行病學(xué)監(jiān)測(cè)，并在進(jìn)口后對(duì)其進(jìn)行嚴(yán)格隔離檢疫；在隔離期要注意對(duì)養(yǎng)殖區(qū)域進(jìn)行隔離和消毒。

5　結(jié)論

錦鯉是觀賞漁產(chǎn)業(yè)的重要品種。鑒于該病對(duì)鯉魚(yú)和錦鯉的巨大危害性，必須采取有效的管理措施，防止該病的傳入和傳播。

錦鯉是一種價(jià)值不菲的觀賞魚(yú)，在世界很多國(guó)家深受歡迎。錦鯉的展覽銷售和國(guó)際貿(mào)易可以使KHV通過(guò)種魚(yú)的跨境運(yùn)輸傳入。我國(guó)每年從境外進(jìn)口大量錦鯉的種魚(yú)，病原體通過(guò)這些種魚(yú)傳入的風(fēng)險(xiǎn)極高。因此，在引進(jìn)相關(guān)種魚(yú)時(shí)，必須要保證其有齊全的原產(chǎn)地證、健康證書等證明文件。

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（責(zé)任編輯：朱迪國(guó)）

Risk Assessment on the Introduction of Koi Herpes Virus Disease

Wang Qing1，Zheng Shucheng1，2，Li Yingying1，Zeng Weiwei1，Wang Yingying1，Ren Tong3，Shi Cunbin1
（1. Pearl River Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Key Laboratory of Fishery Drug Development of Ministry of Agriculture，Key Laboratory of Aquatic Animal Immune Technology of Guangdong Province，Guangzhou，Guangdong 510380；2. College of Fisheries and Life Science，Shanghai Ocean University，Shanghai 201306；3. Beijing Entry-exit Inspection and Quarantine Burean，Beijing 101113）

Koi herpes virus disease（KHVD）had rapidly spread throughout many countries of the world since it was fi rst reported in 1997，which led to enormous fi nancial loss in common carp and koi carp breeding industry. Carp cultivation and trade hold an important status in aquaculture industry in China，and KHVD presents a serious danger to healthy breeding of carp. The distribution and pathogen differences in different areas of KHVD were analyzed in this article. Based on the analysis，the transmission risk of KHV across borders was assessed，and the epidemic situation of KHVD was also predicted. In the end，related prevention and control measures were put forward in order to provide reference for the control of KHVD in China.

Koi herpes virus；early warning on disease；risk analysis

S852.65

B

1005-944X（2016）10-0042-05

10.3969/j.issn.1005-944X.2016.10.011

國(guó)家科技支撐計(jì)劃（2013BAD12B02）；廣東省海洋漁業(yè)科技與產(chǎn)業(yè)發(fā)展專項(xiàng)（A201501B13）；現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（CARS-46）；國(guó)家質(zhì)檢總局科技計(jì)劃（2016IK014）

石存斌