王素珍，李榮榮，岳雪，董惠鈞

（聊城大學(xué)藥學(xué)院，山東聊城252000）

不同溶出介質(zhì)中辛伐他汀的平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)測(cè)定

王素珍，李榮榮，岳雪，董惠鈞

（聊城大學(xué)藥學(xué)院，山東聊城252000）

目的測(cè)定辛伐他汀在11種不同溶出介質(zhì)中的平衡溶解度及在正辛醇-水/緩沖液體系中的表觀油水分配系數(shù)，為辛伐他汀新劑型的研究開發(fā)提供參考。方法采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定辛伐他汀在11種不同溶出介質(zhì)中的平衡溶解度；采用搖瓶法測(cè)定辛伐他汀的表觀油水分配系數(shù)。結(jié)果辛伐他汀在不同pH緩沖液中平衡溶解度無顯著性差異，表面活性劑十二烷基硫酸鈉（SDS）的加入可使辛伐他汀的平衡溶解度增大約70倍，達(dá)到130 mg/L。辛伐他汀在不同pH緩沖液中的表觀油水分配系數(shù)P約為2.5（lg P= 0.39），無顯著性差異。結(jié)論辛伐他汀水溶性差，屬生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)（BCS）Ⅱ類藥物，表面活性劑如SDS能顯著增加辛伐他汀在水中的溶解度。辛伐他汀的油水分配系數(shù)不受pH的影響。

辛伐他??；平衡溶解度；表觀油水分配系數(shù)；高效液相色譜法

辛伐他汀是土曲霉代謝物洛伐他汀的全合成產(chǎn)物，為前體藥物，口服后在體內(nèi)代謝成為活性酸——辛伐他汀酸而發(fā)揮作用［1］。其可競(jìng)爭(zhēng)性抑制肝細(xì)胞內(nèi)3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A（HMG-CoA）還原酶的活性，從而減少內(nèi)源性總膽固醇的生物合成總量，同劑量條件下療效優(yōu)于洛伐他汀、普伐他汀和氟伐他汀等HMG-CoA還原酶抑制劑，是治療高脂血癥、腦中風(fēng)等心腦血管疾病的首選藥物之一［2-3］。辛伐他汀除能有效降低血清膽固醇水平外，還能緩解冠狀動(dòng)脈彌漫性和局灶性病變的發(fā)展［4］，長(zhǎng)期服用能降低冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ê?jiǎn)稱冠心?。┑陌l(fā)病率和死亡率，為防治冠心病的一線藥物［5-6］。目前，辛伐他汀的主要?jiǎng)┬陀衅胀ㄆ?、分散片、膠囊、滴丸、干混懸劑、咀嚼片，由于其為難溶性藥物，在體內(nèi)溶解性差，從而導(dǎo)致其生物利用度低，體外溶出評(píng)價(jià)差異大。故研究辛伐他汀的溶解性質(zhì)，對(duì)于提高其口服生物利用度具有重要意義。本研究中考察了辛伐他汀在不同溶出介質(zhì)中的平衡溶解度，并測(cè)定了其表觀油水分配系數(shù)，旨在為改善辛伐他汀生物利用度、提高其藥效、開發(fā)研制新劑型和體內(nèi)外評(píng)價(jià)提供參考。現(xiàn)報(bào)道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器

S-3100型紫外分光光度計(jì)（韓國(guó)新科公司）；Waters高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）；FE20型pH計(jì)（上海梅特勒-托利多公司）；5424R型臺(tái)式高速離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司）；超純水儀（美國(guó)Millipore公司）；FBS224型電子分析天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）；DZF型真空干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；Vortex3000型渦旋振蕩器（德國(guó)Wiggens公司）；KQ5200V型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；HH系列數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市科析儀器有限公司）。

