吳秀萍，孫召金，翟鋮鋮劉曉雷，唐　斌，劉明遠

（1. 中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所，衛(wèi)生部寄生蟲與病原生物學重點實驗室，世界衛(wèi)生組織瘧疾、血吸蟲和絲蟲病合作中心，上海　200025；2. 吉林大學人獸共患病研究所，人獸共患病教 育部重點實驗室，吉林長春　130062）

旋毛蟲不同發(fā)育時期排泄分泌物抗原在免疫學診斷中的應用研究

吳秀萍1，2，孫召金1，2，翟鋮鋮1，劉曉雷2，唐斌2，劉明遠2

（1. 中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所，衛(wèi)生部寄生蟲與病原生物學重點實驗室，世界衛(wèi)生組織瘧疾、血吸蟲和絲蟲病合作中心，上海200025；2. 吉林大學人獸共患病研究所，人獸共患病教 育部重點實驗室，吉林長春130062）

［目的］系統(tǒng)了解并比較旋毛蟲不同發(fā)育時期排泄分泌物（ES）抗原的免疫學特性，探索可用于臨床檢測出欄豬旋毛蟲感染的血清學診斷技術(shù)。［方法］ 分別以旋毛蟲腸道期10 h肌幼蟲（10 h ML）、腸道期30 h成蟲（30 h Ad）、3 d 成蟲（Ad3）、6 d 成蟲與新生幼蟲混合（Ad6+NBL）以及肌幼蟲（ML）五個不同發(fā)育時期的ES作為包被抗原，應用ELISA方法，檢測感染不同劑量、不同天數(shù)的豬血清中的抗旋毛蟲抗體IgM和IgG水平，繪制抗體消長規(guī)律曲線并進行數(shù)據(jù)分析。［結(jié)果］10 h ML ES和ML ES作為包被抗原適合檢測不同感染劑量、感染35 d之前的豬抗旋毛蟲IgM抗體，低劑量感染10 d左右可以檢出，高劑量感染5 d也可以檢出；Ad3 ES作為包被抗原對高劑量感染35 d之前的豬抗旋毛蟲IgM抗體檢測敏感；Ad3和ML的ES作為包被抗原可檢測不同劑量、感染35 d之后的豬抗旋毛蟲IgG抗體，其中Ad3 ES抗原檢測低劑量感染的效果優(yōu)于ML ES抗原。［結(jié)論］ 腸道期肌幼蟲、成蟲和肌幼蟲的ES抗原可用于檢測旋毛蟲的早期感染，成蟲和肌幼蟲的ES抗原可用于檢測出欄豬的旋毛蟲感染。本研究為進一步合理有效利用旋毛蟲不同發(fā)育時期的ES抗原，建立更有效的檢測屠宰動物旋毛蟲感染的方法提供了重要理論基礎和參考。

旋毛蟲；排泄分泌物；豬血清；酶聯(lián)免疫吸附試驗

旋毛蟲屬線蟲，是除南極洲外在世界廣泛均有分布的人獸共患寄生蟲［1］，目前為止，至少被55個國家記錄或報道［2-3］。人通過生食或半生食感染旋毛蟲幼蟲的豬肉、馬肉、狗肉和野生動物肉（如野豬、熊、獾和海象）及肉類制品而被感染［3］。近年來，家養(yǎng)豬被認定為旋毛蟲（T.spiralis）的主要宿主，豬肉被認定為人類旋毛蟲病的主要感染源［4］。

旋毛蟲的檢測方法主要包括：鏡檢法、集樣消化法和血清學檢測。集樣消化法是目前旋毛蟲檢驗的金標準；血清學方法如ELISA，是目前檢測旋毛蟲最為敏感的方法。目前所采用的抗原主要來自旋毛蟲肌幼蟲的ES抗原。而ES抗原存在特異性及診斷盲區(qū)等弊端，使得ELISA檢測無法納入旋毛蟲國際檢測法規(guī)［5-7］。Boireau［8］、Kapel［9］等人證明旋毛蟲ML、Ad和NBL抗原可被實驗感染旋毛蟲的豬抗體所識別，并研究了其作為抗原檢測感染血清中IgG抗體消長情況。

