蔡麗君，林赟，陳鳳平

（1.廣州市天河區(qū)石牌街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心檢驗(yàn)科，廣東510630；2.暨南大學(xué)附屬華僑醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州510630）

消除血漿高脂血標(biāo)本對(duì)生化項(xiàng)目測(cè)定結(jié)果干擾的方法研究

蔡麗君1，林赟1，陳鳳平2

（1.廣州市天河區(qū)石牌街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心檢驗(yàn)科，廣東510630；2.暨南大學(xué)附屬華僑醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州510630）

目的探討采用高速離心法、乙醚抽提法及生理鹽水稀釋法消除高脂血標(biāo)本對(duì)生化酶類指標(biāo)測(cè)定結(jié)果干擾的可行性，并比較3種方法的優(yōu)劣。方法收集2014年8月至2015年3月廣東省廣州市天河區(qū)石牌街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心采集的明顯高脂血標(biāo)本52份，以3 000 r/min離心10 min得到原高脂血漿。采用MINDRAY BS-390全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定原高脂血漿、高速離心血漿、乙醚抽提血漿及生理鹽水稀釋血漿中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶同工酶及淀粉酶水平，并分析比較3種方法對(duì)各種酶類指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果的影響。結(jié)果原高脂血漿與高速離心血漿、乙醚抽提血漿及生理鹽水稀釋血漿中各種酶類指標(biāo)測(cè)定結(jié)果比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；且各種酶類指標(biāo)測(cè)定值由高至低依次為高速離心血漿、乙醚抽提血漿、生理鹽水稀釋血漿和原高脂血漿。結(jié)論高速離心法相對(duì)乙醚抽提法及生理鹽水稀釋法處理高脂血標(biāo)本能明顯減輕高脂血標(biāo)本混濁對(duì)生化分析儀測(cè)定酶類結(jié)果的干擾和影響。

實(shí)驗(yàn)室技術(shù)和方法；標(biāo)本；高脂血

我國隨著改革開放，人民生活水平日益改善，近十多年來，國人生活方式及飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生了巨大變化，導(dǎo)致高脂血癥發(fā)生率呈上升趨勢(shì)［1］，當(dāng)三酰甘油水平大于3.0 mmol/L時(shí)血液標(biāo)本的外觀可呈不同程度混濁。因此，高脂血標(biāo)本在臨床檢驗(yàn)工作中較為常見，對(duì)臨床生化各項(xiàng)指標(biāo)、凝血功能相關(guān)指標(biāo)、放射免疫多項(xiàng)指標(biāo)檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性均會(huì)造成不同程度的干擾和影響。輕度高脂血標(biāo)本對(duì)各種生化指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果可能不會(huì)造成嚴(yán)重的干擾或影響，但嚴(yán)重高脂血標(biāo)本則明顯干擾或影響各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果［2］。本研究就高脂血標(biāo)本對(duì)生化分析儀測(cè)定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine amiotransferase，ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartateaminotransferase，AST）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（gamma glutamyltransferase，GGT）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）、肌酸激酶同工酶（creatine kinase isoenzyme，CK-MB）及淀粉酶（amylase，AMY）等測(cè)定結(jié)果的影響通過采用高速離心法、乙醚抽提法及生理鹽水稀釋法處理高脂血標(biāo)本，比較3種方法的優(yōu)劣，并探討消除高脂血標(biāo)本對(duì)其他檢驗(yàn)項(xiàng)目測(cè)定結(jié)果的干擾，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1標(biāo)本來源選擇2014年8月至2015年3月在廣州市天河區(qū)石牌街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心門診就診患者52例，采集空腹靜脈血4.0 mL（肝素鋰真空抗凝管），三酰甘油檢測(cè)結(jié)果為10.2～24.5 mmol/L。

