展瑞，鄒國楨，季成棟，陸夏良

（南通大學附屬吳江醫(yī)院病理科，江蘇蘇州215002）

AR在ER（-）/HER2（+）乳腺癌組織中的表達及其與臨床病理特征、Ki-67相關性分析

展瑞，鄒國楨，季成棟，陸夏良

（南通大學附屬吳江醫(yī)院病理科，江蘇蘇州215002）

目的觀察雄激素受體（AR）及Ki-67在雌激素受體（ER）（-）/人表皮生長因子受體2（HER2）（+）的乳腺癌組織中的表達及AR與臨床病理特征、Ki-67強度的相關性。方法收集該科2007年1月至2015年12月經(jīng)病理學確診為乳腺癌的62例患者的組織標本，采用免疫組織化學EnVision兩步法檢測ER（-）/HER2（+）乳腺癌組織中AR和Ki-67的表達，統(tǒng)計分析AR與臨床病理特征、Ki-67表達強度的相關性。結果AR表達率為69.57%，Ki-67表達率為5%～8%。AR表達與腫瘤組織學分級、Ki-67表達強度及淋巴脈管侵犯相關（P＜0.01或0.05），且與Ki-67高強度表達呈負相關（P＜0.05），而與年齡、腫瘤大小、絕經(jīng)與否、淋巴結轉移及臨床分期無明顯相關性（P＞0.05）。結論ER（-）/HER2（+）乳腺癌組織中AR表達率較高，與腫瘤分級、Ki-67高強度及淋巴脈管侵犯相關，提示AR高表達者預后較好。

受體，雌激素；乳腺腫瘤/病理學；Ki-67抗原；相關性

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。近年來，乳腺癌患病率呈上升趨勢，且呈年輕化趨勢，已成為女性惡性腫瘤的死亡原因之首。據(jù)報道，僅2012年全球新發(fā)乳腺癌病例約為1 670萬例，2008年近46萬人死于乳腺癌［1］。因此，對乳腺癌早期而準確的診斷和治療迫在眉睫。研究表明，有10%～15%的乳腺癌患者為人表皮生長因子受體2（HER2）（+），對此類患者應用曲妥單抗聯(lián)合輔助化療可顯著提高無瘤生存率和總生存率［2］。但盡管如此，仍有相當一部分患者治療效果欠佳。75%～80%乳腺癌是激素依賴性的，雄激素受體（AR）在60%～70%乳腺癌組織中呈高表達［3］，表明AR在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。目前，關于AR和HER2關系的報道較少，故本研究探討雌激素受體（ER）（-）/HER2（+）乳腺癌組織中AR和Ki-67的表達情況及AR與臨床病理特征、Ki-67強度的相關性。

1　資料與方法

1.1一般資料收集本科2007年1月至2015年12月經(jīng)病理學確診為乳腺癌的62例患者的組織標本，其中ER（-）/HER2（+）者46例，均為女性，年齡29～65歲，平均42歲。患者均未經(jīng)過放、化療等治療。其中組織學分級1級6例，2、3級40例，伴淋巴結轉移27例。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟/美國癌癥聯(lián)合委員會（AJCC/UICC）TNM臨床分期第6版標準：Ⅰ期12例，Ⅱ期25例，Ⅲ期9例。

1.2方法

1.2.1檢測方法采用免疫組織化學（IHC）EnVision兩步法進行檢測。AR、Ki-67、HER2試劑均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。將乳腺癌組織標本以10%甲醛固定24 h，常規(guī)石蠟包埋，制作成厚度為4 μm的切片。用已知所有IHC指標（ER、HER2、AR、Ki-67）的陽性標本作陽性對照，以磷酸緩沖鹽溶液（PBS）代替一抗作陰性對照。

1.2.2ER（-）/HER2（+）判定HER2經(jīng)IHC染色后從染色范圍和細胞膜染色強度判定：（-）為組織未表達；（+）為大于10%的細胞膜弱陽性；（++）為大于或等于10%細胞膜中等強度或小于或等于10%的細胞膜強陽性；（+++）為大于或等于10%的細胞膜強陽性。HER2（+++）者判為陽性，評定為（++）和（+）的再經(jīng)熒光原位雜交技術進行檢測。ER＜10%瘤細胞核陽性判為陰性。

1.2.3結果判斷AR采用大于或等于10%瘤細胞核陽性作為陽性標準。Ki-67陽性細胞為核著色，取任意5個高倍鏡視野中陽性細胞所占細胞總數(shù)比例的平均值為Ki-67陽性率，Ki-67陽性率小于或等于30%為低度，＞30%為高度。

1.3統(tǒng)計學處理應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，應用Pearson χ2檢驗和非參數(shù)統(tǒng)計中Spearman等級相關分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1AR及Ki-67的表達情況IHC結果顯示，AR及Ki-67主要表達于細胞核。46例乳腺癌患者中，AR陽性32例（69.57%）。Ki-67表達率為5%～80%，其中低強度者19例（41.30%），高強度者27例（58.70%）。

2.2AR表達與臨床病理特征、Ki-67強度的相關性分析AR表達與年齡、腫瘤大小、絕經(jīng)與否、淋巴結轉移及臨床分期無明顯相關性（P＞0.05），而與腫瘤組織學分級、Ki-67強度及淋巴脈管侵犯相關（P＜0.01或0.05），見表1。經(jīng)Spearman等級相關性分析，AR表達與Ki-67高強度表達呈負相關（P＜0.05）。