本研究以中國長白豬為實驗動物，利用實驗室保存?zhèn)鞔闹袊幽县i旋毛蟲分離株T1 （ISS534）感染長白豬，采用旋毛蟲五個不同發(fā)育時期：腸道10 h肌幼蟲期、腸道30 h成蟲期、成蟲期（Ad）、新生幼蟲期和肌幼蟲期（ML）分泌的不同抗原（ES）作為診斷抗原，采用ELISA檢測實驗豬感染旋毛蟲2個月內(nèi)不同天數(shù)的血清抗旋毛蟲IgM和IgG抗體水平，分析了旋毛蟲刺激宿主機體產(chǎn)生抗旋毛蟲抗體的消長變化規(guī)律，為進一步合理利用旋毛蟲不同發(fā)育時期的排泄分泌物抗原，建立快速、有效的檢測屠宰動物旋毛蟲感染的免疫學診斷方法提供重要的理論基礎和科學依據(jù)。

1　材料

1.1實驗動物

傳代小鼠：實驗室保存?zhèn)鞔袊幽县i旋毛蟲分離株的昆明小鼠；長白豬：3月齡，每頭50 kg左右，共12頭，購自吉林省惠昌畜牧科技有限公司；大鼠：6～8周齡的雄性Wistar大鼠，每只250 g，共80只，購自白求恩醫(yī)學院。

1.2旋毛蟲蟲株

中國河南豬旋毛蟲分離株T1（ISS534），由實驗室保存?zhèn)鞔?/p>

1.3主要試劑和儀器

胃蛋白酶（1∶1 000和1∶3 000）購自 AMRESCO公司；燒杯、80目篩子、移液器、顯色液TMB均購自北京天根生化科技有限公司；山羊抗小鼠 IgM或IgG二抗購自武漢博士德生物工程有限公司；酶標儀購自TECAN公司；ELISA板購自Corning公司；灌胃針、醫(yī)用低溫冰箱、電熱恒溫培養(yǎng)箱、恒溫磁力攪拌器和顯微鏡等均購自上海醫(yī)療器械股份有限公司。

2　方法

2.1感染性實驗

根據(jù)實驗攻蟲數(shù)量所需，取實驗室保種傳代的昆明小鼠或wistar大鼠，剖殺，通過消化法收集中國河南豬旋毛蟲分離株T1（ISS534）肌幼蟲。用絞肉機絞碎豬肉，混合面粉做成肉球，將蟲體按不同實驗劑量分別包裹在肉球中，投喂給12頭實驗豬。根據(jù)Boireau［8］、Kapel［9］等人的相關(guān)實驗數(shù)據(jù)，本實驗所需感染劑量如下：50條蟲體（＜1l pg）、375條蟲體（≈1l pg）、150條蟲體（＞1l pg）和1 000條蟲體（陽性對照），各感染3頭長白豬，接種后每天觀察其狀況。

2.2感染豬血清的收集

將感染豬前腔靜脈采血，分離血清放于-80℃冰箱保存。采血時間點分為感染前和感染后（5 dpi、8 dpi、11 dpi、14 dpi、17 dpi、21 dpi、26 dpi、35 dpi、45 dpi、60 dpi）。

2.3腸道期肌幼蟲、腸道期成蟲、成蟲、新生幼蟲和肌幼蟲的培養(yǎng)與排泄分泌物收集

10 h腸道期肌幼蟲（10 h ML）即對Wistar大鼠灌胃感染10 h后，剖殺、收集的肌幼蟲，用于培養(yǎng)收集10 h ML的ES抗原；30 h腸道期成蟲（30 h Ad）即為對Wistar大鼠灌胃感染30 h后，剖殺、收集的腸道期成蟲，用于培養(yǎng)收集腸道30 h Ad的ES抗原；3 d 成蟲（Ad3）即為感染后 3 d大鼠腸道內(nèi)的成蟲，用于培養(yǎng)收集Ad3的排泄分泌物ES抗原；6 d成蟲（Ad6）即為感染后6 d大鼠腸道內(nèi)的成蟲，用于培養(yǎng)收集Ad6及新生幼蟲（NBL）的混合排泄分泌物ES抗原；肌幼蟲（ML），用于培養(yǎng)收集肌幼蟲的排泄分泌物ES抗原。具體收集方法為：

剖殺實驗室傳代保種T1（ISS534）的Wistar大鼠1只，用自來水將其胴體沖洗干凈后以絞肉機絞碎，放入含1%胃蛋白酶和1%鹽酸的消化液中，37 ℃消化2 h；除去未消化的組織，將濾液倒入分液漏斗中，室溫沉降2 h，收集肌幼蟲。