1.2方法將高脂肪乳糜標(biāo)本3 000 r/min離心10 min得到原高脂血漿。然后將標(biāo)本分為4份：第1份采用原高脂血漿測(cè)定；第2份采用高速離心法處理（13 000 r/min離心10 min），取下層清亮血漿測(cè)定；第3份采用乙醚充分振搖抽提后再以4 000 r/min離心10 min，取下層清亮血漿測(cè)定；第4份采用生理鹽水進(jìn)行5倍稀釋后測(cè)定。所有標(biāo)本同時(shí)在MINDRAY BS-390全自動(dòng)生化分析儀上測(cè)定ALT、AST、ALP、GGT、LDH、CK-MB及AMY，所有指標(biāo)的檢測(cè)均嚴(yán)格按照儀器及試劑盒說明書操作。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析與q檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

原高脂血漿與高速離心血漿、乙醚抽提血漿及生理鹽水稀釋血漿中各種酶類指標(biāo)測(cè)定結(jié)果比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；且各種酶指標(biāo)測(cè)定值由高至低依次為高速離心血漿、乙醚抽提血漿、生理鹽水稀釋血漿和原高脂血漿，見表1。

表1　原高脂血漿與3種不同處理方法血漿各種酶類指標(biāo)測(cè)定結(jié)果比較（±s，U/L，n=52）

表1　原高脂血漿與3種不同處理方法血漿各種酶類指標(biāo)測(cè)定結(jié)果比較（±s，U/L，n=52）

注：與原高脂血漿比較，aP＜0.01；與高速離心法血漿比較，bP＜0.01；與乙醚抽提法血漿比較，cP＜0.01。

血漿原高脂血漿高速離心法血漿乙醚抽提法血漿生理鹽水稀釋法血漿ALT 8.9±7.1 40.8±9.3a29.7±7.6ab23.1±6.0abcASTALPGGTLDHCK-MBAMY 10.8±9.6 47.6±10.2a36.8±9.3ab19.8±7.5abc24.7±13.5 84.6±15.2b60.5±14.1ab48.8±12.3abc8.1±4.2 35.6±8.4a24.7±7.3ab16.8±5.1abc58.1±20.2 143.0±27.6a108.8±24.3ab75.1±23.1abc2.1±1.0 13.2±4.3a8.1±3.8ab5.2±2.4abc45.9±15.2 143.2±25.3a102.2±22.1ab74.8±20.4abc

3　討論

高脂血標(biāo)本是臨床生化檢驗(yàn)工作中常遇到的棘手問題，其混濁的主要原因是三酰甘油、極低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、中間密度脂蛋白、高密度脂蛋白及乳糜微粒等脂質(zhì)增多，使血漿濁度增高所致，對(duì)臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目造成的干擾極易影響臨床對(duì)患者的診治，甚至引發(fā)醫(yī)療糾紛。因此，在臨床檢驗(yàn)過程中應(yīng)事先篩選標(biāo)本，如通過目測(cè)法或自動(dòng)化儀器對(duì)比篩選不符合檢驗(yàn)要求的高脂血標(biāo)本，確定干擾物性質(zhì)和級(jí)別并進(jìn)行處理，以降低其對(duì)臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目的干擾和影響，從而提高臨床診斷的準(zhǔn)確性和為臨床治療提供可靠的實(shí)驗(yàn)診斷依據(jù)。

在臨床檢驗(yàn)工作中高脂血標(biāo)本的主要來源通常有以下幾方面：（1）高血壓、心血管疾病及高脂血癥患者；（2）長(zhǎng)期高脂及高熱量飲食者，患者在日常飲食過程中常攝入過量高脂和高熱量食物造成消化道吸收過量脂質(zhì)進(jìn)入血液，使血液標(biāo)本產(chǎn)生混濁外觀（俗稱乳糜血）［3-4］；（3）某些患者由于無法進(jìn)食引起營養(yǎng)不良或有消耗性疾病需輸注脂肪乳而導(dǎo)致血液脂質(zhì)水平過高［5-6］。

