梁　潔　呂松林　孫正伊　金青青　黃春燕

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530200；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院，廣西 南寧 530001）

廣西馬尾松松球總多酚的含量測定

梁潔1呂松林1孫正伊2金青青1黃春燕1

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530200；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院，廣西 南寧 530001）

建立馬尾松松球中總多酚的含量測定方法。以沒食子酸為對照品，采用紫外-可見分光光度法測定馬尾松松球總多酚的含量。沒食子酸在濃度1.818～10.908 μg /ml 的范圍內(nèi)與吸光度值呈良好的線性關(guān)系（r = 0. 9996），馬尾松松球總多酚的平均含量為16.24 mg/g，RSD=0.31%。所建立的方法穩(wěn)定可靠、操作簡便，可作為馬尾松松球總多酚的含量測定方法。

馬尾松松球；總多酚；紫外-可見分光光度法

松球是松科植物馬尾松（Pinus massoniana Lamb）、云南松（Pinus yunnanensis Faranch）、油松（Pinus tabulaeformis Carr）等的球果，又名松塔、松實(shí)、松元、小松球等，具有瀉下、解毒之功效［1］。松球中具有揮發(fā)油、多糖、黃酮類、多酚類、木質(zhì) 素類等化學(xué)成分［2］。馬尾松植物資源豐富，分布于國內(nèi)大部分地區(qū)，其中在廣西主要分布于南寧、柳州、貴港、玉林、賀州、梧州等地。松球?yàn)殪铒L(fēng)濕藥，能祛風(fēng)除痹，止咳平喘、祛痰、祛風(fēng)、抗菌、潤腸等［3］。松球中具有多種化學(xué)活性成分，其中多酚就占有很大一部分比例。植物多酚是植物體內(nèi)的復(fù)雜分類次生代謝物，是由沒食子酸或其聚合物的葡萄糖醇、黃烷醇及其衍生物的聚合物以及二者混合共同組成的多元酚。研究表明多酚具有很強(qiáng)的清除自由基能力和消除自由基毒性作用，同時具有很強(qiáng)的氧化性。它能改善心血管疾病、抗腫瘤、治療骨質(zhì)疏松、降血糖、降血脂、治療神經(jīng)退行性疾病等作用［4］。前期的實(shí)驗(yàn)研究表明，馬尾松松球中含有的多酚類成分是其抗氧化作用的重要物質(zhì)基礎(chǔ)之一。為此，本實(shí)驗(yàn)采用紫外-可見光分光光度儀對馬尾松松球中的總多酚進(jìn)行了含量測定，為馬尾松松球的進(jìn)一步研究和開發(fā)利用提供科學(xué)的理論參考。

1　儀器與試藥

1.1儀器

UV-1800紫外-可見光分光光度儀（日本島津公司），TYDE AEU-210型萬分之一克電子天平（德國賽多利斯），打粉機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2材料

沒食子酸（中國食品藥品檢定研究院，批號：110753-201313）；福林酚（上海荔達(dá)生物科技有限公司）；碳酸鈉、乙醇（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；蒸餾水。

2　方法與結(jié)果

2.1對照品溶液的制備

精密稱取沒食子酸對照品18.18 mg，先用少量乙醇溶解，再用蒸餾水定容至100ml，配制成0.1818mg /mL沒食子酸對照品溶液。

2.2供試品溶液的制備

馬尾松松球干燥后粉碎，過60目篩，稱取粉末1.0g，精密稱定，置于50ml具塞錐形瓶中，加70%乙醇25ml，稱定重量，超聲30 min后，放冷，再稱定重量，補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，將濾液放置蒸發(fā)皿中，水浴揮干濾液，蒸餾水溶解并定容至25ml容量瓶，即為供試品溶液。

2.3最大吸收波長的確定

精密量取對照品溶液和供試品溶液各1.0ml，置10 ml容量瓶中，分別加入經(jīng)10倍稀釋的福林酚溶液2.5ml及7.5%碳酸鈉溶液2ml，搖勻，定容，放置30min后，同法對空白對照溶液顯色，用紫外-可見分光光度儀在200～800nm全波長掃描，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對照品與供試品均在760nm處有最大吸收，故選取760nm為測定波長。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取對照品溶液1，2，3，4，5，6ml分別置于10ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻；精密量取各溶液1.0ml置于10ml容量瓶，按2.3項(xiàng)下方法進(jìn)行測定，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，回歸方程為y=0.0835x-0.0004，r=0.9996，沒食子酸對照品1.818～10.908μg /ml與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗(yàn)