將收集到的肌幼蟲計數(shù)，一部分經(jīng)口灌胃感染20只Wistar大鼠（約10 000條/只），剩余肌幼蟲（ML）用加有雙抗的無菌生理鹽水反復清洗干凈。將ML蟲體分兩個培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，約5 000條/mL，每瓶加入約10 mL含雙抗的1640培養(yǎng)液，置于37 ℃ 5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h，收集的培養(yǎng)液即為所要收集的ML的ES抗原，-80 ℃保存。對灌胃的20只Wistar大鼠在第10 小時撲殺，取小腸段，收集10 h腸道期旋毛蟲肌幼蟲，經(jīng)1640培養(yǎng)液培養(yǎng)12 h，收集10 h腸道期肌幼蟲的ES抗原，-80 ℃保存。30 h Ad、Ad3、Ad6+NBL的ES抗原收集方法同上。

超濾收集10 h、30 h、Ad3、Ad6+NEL和ML的ES抗原蛋白：將凍存于-80 ℃的10 h、30 h、Ad3、Ad6+NEL和ML的ES抗原在冰水混合物中融化，過濾后轉(zhuǎn)移至超濾管中，用PBS反復洗滌超濾蛋白，至1640培養(yǎng)液顏色變?yōu)闊o色為止。然后分裝至1.5 mL EP管中，測其蛋白濃度，標記后凍存于-80 ℃中備用。

2.4酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清中抗旋毛蟲抗體

通過間接ELISA方法檢測感染豬血清中特異性抗旋毛蟲IgM和IgG抗體［10-11］。將10 h、30 h、Ad3、Ad6+NBL和ML的ES抗原稀釋至10 μg/mL，以100 μL/孔包被酶標板，置 37 ℃溫箱2 h后，移至4 ℃冰箱過夜。用洗液（PBS-T）洗滌板3次后，用封閉液封閉，200 μL/孔。將待檢感染豬血清1∶50稀釋后，加入到酶標板中，100 μL/孔，置37 ℃溫箱孵育1 h。每個樣本重復3次，以感染前相對應的血清作為陰性對照。以辣根過氧化物酶標記的山羊抗豬IgM或IgG作為二抗進行孵育。以TMB底物溶液為顯色液，100 μL/孔。最后加入2 mol/L H2SO4100 μL/孔，終止顯色。用ELISA自動酶標儀檢測450 nm波長處吸光度值。待測樣本P值≥陰性對照O值的2.1倍時確認為陽性。

2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法與分析

采用SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析，采用多個獨立樣本非參數(shù)檢驗。檢驗水準為a=0.05。采用Excel軟件繪制不同包被抗原條件下感染豬血清IgM和IgG抗體消長規(guī)律曲線。

3　結(jié)果

3.1不同劑量感染豬血清中IgM抗體水平

分別利用旋毛蟲5個發(fā)育時期的ES抗原，即10 h ML、30 h Ad、Ad3、Ad6+NBL和ML的ES抗原，檢測旋毛蟲4個不同感染劑量感染長白豬60 d內(nèi)血清中IgM的變化情況。

3.1.110 h ES抗原檢測結(jié)果。感染早期，抗體均呈“波峰波谷”態(tài)勢變化。感染50條肌幼蟲的豬血清，在感染后第14天、第17天和第26天，血清IgM抗體檢測陽性，但在第14天和26天處于高峰，隨后呈明顯呈下降趨勢，第35天后檢測變?yōu)殛幮?，?1天處于陰性“波谷”。感染75條肌幼蟲的豬血清，在感染后第8天、14天血清IgM抗體檢測陽性，第17天后均為陰性，第45天處于陰性“波谷”。感染150條肌幼蟲的豬血清，在感染后的前26 d均能檢測出IgM抗體陽性，在第11天出現(xiàn)高峰，第14～21天出現(xiàn)陽性“波谷”，后呈下降趨勢，第26天至第60天均為陰性。感染1 000條肌幼蟲的豬血清，在感染后8～14 d內(nèi)維持IgM抗體陽性水平，之后開始下降，至第17天出現(xiàn)陰性“波谷”，隨后開始上升，至第21天檢測為陽性，之后一直維持較高水平。具體變化曲線見圖1。