高脂血標(biāo)本對(duì)臨床生化分析儀各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定的干擾或影響機(jī)制：（1）由于高脂血標(biāo)本的脂質(zhì)含量過高導(dǎo)致混濁度增高，可增加生化分析儀測(cè)量各指標(biāo)體系的本底，使儀器在測(cè)定過程中吸光度值的變化超出了儀器的光學(xué)測(cè)量范圍，使儀器無法讀取正確的測(cè)量數(shù)據(jù)，導(dǎo)致部分臨床生化指標(biāo)無法檢測(cè)；（2）由于高脂血標(biāo)本中過多的脂質(zhì)微粒在反應(yīng)杯中運(yùn)動(dòng)碰撞而干擾儀器對(duì)吸光值的檢測(cè)，導(dǎo)致相應(yīng)的檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果不準(zhǔn)確；（3）由于高脂血標(biāo)本中過多的不溶性脂質(zhì)微粒使標(biāo)本混濁，增加了標(biāo)本內(nèi)各種物質(zhì)成分的極性與非極性，導(dǎo)致生化分析儀產(chǎn)生光散射干擾［7-8］，從而影響臨床生化指標(biāo)測(cè)定的可靠性。

以往在臨床檢驗(yàn)工作中處理嚴(yán)重高脂血混濁標(biāo)本時(shí)較多采用稀釋、乙醚抽提2種方式進(jìn)行處理。但稀釋法在處理高脂血標(biāo)本時(shí)較容易產(chǎn)生稀釋誤差，且隨血標(biāo)本稀釋倍數(shù)增高稀釋誤差也隨著倍增［9］，同時(shí)由于稀釋后血標(biāo)本脂質(zhì)微粒依然存在，所以，對(duì)臨床生化分析儀產(chǎn)生的光散射干擾并沒有達(dá)到完全消除的效果。而乙醚抽提法中由于乙醚是一種較強(qiáng)的有機(jī)溶劑，較容易引起高脂血標(biāo)本中蛋白質(zhì)成分變性。特別是用乙醚抽提樣本時(shí)容易使高脂血標(biāo)本中的蛋白質(zhì)酶類活性發(fā)生變化，使高脂血標(biāo)本中蛋白質(zhì)酶類的檢測(cè)結(jié)果相對(duì)患者的真實(shí)檢測(cè)結(jié)果偏低。另外乙醚有機(jī)溶劑在抽提高脂血標(biāo)本時(shí)對(duì)其他的糖類物質(zhì)、無機(jī)離子、非蛋白質(zhì)化合物等指標(biāo)的檢測(cè)也同樣會(huì)產(chǎn)生干擾或影響。目前，對(duì)高脂血標(biāo)本較常用的是采用低溫高速離心法，即將高脂血標(biāo)本加蓋密封進(jìn)行高速離心，離心后可見標(biāo)本分為2層，將下層血漿吸取出來再用生化分析儀進(jìn)行各項(xiàng)臨床生化指標(biāo)的檢測(cè)。但低溫高速離心法對(duì)離心機(jī)性能要求較高，且對(duì)嚴(yán)重高脂血標(biāo)本需離心的時(shí)間較長(zhǎng)，這樣可能會(huì)導(dǎo)致標(biāo)本產(chǎn)生溶血從而干擾或影響相關(guān)臨床生化指標(biāo)的檢測(cè)。同時(shí)低溫高速離心機(jī)的購置費(fèi)用也較高，對(duì)基層醫(yī)院檢驗(yàn)科而言不易配備和普及。而常溫高速離心機(jī)因價(jià)格較低廉，且操作簡(jiǎn)單、方便，實(shí)驗(yàn)室也容易配備。本研究結(jié)果顯示，原高脂血漿用生化分析儀所檢測(cè)的各種酶類指標(biāo)結(jié)果與高速離心血漿、乙醚抽提血漿及生理鹽水稀釋血漿的檢測(cè)結(jié)果比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），且高速離心血漿、乙醚抽提血漿及生理鹽水稀釋血漿3種方法處理高脂血標(biāo)本后檢測(cè)結(jié)果比較，差異也均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），且各種酶類指標(biāo)測(cè)定結(jié)果由高至低依次為高速離心血漿、乙醚抽提血漿、生理鹽水稀釋血漿和原高脂血漿。因此，作者認(rèn)為，常溫高速離心法是一種能較好地消除高脂血標(biāo)本的干擾及影響臨床生化分析儀檢測(cè)結(jié)果的簡(jiǎn)便、有效且可行方法之一。