1.2試藥

辛伐他汀原料藥（浙江海正藥業(yè)有限公司，批號(hào)為B2140816）；辛伐他汀對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為100601-201003）；正辛醇、氫氧化鈉、鹽酸（分析純，萊陽(yáng)經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)精細(xì)化工廠）；生物級(jí)胃蛋白酶（南京奧多福尼生物科技有限公司）；乙腈為色譜純，十二烷基硫酸鈉為分析純，均購(gòu)自天津市大茂化學(xué)試劑廠；磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、冰醋酸、乙酸鈉（分析純，天津市福晨化學(xué)試劑廠）；磷酸（分析純，天津市科密歐試劑有限公司）。

2　方法與結(jié)果

2.1高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定及驗(yàn)證

2.1.1色譜條件

色譜柱：Agilent-EclipseXDB-Phenyl-C18柱（250mm× 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液（60∶40，用磷酸調(diào)節(jié)pH至4.0）；檢測(cè)波長(zhǎng)：238 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10 μL。

2.1.2溶液制備

分別精密稱取真空干燥至恒重的辛伐他汀對(duì)照品10 mg，置100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得辛伐他汀對(duì)照品貯備液。

2.1.3方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：分別將流動(dòng)相和辛伐他汀對(duì)照品溶液進(jìn)樣測(cè)定，其高效液相色譜圖見圖1?？梢?，溶劑峰無吸收，可與辛伐他汀主峰完全分開，在此色譜條件下溶劑不影響辛伐他汀的測(cè)定，表明該方法專屬性較強(qiáng)。

圖1　專屬性試驗(yàn)高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：取2.1.2項(xiàng)下對(duì)照品貯備液，采用稀釋法分別配制質(zhì)量濃度為25，50，75，100，150，200 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，分別取10 μL進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以辛伐他汀質(zhì)量濃度（ρ，mg/L）為橫坐標(biāo)、峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=27894 ρ+ 48.671（R2=0.999 9）。結(jié)果表明，辛伐他汀質(zhì)量濃度在25～200 mg/L范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，見圖2。

精密度試驗(yàn)：精密稱取辛伐他汀對(duì)照品，用甲醇配制成質(zhì)量濃度分別為50 mg/L和100 mg/L的辛伐他汀溶液，分別在1 d內(nèi)測(cè)定6次，得日內(nèi)RSD，分別為0.13%和1.61%，均低于2.00%，表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取同一批已知含量的樣品，配制高、中、低質(zhì)量濃度的樣品溶液各2份，分別取10 μL進(jìn)樣測(cè)定，再精密稱取對(duì)照品6份，每份5.0 mg，分別加入上述樣品溶液中，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。

圖2　辛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

表1　辛伐他汀加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=2）

2.1.4最低定量限及檢測(cè)限確定

配制10 mg/L的辛伐他汀對(duì)照品溶液，測(cè)定峰高，繼續(xù)稀釋，使辛伐他汀峰高為噪音的10倍時(shí)，該濃度為最低定量限，經(jīng)測(cè)定，最低定量限為0.5 mg/L。繼續(xù)稀釋使辛伐他汀峰高為噪音的3倍時(shí)，該濃度為檢測(cè)限，經(jīng)測(cè)定，檢測(cè)限為0.2 mg/L。

2.2平衡溶解度測(cè)定

2.2.1不同緩沖液配制［7］

參照文獻(xiàn)［7］配制以下11種緩沖液：0.1 mol/L氯化氫溶液（HCl）；SGFsp（不含胃蛋白酶的模擬胃液，pH=1.2緩沖液）；人工胃液（SGF）；pH=2.0緩沖液；pH=3.0緩沖液；pH=4.0緩沖液；pH=5.0緩沖液；SIFsp（含胰酶的模擬腸液，pH=6.8緩沖液）；蒸餾水；pH=7.5緩沖液；Na-SIFsp（pH=6.8）+0.2%（0.5%）十二烷基硫酸鈉（SDS）。