圖1　應用10 h ES抗原檢測豬血清抗旋毛蟲IgM抗體

3.1.230 h ES抗原檢測結(jié)果。感染50條肌幼蟲的豬血清，檢測結(jié)果全部呈陰性。感染75條肌幼蟲的豬血清，在感染后第35天出現(xiàn)陽性“波峰”，第45天處于陰性“波谷”，之后開始上升，至第60天時，IgM陽性抗體處于較高水平。感染150條肌幼蟲的豬血清，在感染45 d后，血清IgM抗體檢測呈陽性，之前均為陰性。感染1 000條肌幼蟲的豬血清，在感染后第11天檢出陽性，在第17天出現(xiàn)陰性“波谷”，然后又開始上升，至第21天檢測為陽性，之后維持在較高IgM抗體水平，至第45天出現(xiàn)陽性高峰。具體變化曲線見圖2。

圖2　應用30 h ES抗原檢測豬血清抗旋毛蟲IgM抗體

3.1.3Ad3 ES抗原檢測結(jié)果。感染50條肌幼蟲的豬血清，檢測結(jié)果均為陰性。感染75條肌幼蟲的豬血清，在感染后第8天、第14天和第21～26天，血清IgM抗體呈弱陽性，其余均為陰性。感染150條肌幼蟲的豬血清，在感染后第5～8天，血清IgM抗體呈陽性，第11～14天血清IgM抗體水平處于陽性臨界值邊緣，第17天處于陰性“波谷”，第35天時呈弱陽性，第45天出現(xiàn)陰性“波谷”，在第60天又重新檢測到較高水平的IgM抗體。感染1 000條肌幼蟲的豬血清，感染后5～11 d即可檢測到IgM抗體，且第5天處于高峰，之后下降，第14～17天為陰性，第21天出現(xiàn)陽性“波峰”，隨后在第26天出現(xiàn)陰性“波谷”，其余時間均為弱陽性或陽性，且在第35天后血清IgM抗體水平呈上升趨勢。具體變化曲線見圖3。

3.1.4Ad6+NBL ES抗原檢測結(jié)果。感染50條肌幼蟲的豬血清，僅在感染后第45天血清IgM抗體水平略高于臨界值。感染75條肌幼蟲的豬血清，在感染后第8～14天血清IgM抗體呈弱陽性，第21天出現(xiàn)陰性“波谷”，第35天又處于陽性“波峰”，第45天又出現(xiàn)陰性“波谷”，隨后呈上升趨勢，直至第60天達到較高陽性水平。感染150條肌幼蟲的豬血清，在感染后第14天血清IgM抗體呈弱陽性，第17天處于陰性“波谷”，第35天檢測到陽性，第45天出現(xiàn)陽性高峰，之后下降，但在第60天血清中的IgM抗體仍為陽性。感染1 000條肌幼蟲的豬血清，在感染后第8～11天和第21天血清IgM抗體呈弱陽性，第14天血清IgM抗體接近陽性臨界值，第26天出現(xiàn)陰性“波谷”，第35天接近陽性臨界值，第45～60天呈陽性且處于較高水平。具體變化曲線見圖4。

圖3　應用Ad3 ES抗原檢測豬血清抗旋毛蟲IgM抗體

圖4　應用Ad6+NBL ES抗原檢測豬血清抗旋毛蟲IgM抗體

3.1.5ML ES抗原檢測結(jié)果。感染50條肌幼蟲的豬血清，僅在感染后第14天和第26天檢測到血清IgM抗體呈弱陽性，其余均為陰性。感染75條肌幼蟲的豬血清，在感染后第5～8天檢測出血清IgM抗體陽性，第14天呈弱陽性，第35天血清IgM水平接近陽性臨界值，第45天處于陰性“波谷”，之后開始上升，第60天檢測到較高水平的抗體陽性。感染150條肌幼蟲的豬血清，在感染后第14天血清IgM抗體接近陽性臨界值，然后開始下降，第17天出現(xiàn)陰性“波谷”，第21天接近陽性臨界值，第26～45天血清IgM抗體呈陽性，推測在第40天左右出現(xiàn)陽性高峰，之后下降，第60天趨于陽性臨界值。感染1 000條肌幼蟲的豬血清，在感染后第5天、第21天和第35出現(xiàn)抗體陽性高峰，35天之后維持在原有的陽性水平，第8天、第17天和第26出現(xiàn)陰性“波谷”，第11～14天血清IgM抗體呈弱陽性或僅接近陽性臨界值。具體變化曲線見圖5。