目前，在臨床檢驗(yàn)工作中如何尋找消除高脂血標(biāo)本對(duì)臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目的干擾對(duì)策是亟須重視的問題：（1）消除單項(xiàng)檢驗(yàn)指標(biāo)樣本的干擾最好的解決對(duì)策是改變檢測(cè)項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)方法、試劑或檢測(cè)時(shí)間，如肌酐（serum creatinine，Cr）作為肌酸代謝的終產(chǎn)物，是臨床疾病診斷中用于衡量腎功能的一項(xiàng)常規(guī)指標(biāo)，其在血液中的變化主要由腎小球?yàn)V過能力決定。通常臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)Cr最常用的方法為苦味酸速率法，因此，在用該法進(jìn)行檢測(cè)時(shí)常需選擇“窗口期”（即標(biāo)本和試劑混合后25～60 s）進(jìn)行測(cè)定，這樣才能最大限度地消除快速反應(yīng)假性Cr物質(zhì)和慢速反應(yīng)假性Cr物質(zhì)的干擾。此外采用加入雙試劑（抗壞血酸酶和亞硝基鐵氰化鉀）的肌氨酸氧化酶法（需去除鎂離子的干擾）檢測(cè)Cr也是一種良好的檢測(cè)方法，可去除抗壞血酸和膽紅素的干擾。同型半胱氨酸作為甲硫氨酸和半胱氨酸代謝過程中一個(gè)重要的中間產(chǎn)物，可直接或間接引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖，影響低密度脂蛋白的氧化，增強(qiáng)血小板功能，從而促進(jìn)血栓形成。因此，在全自動(dòng)生化分析儀中可采用熒光偏振免疫技術(shù)對(duì)血清同型半胱氨酸進(jìn)行測(cè)定，可為臨床診治動(dòng)脈粥樣硬化性血管性疾病提供更高效、準(zhǔn)確、可靠和可行的依據(jù)。（2）消除多項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)標(biāo)本的干擾。在臨床生化檢測(cè)多項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)標(biāo)本時(shí)需采用可行性強(qiáng)、無交叉干擾及操作簡(jiǎn)單、易行的實(shí)驗(yàn)方法，如利用依米試劑不溶于水的特性，將其與高脂血清（漿）混合后可將高濃度脂質(zhì)分離出來。雖然經(jīng)上述多種途徑處理后的高脂血標(biāo)本可消除高濃度脂質(zhì)微粒對(duì)多種生化指標(biāo)檢測(cè)造成的干擾，但在某種程度上仍不能消除高脂血標(biāo)本對(duì)清蛋白、GGT、血尿素氮等指標(biāo)檢測(cè)的干擾［10］。因此，在臨床檢驗(yàn)工作中應(yīng)優(yōu)先選擇去脂混合劑，再采用常溫高速離心法，密封分離標(biāo)本，并對(duì)其下層清液進(jìn)行測(cè)定，可有效降低因血中膽固醇濃度過高對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)的影響，為高脂血癥患者提供準(zhǔn)確、可靠的檢驗(yàn)結(jié)果。（3）消除高脂血標(biāo)本對(duì)凝血相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)的干擾。凝血相關(guān)指標(biāo)常采用膠體金或免疫比濁法進(jìn)行檢測(cè)，要求對(duì)高脂血標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)比例稀釋，即可避免或明顯降低高脂血標(biāo)本對(duì)凝血相關(guān)指標(biāo)的干擾。

綜上所述，在臨床工作中采用一些簡(jiǎn)便、易行的方法預(yù)先處理高脂血標(biāo)本可明顯降低檢驗(yàn)過程中各種干擾因素對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果的影響，從而提高臨床檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，為臨床疾病的診治提供可靠的實(shí)驗(yàn)診斷依據(jù)。

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