表1　AR表達與臨床病理特征、Ki-67強度的相關性分析

3　討論

乳腺癌是一組高度異質性的惡性腫瘤，無論在組織形態(tài)、免疫表型、生物學行為還是治療反應上都存在著極大的差異。根據(jù)美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡（NCCN）指南，臨床上對于ER和孕激素受體（PR）（+）的乳腺癌患者給予內(nèi)分泌治療，其有效率可達近70%。因此，目前臨床上多使用IHC染色方法檢測ER、PR和HER2這3種常用的標記物，并將乳腺癌分為3種類型，即管腔型：高表達激素受體腫瘤，預后良好；HER2型：高表達HER2，而激素受體（-）；基底細胞樣型：缺少激素受體和HER-2表達，預后較差。

Ki-67是與細胞增殖相關的核抗原，位于細胞核內(nèi)，在有絲分裂中起到維持DNA結構的功能，其表達隨細胞周期的變化而變化，可用于判斷細胞的增殖活性，是目前應用最廣泛的增殖細胞標志之一。據(jù)報道，Ki-67表達與多種惡性腫瘤如甲狀腺癌、膀胱癌和卵巢癌等的發(fā)生、發(fā)展和預后密切相關［4］，尤其在乳腺癌的診治與預后判斷等方面具有重要的臨床參考價值。在不同年齡和不同類型的乳腺癌中，Ki-67表達也有所不同，可作為乳腺癌無病生存率和無復發(fā)生存率獨立和有意義的預后因素。目前，Ki-67已在臨床上作為乳腺癌病理診斷報告中不可或缺的重要病理標記。在2011年，NCCN指南將Ki-67作為臨床應用的病理學指標之一。本研究根據(jù)Jalava等［5］將Ki-67表達強度分為低度（≤30%）和高度（＞30%），而Jalava等［5］報道顯示，Ki-67表達強度為高度者預后較差。本研究結果表明，AR表達與Ki-67高強度表達呈負相關，說明AR高表達者其腫瘤細胞增殖能力較弱，預后較好。

原癌基因HER2屬于表皮生長因子受體，可調(diào)節(jié)細胞的生長、分化和增殖，HER2基因擴增引起HER2受體蛋白過度表達，且隨著陽性表達率的升高，病理分級也增高［6］，但預后較差。臨床上，ER（-）/HER2（+）亞群患者常表現(xiàn)為腫瘤惡性程度高、生存率低、病情進展迅速、易發(fā)生淋巴結轉移等特點，但由于曲妥珠單抗（HER2抗體）的問世，改善了HER2（+）乳腺癌患者的預后，影響了乳腺癌的診療模式。該藥治療療效明確，可加強HER2陽性轉移或早期可手術切除乳腺癌患者的化療效果。因此，推薦該藥單用或聯(lián)合化療用于早期可手術切除和轉移性HER2（+）乳腺癌的治療。但臨床上仍有相當一部分患者對HER2抗體無反應，甚至出現(xiàn)了耐藥性。因此，針對這部分乳腺癌患者的遺傳基礎和分子生物學的深入研究將是醫(yī)學上的研究熱點之一。本研究結果顯示，AR在ER（-）/HER2（+）患者中表達率為69.57%，說明ER（-）/HER2（+）亞群中AR表達率較高，為部分乳腺癌患者提供了可能的臨床治療方向。

女性體內(nèi)的雄激素包括由卵巢、腎上腺分泌的睪酮及由腎上腺分泌的雄烯二酮和脫氫表雄酮（DHEA）。有研究表明，所有正常乳腺上皮均表達AR，AR可維持正常乳腺的發(fā)育，并與ER共同保持乳腺內(nèi)分泌的平衡［7］。然而，AR也可以增加乳腺癌的風險，提高惡性腫瘤細胞增殖率。有研究發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后婦女血液中AR濃度升高者其乳腺癌危險性明顯增高，且AR在80%乳腺癌患者中呈高表達，說明AR在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要作用［8］。目前，關于AR與乳腺癌生存率的報道不一。Peters等［9］發(fā)現(xiàn)，AR的高表達與乳腺癌的10年生存率呈負相關，但也有學者提出了相反的觀點，認為AR高表達患者有更長的生存時間［10］。本研究結果顯示，AR的表達與年齡、腫瘤大小、絕經(jīng)與否、淋巴結轉移及臨床分期無明顯相關性，而與腫瘤組織學分級、淋巴脈管侵犯、Ki-67高強度表達相關，提示AR（-）者具有惡性程度較高、侵襲性強、預后較差的臨床特征，而AR（+）者具有腫瘤分化和預后較好的臨床特點。

目前，關于AR與HER2關系的研究較少，由于ER和HER2同時表達者較少。有報道研究ER（-）患者，結果顯示AR高表達與HER2的表達強度相關［11］。本研究中，AR的表達率高達69.57%，陰性者僅為30.43%，二者比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），說明在ER（-）/HER2（+）亞群中，AR與HER2的表達相關。

綜上所述，AR在ER（-）/HER2（+）亞群乳腺癌中表達較高，其表達主要與腫瘤組織學分級、淋巴脈管侵犯、高的Ki-67指數(shù)顯著相關，提示AR高表達者具有較好的臨床預后，但目前關于AR與乳腺癌的生存率報道不一致，可能與各研究對象和激素水平不同所致。由于本研究對象數(shù)量的限制，并未進行AR表達與患者總生存率關系的分析。因此，在今后的工作中，將進一步大樣本研究AR與HER2、ER（-）/HER2（+）患者總生存率的關系。而且，隨著對乳腺癌基礎和分子生物學的深入研究，期待對乳腺癌進行更深、更詳細的分型，以便對乳腺癌患者進行精確治療。

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