張勝佳　李富容　劉丹璇　溫　晶　李　珍肖海璐　李中偉　鄭榮濤　侯建玲　田洪青

?

·論著·

早期梅毒血清IL-37和IL-38的檢測(cè)

張勝佳1,2李富容2劉丹璇2溫晶2李珍2肖海璐1,2李中偉2鄭榮濤2侯建玲2田洪青2

目的：檢測(cè)早期梅毒患者血清IL-37和IL-38的水平。方法：采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)140例早期梅毒患者和180例正常對(duì)照血清IL-37、IL-38的表達(dá)水平。結(jié)果：早期梅毒患者血清中IL-37和IL-38的中位數(shù)分別為14.15 pg/mL和12.21 pg/mL,正常對(duì)照組分別為31.76 pg/mL和17.09 pg/mL，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.005)。結(jié)論：早期梅毒患者外周血清中IL-37和IL-38降低，可能與梅毒患者細(xì)胞免疫相關(guān)。

早期梅毒；IL-37；IL-38

梅毒是由梅毒螺旋體(Treponema pallidum TP)引起的一種慢性性傳播疾病，幾乎可侵犯全身各個(gè)器官，產(chǎn)生多種多樣的癥狀或體征、功能障礙、組織破壞乃至死亡。細(xì)胞免疫是機(jī)體清除梅毒螺旋體的主要免疫反應(yīng)[1]。梅毒早期細(xì)胞免疫反應(yīng)以Th1為主、Th17細(xì)胞高表達(dá)是其特征之一[2，3]。TNF-α作為一種經(jīng)典的Th1型細(xì)胞因子在梅毒螺旋體的清除中發(fā)揮了重要作用，在早期梅毒外周血的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照[4-6]。IL-37作為新型的抗炎細(xì)胞因子，具有抑制炎癥反應(yīng)及炎癥因子的功能，尤其是對(duì)TNF-α 的抑制率可以達(dá)到80%～98%[7]。Th17細(xì)胞是具有

獨(dú)立功能的細(xì)胞亞群，Th17細(xì)胞在自身免疫性疾病、感染性等疾病中發(fā)揮著重要作用，Th17細(xì)胞以及其主要細(xì)胞因子IL-17在早期梅毒外周血中的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照[8]。IL-38作為炎癥抑制因子，具有抑制Th17產(chǎn)生IL-17和IL-22的功能，在Th17介導(dǎo)的炎癥中發(fā)揮作用[9]。因此我們推測(cè)IL-37、IL-38可能與早期梅毒的細(xì)胞免疫具有相關(guān)性。通過檢測(cè)IL-37、IL-38在早期梅毒外周血與正常對(duì)照外周血中的表達(dá)水平，探討其作用。

1　資料與方法

1.1研究對(duì)象研究對(duì)象均為2013年4月至2014年3月就診于我院性病門診的早期梅毒初診患者。早期梅毒入選標(biāo)準(zhǔn)：病期在2年以內(nèi)；未經(jīng)驅(qū)梅治療；TRUST和TPPA試驗(yàn)均陽性，或TP-PCR陽性。對(duì)照入選標(biāo)準(zhǔn)：無梅毒相關(guān)臨床表現(xiàn)；未經(jīng)驅(qū)梅治療；TRUST和TPPA試驗(yàn)均陰性；可疑患者如果行TP-PCR檢測(cè)，結(jié)果為陰性。早期梅毒和對(duì)照的排除標(biāo)準(zhǔn)：①HIV抗體檢測(cè)陽性；②患有自身免疫性疾病或其他感染性疾病者；③妊娠、哺乳期婦女。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1主要儀器和試劑IL-37、IL-38 ELLSA 試劑盒(上海嚴(yán)謹(jǐn)生物科技有限公司)；酶標(biāo)分析儀(北京普朗新技術(shù)有限公司)；微孔振蕩器；電熱恒溫培養(yǎng)箱；TRUST和TPPA試劑盒等。

1.2.2標(biāo)本采集抽取患者和對(duì)照組靜脈血2 mL，收集于無菌干燥試劑管中，靜置、分離血清后置于-80攝氏度保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3TRUST、TPPA、HIV檢測(cè)，操作均嚴(yán)格按照操作規(guī)則進(jìn)行。