圖5　應用ML ES抗原檢測豬血清抗旋毛蟲IgM抗體

3.2旋毛蟲不同劑量感染豬血清中IgG抗體水平分別利用Ad3、Ad6+NBL和ML的ES抗原檢測豬感染不同劑量旋毛蟲至60天血清中IgG的變化情況。

3.2.1Ad3 ES抗原檢測結(jié)果。感染50條肌幼蟲的豬血清，在感染后第35天血清IgG抗體水平呈陽性，但高峰推測出現(xiàn)在第42天左右，之后下降，但至第60天仍為陽性。感染75條肌幼蟲的豬血清，在感染后第35天血清IgG水平接近陽性臨界值，第45～60天血清IgG抗體呈陽性，且持續(xù)上升。感染150條肌幼蟲的豬血清，在感染后第8天和第14天血清IgG抗體接近陽性臨界值，第35-60天血清IgG抗體呈陽性，且保持在較高水平。感染1 000條肌幼蟲的豬血清，在感染后第26天IgG抗體呈弱陽性，然后緩慢上升，至第60天達到較高的IgG抗體水平。具體變化曲線見圖6。

3.2.2Ad6+NBL ES抗原檢測結(jié)果。感染50條和75條肌幼蟲的豬血清，檢測結(jié)果全部為陰性。感染150條肌幼蟲的豬血清，在感染后第45天IgG抗體開始出現(xiàn)陽性，并持續(xù)上升，至第60天仍保持在較高的陽性水平。感染1 000條肌幼蟲的豬血清，在感染后第35天IgG抗體略高于陽性臨界值，然后持續(xù)上升，至第60天仍保持在較高的陽性水平。具體變化曲線見圖7。

圖6　應用Ad3 ES抗原檢測豬血清抗旋毛蟲IgG抗體

圖7　應用Ad6+NBL ES抗原檢測豬血清抗旋毛蟲IgG抗體

3.2.3ML ES抗原檢測結(jié)果。感染50條肌幼蟲的豬血清，全部為陰性。感染75條肌幼蟲的豬血清，在感染后第35天開始檢測出IgG抗體陽性，后一直持續(xù)到第60天，且呈上升趨勢。感染150條肌幼蟲的豬血清，在感染后第45天開始出現(xiàn)IgG抗體陽性，并緩慢上升，至第60天仍保持在較高陽性水平。感染1 000條肌幼蟲的豬血清，在感染后第35天出現(xiàn)IgG抗體陽性，至第60天仍保持在較高陽性水平，但呈緩慢下降趨勢。具體變化曲線見圖8。

圖8　應用ML ES抗原檢測豬血清抗旋毛蟲IgG抗體

4 討論

我國是世界上受旋毛蟲病危害最為嚴重的少數(shù)幾個國家之一。旋毛蟲病被列為重要的食源性人獸共患寄生蟲病，而且也是進出口肉類、屠宰動物以及我國政府提出的“放心肉”首檢和必檢的食源性人獸共患病［11-12］。

在單宿主物種中，對于旋毛蟲的生活周期而言，主要有ML、Ad、NBL三個抗原階段［13］。它們表達多種免疫原性蛋白，這些蛋白可引起宿主的保護性反應，并且可用于診斷人和動物感染旋毛蟲的診斷。目前研究顯示使用SDS-PAGE和免疫印跡法［14-15］，已確定旋毛蟲ML、Ad和NBL抗原可被實驗感染旋毛蟲的豬的抗體所識別。

在本實驗結(jié)束后，對所有感染豬進行剖殺，對每頭豬胴體的18個不同部位分別取樣（50g）鏡檢及用消化法檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同部位均存在不同數(shù)量的感染蟲體，且豬只之間無顯著個體差異。此結(jié)果表明本研究中的感染實驗動物方法與感染劑量準確，實驗結(jié)果可信。

