王　尉，林　楠，周明強(qiáng)，樂勝鋒，杜　寧，張經(jīng)華

(1.北京市理化分析測(cè)試中心，北京 　100089；2.全國(guó)標(biāo)準(zhǔn)樣品技術(shù)委員會(huì)天然產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)樣品專業(yè)工作組，北京 　100094；3.有機(jī)材料檢測(cè)技術(shù)與質(zhì)量評(píng)價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京　100094)

?

β-煙堿標(biāo)準(zhǔn)樣品研制

王尉1,3，林楠1,3，周明強(qiáng)1,3，樂勝鋒1,3，杜寧1,2,3，張經(jīng)華1,2*

(1.北京市理化分析測(cè)試中心，北京 100089；2.全國(guó)標(biāo)準(zhǔn)樣品技術(shù)委員會(huì)天然產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)樣品專業(yè)工作組，北京 100094；3.有機(jī)材料檢測(cè)技術(shù)與質(zhì)量評(píng)價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100094)

依據(jù)GB/T 15000 標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則，開展了β-煙堿國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)樣品研制工作。采用溶劑提取、萃取、柱色譜、水蒸汽蒸餾等方法制備β-煙堿樣品，通過(guò)UV，IR，MS 和NMR 等方法對(duì)β-煙堿樣品進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，并進(jìn)行均勻性、穩(wěn)定性檢驗(yàn)。采用8 家實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行聯(lián)合定值，對(duì)定值結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。β-煙堿標(biāo)準(zhǔn)樣品的均勻性和穩(wěn)定性良好，定值結(jié)果為99.12%，置信度95%的擴(kuò)展不確定度為0.64%。所制得的β-煙堿樣品滿足標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則的要求，可用于有關(guān)煙草產(chǎn)品中β-煙堿的檢測(cè)，以及相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

β-煙堿；煙草；標(biāo)準(zhǔn)樣品；均勻性；穩(wěn)定性；定值

煙草中約含有50 種生物堿，存在于60 多個(gè)不同品種的煙草中[1]，如煙堿、新煙堿、新煙草堿、降煙等[2-3]。其中煙堿又稱尼古丁，作為煙草中一種特有的生物堿成分，其含量約占煙草生物堿總量的95%，占煙草干重的0.5%～6.0%，是評(píng)價(jià)煙葉品質(zhì)的主要指標(biāo)，也是衡量香煙吃味的主要指標(biāo)[4]。煙堿在自然界中有3種異構(gòu)體，分別為α-煙堿、β-煙堿和γ-煙堿，煙草中主要為β型[5]。

β-煙堿具有十分廣泛的用途，該系列的農(nóng)藥屬植物殺蟲劑，是生產(chǎn)綠色食品的高效殺蟲劑和生物性農(nóng)藥[6-8]。它還廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥工業(yè)，是研制治療心血管[9]和腦部疾病[10]藥物的原料，并具有抗疲勞[11]、抗感染[12]等生理功效。高純度的β-煙堿作為煙草行業(yè)的添加劑，能提高香煙品質(zhì)，制作卷煙代用品[13-14]。

市場(chǎng)上的煙草相關(guān)產(chǎn)品種類繁多，其中β-煙堿含量的檢測(cè)需要其標(biāo)準(zhǔn)樣品作為對(duì)照，且在煙草的相關(guān)研發(fā)中也需標(biāo)準(zhǔn)樣品作為研究對(duì)象。但目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)β-煙堿標(biāo)準(zhǔn)樣品，因此迫切需要開展該標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制工作。本文依據(jù)GB/T 15000 標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則，對(duì)制備得到的高純度β-煙堿進(jìn)行了純度分析、結(jié)構(gòu)確認(rèn)、穩(wěn)定性檢驗(yàn)、均勻性檢驗(yàn)、定值工作，最終申報(bào)獲批成為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)樣品。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑

LC-20A高效液相色譜系統(tǒng)(日本島津公司)，配SPD-M20A檢測(cè)器；GCMS 2010氣相色譜質(zhì)譜儀(日本島津公司)；LC/MSD Trap液相色譜質(zhì)譜儀(美國(guó)安捷倫公司)；UV-2550紫外可見分光光度計(jì)(日本島津公司)；Spectrum400傅立葉變換紅外-近紅外光譜儀(美國(guó)珀金埃爾默公司)；AVANCE 600超導(dǎo)脈沖傅立葉變換核磁共振波譜儀(德國(guó)Bruker公司)。