1.2.4IL-37、IL-38水平的檢測(cè)采用雙抗體夾心ELLSA方法，嚴(yán)格按照說明書步驟進(jìn)行操作(標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋、加樣、溫育、配液、洗滌、加酶、溫育、洗滌、顯色、終止、測(cè)定)。在450 nm波長按順序測(cè)量出各標(biāo)本的吸光度(OD值)。用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組數(shù)據(jù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組數(shù)據(jù)比較采用方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1臨床資料早期梅毒組入選140例。由于蛋白質(zhì)降解的原因，部分標(biāo)本未能檢測(cè)到數(shù)據(jù)。最終納入統(tǒng)計(jì)的例數(shù)：IL-37組為128例、IL-38組為138例。IL-37病例組：男53例，女75例；年齡16～86歲,平均32.4歲；一期梅毒21例，二期梅毒43例，早期潛伏梅毒(病期在2年以內(nèi))64例；有癥狀梅毒組包括一期和二期梅毒，無癥狀梅毒組包括早期潛伏梅毒。IL-38病例組：男59例，女79例；年齡15～86歲,平均32.7歲；一期梅毒23例，二期梅毒46例，早期潛伏梅毒69例。

對(duì)照組入選180例。由于蛋白質(zhì)降解的原因，部分標(biāo)本未能檢測(cè)到數(shù)據(jù)。最終納入統(tǒng)計(jì)的例數(shù)：IL-37組為176例、IL-38組為180例。IL-37對(duì)照組：男100例、女76例，年齡17～69歲,平均33.2歲；IL-38對(duì)照組：男95例，女85例，年齡18～69歲,平均33.7歲。

2.2檢測(cè)結(jié)果

2.2.1IL-37、IL-38對(duì)照組和病例組的檢測(cè)結(jié)果見表1。用兩組獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行比較，結(jié)果顯示：IL-37對(duì)照組和病例組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，IL-38 對(duì)照組和病例組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(表1)。

2.2.2對(duì)IL-37、IL-38在一期梅毒、二期梅毒、早期潛伏梅毒3組的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行方差分析比較，結(jié)果顯示：3組IL-37差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而3組IL-38差異則具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(表2)。

2.2.3對(duì)IL-37、IL-38在有癥狀梅毒組和無癥狀梅毒組的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)比較，結(jié)果顯示：IL-37、IL-38在有癥狀組、無癥狀組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表3)。

表1　IL-37和IL-38在梅毒病例組與對(duì)照組的檢測(cè)結(jié)果

表2　IL-37和IL-38在各期梅毒組的檢測(cè)結(jié)果

表3　IL-37和IL-38在有/無癥狀梅毒組的檢測(cè)結(jié)果

3　討論

IL-37是IL-1家族新型的抗炎細(xì)胞因子，具有抗炎和免疫抑制作用[10，11]。1992年Fitzgerard提出了梅毒發(fā)病機(jī)制中Th1/Th2反應(yīng)失衡的學(xué)說：梅毒早期以Th1型介導(dǎo)的反應(yīng)為主，隨著梅毒病程的進(jìn)展逐漸遷延轉(zhuǎn)變?yōu)門h2型介導(dǎo)的反應(yīng)，梅毒螺旋體的清除以Th1細(xì)胞免疫為主，一旦Th1/Th2失衡，向Th2方向漂移，機(jī)體的細(xì)胞免疫將會(huì)受到抑制，造成梅毒病程的遷延。許多國內(nèi)外學(xué)者通過檢測(cè)典型細(xì)胞因子在梅毒外周血的表達(dá)也進(jìn)一步證實(shí)了Th1/Th2反應(yīng)失衡的學(xué)說[12]。

TNF-α作為典型的Th1型細(xì)胞因子，其在早期梅毒外周血中的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照，而IL-37對(duì)TNF-α有很強(qiáng)的抑制力，本研究結(jié)果表明IL-37在早期梅毒外周血中的表達(dá)明顯低于正常對(duì)照，降低了對(duì)Th1的抑制作用，可能與梅毒早期Th1細(xì)胞免疫增強(qiáng)具有相關(guān)性。

IL-38也是IL-1家族的成員，是一種抗炎細(xì)胞因子，通過抑制炎癥因子從而抑制Th17細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。IL-17在早期梅毒外周血中的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照，Th17在早期梅毒的細(xì)胞免疫中發(fā)揮重要作用[13-15]。

我們的研究結(jié)果表明IL-38在早期梅毒外周血中的表達(dá)明顯低于正常對(duì)照，降低了對(duì)Th17以及IL-17的抑制作用，可能與早期梅毒Th17表達(dá)升高具有相關(guān)性。

我們對(duì)早期梅毒不同的分期進(jìn)行了比較。IL-38在一期梅毒、二期梅毒、早期潛伏梅毒間的表達(dá)具有顯著性差異，二期梅毒高于早期潛伏梅毒和一期梅毒。IL-37在一期梅毒、二期梅毒、早期潛伏梅毒間無顯著性差異。推測(cè)二期梅毒患者血清中IL-38免疫抑制功能比一期梅毒更低，對(duì)IL-17表達(dá)的抑制進(jìn)一步減弱。早期梅毒的不同分期之間的免疫反應(yīng)可能存在差異。

以上兩種細(xì)胞因子的試驗(yàn)均未納入晚期梅毒患者。進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量或進(jìn)一步分病期可能會(huì)進(jìn)一步揭示相關(guān)細(xì)胞因子的作用。梅毒的細(xì)胞免疫機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜，這兩種細(xì)胞因子具體以什么方式或通路發(fā)揮作用有待于進(jìn)一步研究。

[1] Peeling RW, Hook EW 3rd. The pathogenesis of syphilis: the Great Mimicker, revisited[J]. J Pathol,2006,208(2):224-232.