精密量取供試品溶液1.0ml，按照2. 3項(xiàng)下的方法測定吸光度，連續(xù)測定6次，吸光度值RSD為0.55%（n=6）。結(jié)果表明，儀器的精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取供試品溶液1.0ml，按照2.3項(xiàng)下的方法，分別在0min、30min、60min、90min、120min、150min測定吸光度，測得吸光度RSD為0.21%（n=6），表明在150min內(nèi)顯色基本穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)

按照供試品制備方法平行制備6份樣品，每份1.0ml，按照2.3項(xiàng)下的方法測定，總多酚含量RSD為0.53%（n=6）。結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.8加樣回收率試驗(yàn)

分別取已知含量的馬尾松松球6份，每份約0.5g，精密稱定，分別精密加入一定量的沒食子酸對照品溶液，按照2.3項(xiàng)下的方法測定吸光度，計(jì)算平均回收率為99.95%，RSD為0.69%（n=6）。結(jié)果見表1。

表1　馬尾松松球總多酚的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9樣品測定

分別測定3批樣品，按2.3項(xiàng)下的方法進(jìn)行測定，計(jì)算馬尾松松松球總多酚的含量，平均含量為16.24 mg/g，RSD為0.31%（n=3）。結(jié)果見表2。

表2　馬尾松松球總多酚的含量測定結(jié)果

3　討論

目前植物多酚的測定方法有多種，如酒石酸亞鐵比色法、高錳酸鉀法、原子吸收法、福林酚比色法、紫外-分光光度法等［5-10］。馬尾松松球總多酚采用乙醇提取，福林酚-碳酸鈉反應(yīng)顯色，紫外-分光光度法測定。該方法操作簡便，穩(wěn)定性好，重復(fù)性好，精密度高，準(zhǔn)確可靠

在本實(shí)驗(yàn)供試品溶液制備過程中，筆者考察了超聲、回流和浸漬三種提取方式，在樣品分別超聲、回流、浸漬提取30 min后，結(jié)果浸漬提取的含量最低，超聲和回流提取的含量較浸漬提取的高些但相差不大，考慮到超聲提取方法操作簡單，故選擇超聲提取方法。筆者還考察了不同的乙醇濃度（30%、50%、70%、90%）對總多酚提取效果的影響，結(jié)果顯示使用70%乙醇提取總多酚含量較高。本實(shí)驗(yàn)以乙醇作為提取溶劑，毒性較低，對實(shí)驗(yàn)人員人身安全影響不大，而且價(jià)位相對來說較為便宜，更能節(jié)省費(fèi)用，適宜于馬尾松松球總多酚的含量測定。

綜上，本實(shí)驗(yàn)所建立的方法可作為馬尾松松球總多酚含量測定依據(jù)，為更有效的開發(fā)利用馬尾松松球資源和建立質(zhì)量評價(jià)方法提供了基礎(chǔ)資料。但對于馬尾松松球總多酚各種成分的分離、純化與測定及藥理作用等方面的研究更待筆者進(jìn)一步探索。

［1］ 姚振生.藥用植物學(xué)［M］.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2003：216.

［2］ 《中華本草》編委會.中華本草（第二冊）［M］.上海：上海科技出版社，1999：312.

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［4］ Scalbert A，Manach C，Morand C，et al.Dietary polyphe-nols and the prevention of diseases［J］.Crit Rev Food SciNutr，2005，45（4）：287.

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Determination of total polyphenol from pinecone of Pinus massoniana Lamb

To establish the determination of total polyphenol in pinecone of Pinus massoniana Lamb. Gallic acid was taken as a

ubstance； the content of total polyphenol was determined by UV-vis spectrophotometry. A linear correlation between density and absorption of gallic acid solution was noted at the concentration of 1.818～10.908 μg /ml （ r = 0. 9996） ，the average content of total polyphenol was 16.24mg/g， RSD =0. 31%. The method was stable and reliable， simple； it could be used for determination of total polyphenol in pinecone of Pinus massoniana Lamb.

Pinecone of Pinus massoniana Lamb；total polyphenol；UV-vis spectrophotometry

R93

A

1008-1151（2016）03-0035-02

2016-02-13

廣西高?？茖W(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（2013YB120），廣西研究生教育創(chuàng)新計(jì)劃資助項(xiàng)目（JGY2012032），廣西壯瑤藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（桂科基字［2014］32號），壯瑤藥協(xié)同創(chuàng)新中心（桂教科研［2013］20號），國家中醫(yī)藥管理局科研三級實(shí)驗(yàn)室中（壯）藥化學(xué)與質(zhì)量分析實(shí)驗(yàn)室，廣西高校中藥提取純化與質(zhì)量分析重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西高等學(xué)校高水平創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)及卓越學(xué)者計(jì)劃資助。

梁潔（1979-），女，廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院教授，博士，碩士研究生導(dǎo)師，從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)與質(zhì)