鹽酸、甲醇、乙酸、氨水、氯仿、無(wú)水硫酸鈉(北京化工廠)；乙腈、乙酸銨(美國(guó)Fisher Scientific公司)；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。煙葉B2F(河北中煙工業(yè)有限責(zé)任公司)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1β-煙堿樣品的制備及分裝將煙葉粉碎至40目，用鹽酸水溶液(pH 3.0)超聲提取3次，料液比為1∶10，每次15 min，合并濾液，減壓濃縮；再用氨水調(diào)至pH>10.0，以氯仿萃取3次，合并有機(jī)相，用鹽酸水溶液(pH 3.0)反萃取3次，合并水相上732型強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹脂，氨水洗脫；然后進(jìn)行水蒸汽常壓蒸餾，鹽酸水溶液回收，回收樣品用氨水調(diào)至pH>10.0，氯仿萃取，去除氯仿后，用無(wú)水硫酸鈉脫水，最終制得β-煙堿樣品。

在相對(duì)獨(dú)立和潔凈空間，將β-煙堿樣品采用1 mL棕色安瓿瓶進(jìn)行充氮分裝。以每瓶200 mg分裝，用十萬(wàn)分之一天平稱量，共100瓶樣品，記為1～100號(hào)。分裝好的樣品瓶置于4 ℃冰箱中長(zhǎng)期保存。

1.2.2純度分析配制濃度為0.5 mg/mL的β-煙堿樣品溶液，采用高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)、峰面積歸一法等方法對(duì)β-煙堿進(jìn)行純度分析。

首先，采用HPLC等度和梯度兩種洗脫方式，并采用HILIC，C18，氨基柱等不同色譜柱，以及全波長(zhǎng)檢測(cè)對(duì)β-煙堿進(jìn)行純度分析。HPLC分析條件為：流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)260 nm；進(jìn)樣量5 μL。

GC-MS分析條件：DB-5ms色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；流速1.2 mL/min；進(jìn)樣口溫度：300 ℃；進(jìn)樣方式：分流 50∶1；升溫程序：40 ℃保持3 min，以35 ℃/min升至180 ℃，再以8 ℃/min升至300 ℃，保持8 min；進(jìn)樣量：1 μL。

β-煙堿純度的測(cè)定：依據(jù)《YC/T 247-2008 煙草及煙草制品 煙堿純度的測(cè)定 硅鎢酸重量法》[15]對(duì)β-煙堿進(jìn)行純度測(cè)定。平行取樣5份，經(jīng)硅鎢酸沉淀、過(guò)濾、稱重，以β-煙堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)算其純度值。

1.2.3結(jié)構(gòu)鑒定UV分析條件：甲醇為溶劑，掃描范圍200～400 nm；IR分析條件：KBr壓片法，掃描范圍650～4 000 cm-1。MS分析條件：電噴霧離子源，采用正離子模式，噴霧器壓力50 psi，脫溶劑氣為氮?dú)猓瑴囟?50 ℃，流量10 L/min。NMR分析條件：溶劑為氘代氯仿(CDCl3)，采集1H NMR和13C NMR譜圖。

1.2.4均勻性、穩(wěn)定性、定值研究依據(jù)GB/T 15000.3—2008《標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則(3)標(biāo)準(zhǔn)樣品：定值的一般原則和統(tǒng)計(jì)方法》[16]開展均勻性、穩(wěn)定性、定值研究工作。

均勻性：通過(guò)隨機(jī)順序重復(fù)測(cè)量的方法，并采用單因素多水平試驗(yàn)方差分析法進(jìn)行純度均勻性檢驗(yàn)。

穩(wěn)定性：對(duì)β-煙堿樣品進(jìn)行4 ℃，12個(gè)月的長(zhǎng)期穩(wěn)定性研究。分別于不同時(shí)間取樣檢測(cè)，采用直線作為經(jīng)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，觀察斜率值是否有顯著變化，預(yù)測(cè)β-煙堿的穩(wěn)定性變化。