[2] Fitzgerald TJ. The Thl/Th2-1ike switch insyphilitic infection: is itdetrimental[J]. Infect Immun,1992,60(9):3475-3479.

[3] Zhu A, Han H, Zhao H, et al. Increased frequencies of Th17 and Th22 cells in the peripheral blood of patients with secondary syphilis[J]. FEMS Immunol Med Microbiol,2012,66(3):299-306.

[4] Boraschi D, Lucchesi D, Hainzl S, et al. IL-37: a new anti-inflammatory cytokine of the IL-1 family[J]. Eur Cytokine Netw,2011,22(3):127-147.

[5] Fan YM , Zou XH, Wu ZH, et al. Analysis of Th1/Th2 and Tc1/Tc2 and Tc1/Tc2 and Tc1/Tc2 balance from peripheral blood in patients with secondary early syph llis[J]. Chin J Sex Transm Infect,2004,4(2):72-77.

[6] Salazar JC, Hazlett KR, Radolf JD. The immune response to infection with treponema pallidum,the stealth pathogen[J]. Microbes Infect,2000,4(11):1133-1134.

[7] Smith DE, Renshaw BR, Ketchem RR, et al. Four new members expand the interleukin-1superfamily[J]. J Biol Chem,2000,275:1169-1175.

[8] Weaver CT, Harrington LE, Mangan PR, et al. Th17: an effector CD4 T cell ties[J]. Immunity,2006,24(6):677-688.

[9] Dinarello CA. Interleukin-1 in the pathogenesis and treatment of inflammatory disease[J]. Blood,2011,117:3720-3732.

[10] Nold MF, Nold-Petry CA, Zeep JA, et al. IL-37 is a fundamental inhi-bitor of innate immunity[J]. Nature Immunology,2010,11:1014-1064.

[11] Busfiled SJ, Comrack CA, Yu G, et al. Identification and gene organization of three novel members of the IL-1 familiy on human Chromosome 2[J]. Genomics,200,66(2):213-216.

[12] Ezquer F, Ezquer M, Contador D, et al. The antidiabetic effect of mesenchymal stem cells is unrelated to their trans differentiation potential but to their capability to restore Th1/Th2 balance and to modify the pancreatic microenvironment[J]. Stem Cell,2012,30(8):1664-1674.

[13] Van de Veerdonk FL, Stoeckman AK, Wu G, et al. IL-38 binds to IL-36 receptor and has biological effects on immune cells simila-r to IL-36 receptor antagonist[J]. Proc NATL Acad Sci USA,2012,109(8):3001-3005.

[14] Barksby HE, Lea SR, Preshaw PW, et al. The expanding fambily of interleukin1 and their role in destructive inflammatory disorders[J]. Clin Exp Immunol,2007,149(2):217-225.

[15] 李秋濤,樊曼云,張秋堂,等.梅毒患者細(xì)胞免疫功能的檢測(cè)[J].中華皮膚科雜志,2002,35(3):183-184.

(收稿：2015-03-11修回：2015-04-08)

Detection of serum level of IL-37 and IL-38 in the patients with early syphilis

ZHANGShengjia,LIFurong,LIUDanxuan,WENJing,LIZhen,XIAOHailu,LIZhongwei,ZHENGRongtao,HOUJianling,TIANHongqing.

1.SchoolofMedicalandLifeScience,UniversityofJinan,Jinan250062,China; 2.ShandongProvincialInstituteofDermatologyandVenereology,Jinan250022,China

TIANHongqing,E-mail:tianhq2006@126.com

Objective: To detect the serum level of IL-37 and IL-38 in the patients with early syphilis. Methods: The level of IL-37 and IL-38 was detected with ELISA in 140 patients with early syphilis and 180 healthy controls. Results: The medians of IL-37 and IL-38 in patients of early syphilis were 14.15 pg/mL and 12.21 pg/mL, which was lower than those of in healthy controls 31.76 pg/mL and 17.09 pg/mL (均P<0.05). Conclusion: The level of IL-37 and IL-38 is lower in the patients with early syphilis, indicating that IL-37 and IL-38 may be involved in the cellular immunity.

early syphilis; interleukin-37; interleukin-38

山東省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：2014GSF118104)

1濟(jì)南大學(xué)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，濟(jì)南，250062

2山東省皮膚病醫(yī)院 山東省皮膚病性病防治研究所,濟(jì)南,250022

田洪青，E-mail：tianhq2006@126.com