2.2.2平衡飽和溶液配制［7］

精密稱取辛伐他汀原料藥50 mg，置離心管（EP管）中，分別加入不同緩沖液1 mL，超聲2 h，水浴37℃放置24 h，使其平衡，得平衡飽和溶液。

2.2.3平衡溶解度測(cè)定

分別取辛伐他汀平衡飽和溶液測(cè)定濃度并計(jì)算平衡溶解度，見表2。辛伐他汀在未加表面活性劑的10種介質(zhì)溶液中的平衡溶解度相差不大，為1.11～1.79 mg/L；當(dāng)加入SDS后辛伐他汀的溶解度顯著增加，達(dá)到130.90 mg/L，增加70多倍。

表2　辛伐他汀在不同介質(zhì)溶液中的平衡溶解度（mg/L）

2.3表觀油水分配系數(shù)測(cè)定［8］

2.3.1供試品溶液

分別配制4種不同pH緩沖液（pH=1.0，4.0，6.0，6.8），再分別精確稱取辛伐他汀原料藥20 mg溶于50 mL上述不同pH緩沖液中，渦旋振蕩5 min，水浴37℃放置24 h，靜置過濾，得供試品溶液，分別取10 μL測(cè)定濃度，得供試液濃度（C1）。

2.3.2表觀油水分配系數(shù)測(cè)定溶液

制備不同pH緩沖液飽和正辛醇：分別取5 mL正辛醇與等量的不同pH緩沖液混合，渦旋振蕩5 min，水浴37℃放置24 h，靜置分層，上層即為不同pH緩沖液飽和正辛醇。精密量取相應(yīng)pH緩沖液溶解的供試品溶液2.0 mL和相應(yīng)pH緩沖液飽和正辛醇2.0 mL，混合，渦旋振蕩2 min，水浴37℃放置24 h，靜置分層，取下層緩沖液水層10 μL測(cè)定辛伐他汀濃度，得水相平衡濃度（C2）。

2.3.3測(cè)定結(jié)果

根據(jù)表觀油水分配系數(shù)公式Papp=（C1-C2）/C2計(jì)算得辛伐他汀在不同緩沖液中的表觀油水分配系數(shù)。結(jié)果表明，辛伐他汀在pH=1.0的緩沖液中表觀油水分配系數(shù)最大，在pH=6.0的緩沖液中最小，但差異不明顯（圖3）。

圖3　不同pH緩沖液中的表觀油水分配系數(shù)

3　討論

藥物的表觀油水分配系數(shù)和溶解度與藥物的體內(nèi)吸收密切相關(guān)，可為研發(fā)新劑型提供重要參數(shù)。同時(shí)，對(duì)藥物的溶解性和表觀油水分配系數(shù)的研究在藥物分析、藥物一致性評(píng)價(jià)中也有重要意義。目前尚未見有關(guān)辛伐他汀平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道。藥物除了靜脈注射給藥外，其他給藥方式均要經(jīng)過吸收才能進(jìn)入血液，如口服給藥，藥物在吸收前須先崩解、釋放、溶解在胃腸道消化液中，然后才能以被動(dòng)擴(kuò)散或主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)等吸收機(jī)制通過消化道黏膜，進(jìn)入血液循環(huán)［9］，且與藥物本身的水溶性及脂溶性有關(guān)［10］。故藥物在體內(nèi)的吸收、分布、轉(zhuǎn)運(yùn)與藥物的油水分配系數(shù)和溶解度有關(guān)。

平衡溶解度是指一定溫度和壓力下，一定體積的溶劑中達(dá)到飽和時(shí)溶解的最大藥量，是衡量藥物溶解性能的重要指標(biāo)［11］。本試驗(yàn)中通過HPLC法測(cè)定了辛伐他汀在pH=1.0，2.0，4.0，5.0緩沖液和水等11種不同介質(zhì)中的平衡溶解度，結(jié)果表明，辛伐他汀在水中和其他不同pH緩沖液的平衡溶解度無顯著性差異，且溶解度均較低，但當(dāng)添加了表面活性劑SDS后辛伐他汀的溶解度顯著增加，可達(dá)到原來的70多倍。故可考慮在新劑型開發(fā)中加入SDS、吐溫等表面活性劑，增加辛伐他汀在體內(nèi)的溶解度，提高其生物利用度。