本研究結(jié)果表明：對于低劑量感染（50條）的豬，可應用10 h ES檢測感染后第14天和第26天的血清IgM抗體；對于感染75～150條旋毛蟲體的豬，應用10 h、30 h和ML ES抗原的混合物進行檢測效果較好（可檢測出感染后第5～26天的血清IgM抗體）；對于感染1 000條旋毛蟲體的豬，早期10 h ES抗原除在感染后第5天和第17天外，其余時間均可檢測出血清IgM陽性抗體。此研究為解決旋毛蟲診斷盲區(qū)（感染后第14～19天）提供了重要的參考。而對于IgG檢測，應用Ad3 ES抗原檢測的效果相對較好。應用ML ES抗原檢測血清IgM或IgG抗體水平，其吸光度值均非常高。

因此可利用旋毛蟲不同發(fā)育時期的分泌物抗原混合物（至少3種ES：10 h、Ad3、ML）來檢測旋毛蟲感染。對于臨床出欄豬的早期檢測與診斷，應用10 h ES，以檢測血清IgM抗體為主，輔之檢測血清IgG抗體（IgG抗體持續(xù)時間長，且較穩(wěn)定），效果較好。感染旋毛蟲35天前，可混合應用腸道期10 h的肌幼蟲、成蟲和肌幼蟲的ES抗原（即10 h ES+Ad3 ES+ML ES）來檢測血清中的IgM抗體，包括診斷盲區(qū)（感染后第15～30天）的檢測；感染旋毛蟲35天后，混合應用成蟲和肌幼蟲的ES抗原（即Ad3 ES+ML ES）來檢測血清中IgG抗體。由于單一時期的抗原敏感性不足，無法有效應用于旋毛蟲的血清學檢測，因此結(jié)合旋毛蟲的生活史及其在宿主體內(nèi)排泄分泌物的變化情況，需要聯(lián)合應用至少2種以上抗原來提高檢測敏感性，而不同種抗原如何配比檢測旋毛蟲的感染仍有待于進一步探索和研究。

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（責任編輯：朱迪國）

Application Research for Trichinella spiralis Excretory-secretory Antigens from Different Growth Stages in Immunologic Diagnosis

Wu Xiuping1，2，Sun Zhaojin1，2，Zhai Chengcheng1，Liu Xiaolei2，Tang Bin2，Liu Mingyuan2
（1. National Institute of Parasitic Diseases，Chinese Center for Disease Control and Prevention，Laboratory of Parasite and Vector Biology，Ministry of Health，WHO Collaborating Center for Malaria，Schistosomiasis and Filariasis，Shanghai 200025；2. Institute of Zoonoses，Key Laboratory of Zoonoses of Ministry of Education，Jinlin University，Changchun，Jilin 130062）

［Objective］To systematically understand and compare the immunological characters of the Trichinella spiralis excretory-secretory（ES）antigens from different growth stages，so as to explore the serological diagnosis techniques which could be applied to slaughter pigs infected with Trichinella spiralis. ［Methods］ES antigens from 10-hour muscle larvae at intestinal stage（10 h ML），30-hour adult at intestinal stage（30 h Ad），3-day adult at adult stage（Ad3），6-day adult and newborn larvae stage（Ad6+NBL），and muscle larvae（ML）of T.spiralis were used as coating antigen，then the serum of infected pigs in different days within two months was collected and the IgM and IgG antibodies against Trichinella were detected by ELISA. At last，dynamical change curves of antibodies were drawn and data analysis was made. ［Results］ 10 h ML and ML ES antigens could be used to detect the anti-TrichinellaIgM antibodies from serum of pigs injected by different doses within 35 days after infection，low-dose infection can be detected in about 10 days and the high-dose infection in about 5 days，and Ad3 ES antigens could be applied to detect IgM antibodies when the infection dose was high；ES antigens from Ad3 and ML can be used to detect the anti-Trichinella IgG antibodies from serum of pigs injected by different doses over 35 days after infection，it's worth noting that detection effect by Ad3 ES was better than that of ML ES. ［Conclusion］The 10 h ML ES，Ad3 ES and ML ES can be used as coating antigens to detect early infection with Trichinella spiralis，Ad3 ES and ML ES antigens can be used to detect Trichinella spiralis infection in slaughter pigs. This study provided reference and theoretical basis for the suffi cient utilization of ES in different stages and for the establishment of a reasonable and effective method towards Trichinella spiralis detection.

Trichinella spiralis；excretory-secretory；pig serum；ELISA

1005-944X（2016）10-0079-07

10.3969/j.issn.1005-944X.2016.10.021

國家自然科學基金（NSFC31030064）

劉明遠