另外，藥物在體內(nèi)的吸收、分布、轉(zhuǎn)運(yùn)與藥物的脂溶性有關(guān)，脂溶性較好的藥物其生物膜透過性能也較好，有利于藥物的吸收，從而提高生物利用度。表觀油水分配系數(shù)能反映藥物在胃腸道中的吸收速度和程度，只有具有適當(dāng)脂溶性和水溶性的藥物才較易通過生物脂質(zhì)雙分子膜而被吸收進(jìn)入機(jī)體內(nèi)發(fā)揮療效。

在體外測(cè)定藥物的表觀油水分配系數(shù)，即可模擬藥物在生物體內(nèi)水相和生物相之間的分配情況，從而預(yù)測(cè)其在腸道中的吸收情況［12］。根據(jù)表觀油水分配系數(shù)的對(duì)數(shù)值（lg P）預(yù)測(cè)藥物的胃腸道吸收及經(jīng)皮滲透行為［13-15］。但藥物的吸收與lg P之間并不成比例，通常認(rèn)為lg P在1～4范圍內(nèi)有利于藥物的吸收［16］。由于正辛醇的溶解度參數(shù)與生物膜整體的溶解度參數(shù)相似，故通常選擇正辛醇模擬生物膜［17］。本試驗(yàn)中測(cè)定了辛伐他汀在正辛醇-不同pH緩沖液中的表觀油水分配系數(shù)，結(jié)果表明，辛伐他汀在pH為1.0～6.8時(shí)，其表觀油水分配系數(shù)均大于2，脂溶性高，且不隨pH的變化而變化。

綜上所述，辛伐他汀水溶性較差，且在水中不發(fā)生分離，脂溶性高，在生物學(xué)藥劑學(xué)分類系統(tǒng)中屬于生物藥劑學(xué)分析系統(tǒng)（BCS）Ⅱ類，即低溶解性、高滲透性。故如何提高辛伐他汀在生物體內(nèi)的溶解性，并使其在體內(nèi)被充分吸收，提高藥物的生物利用度，是辛伐他汀新劑型研究工作的核心。

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Determination of Equilibrium Solubility of Simvastatin in Various Buffers and Its Apparent Oil/Water Partition Coefficient

Wang Suzhen，Li Rongrong，Yue Xue，Dong Huijun
（School of Pharmacy，Liaocheng University，Liaocheng，Shandong，China252000）

ObjectiveTo determine the equilibrium solubility of simvastatin in 11 kinds of buffers and its partition coefficients for the n-octanol-water/buffer solutionsystem，toprovidereferencefor theresearchanddevelopmentofnewformulationsofsimvastatin.MethodsThe HPLC method was established and used to detect the concentration of simvastatin in 11 kinds of buffers；the partition coefficients for the n-octanol-water/buffer solution systems of simvastatin were determined by shaking flask method.Results Simvastatin show no difference in solution of equilibrium solubility in different pH buffer.Addition of surfactant can increase the equilibrium solubility of simvastatin by 70 fold，reaching 130 mg/L.Simvastatin had similar oil-water partition coefficient of about 2.5 in different pH buffer（lg P=0.39），with no significant difference.ConclusionSimvastatin is a hydrophobic drug and has poor solubility in water，which belongs to BCSⅡdrugs.Surfactant such as SDS canincrease its solubility in water significantly.Oil-water partition coefficient of Simvastatin is not affected by pH.

Simvastatin；equilibrium solubility；apparent oil/water partition coefficient；HPLC

R927.1；R972+.6

A

1006-4931（2016）12-0035-04

王素珍（1989-），女，碩士研究生，研究方向?yàn)樗幬锓治龊鸵恢滦栽u(píng)價(jià)，（電子信箱）1315879113@qq.com；董惠鈞，副教授，研究方向?yàn)樯镏扑?，本文通訊作者，（電子信箱）donghuijun_747@ 163.com。

（2015-10-14；

2016-02-25）