定值：采用8家實(shí)驗(yàn)室HPLC峰面積歸一法對(duì)β-煙堿進(jìn)行聯(lián)合定值。HPLC分析條件同“1.2.2 ”HILIC色譜柱等度洗脫條件。分別隨機(jī)取3個(gè)樣品進(jìn)行檢測(cè)，每一樣品平行測(cè)試2次，對(duì)各實(shí)驗(yàn)室的6個(gè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)算β-煙堿標(biāo)準(zhǔn)樣品的標(biāo)準(zhǔn)值和不確定度。

2　結(jié)果與討論

2.1樣品制備

目前，對(duì)于β-煙堿的常用提取方法有水蒸氣蒸餾法、溶劑萃取法、酸/堿浸提法、離子交換樹脂法以及超臨界CO2流體萃取法等[17-19]。但上述方法得到的β-煙堿純度不高。本文通過(guò)優(yōu)化組合提取純化方法，快捷、高效地從煙草中提取分離得到純度大于99%的β-煙堿，為標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制提供了重要參考。

2.1.1樣品提取由于β-煙堿在煙葉中主要以有機(jī)酸鹽的形式存在，所以提取溶劑和pH值對(duì)提取率有重要影響，酸/堿浸提法是最常用的方法。本文利用鹽酸將水提液的pH值調(diào)至3.0，即可對(duì)有機(jī)酸鹽型和游離型β-煙堿進(jìn)行全部的提取。與堿性條件下甲醇提取的方法相比，該方法具有成本低、綠色環(huán)保的特點(diǎn)。同時(shí)采用超聲輔助提取，大大提高了提取效率。

2.1.2β-煙堿的分離純化利用β-煙堿在堿性水相中呈游離態(tài)，易被有機(jī)溶劑萃取的特性，采用氯仿萃取可有效地去除提取溶液中單寧、蛋白質(zhì)、果膠以及大部分有機(jī)酸成分；同時(shí)，在酸性條件下β-煙堿易被水相反萃取，因此經(jīng)3次萃取-反萃取可得到含量為45%左右的鹽酸鹽型β-煙堿的粗提品。為進(jìn)一步提高樣品純度，利用鹽酸鹽型β-煙堿帶正電的性質(zhì)，采用732型強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹脂進(jìn)行吸附，氨水洗脫后，可有效去除樣品中的色素，富集生物堿類成分。通過(guò)水蒸汽常壓蒸餾將低沸點(diǎn)游離型的β-煙堿揮發(fā)，并用鹽酸水溶液回收，去除高沸點(diǎn)成分，可得到純度大于99%的鹽酸鹽型β-煙堿。

在生物堿類成分的分離純化中，所得樣品的形式(鹽或游離型)備受關(guān)注。為了得到游離型β-煙堿，采用氨水調(diào)節(jié)pH值，將鹽酸鹽型β-煙堿樣品轉(zhuǎn)化成游離型，并用氯仿萃取富集。通過(guò)低溫旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除氯仿，無(wú)水硫酸鈉脫水后，可制得淡黃色透明油狀的β-煙堿樣品。

圖1　β-煙堿的三維色譜圖Fig.1　3D chromatogram of nicotine

2.2純度分析

2.2.1高效液相色譜法等度和梯度洗脫均使用Waters Atlantis HILIC(150 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱，流動(dòng)相A為乙腈，B為10 mmol/L乙酸銨(含2%冰醋酸)；其中等度洗脫條件為：0～20 min，72%A；梯度洗脫條件為：0～40 min，90%～60%A。不同色譜柱對(duì)β-煙堿進(jìn)行純度分析的條件分別為：DIKMA Diamonsil(250 mm × 4.6 mm,5 μm)C18色譜柱，流動(dòng)相A為甲醇，B為0.002 5%三乙胺，0～40 min，50%A；Shodeks NH2-40 E(250 mm×4.6 mm,5 μm)氨基柱，流動(dòng)相A為乙腈，B為0.5%磷酸，0～20 min，70%A。通過(guò)以上色譜方法相結(jié)合的方式進(jìn)行純度分析，所得β-煙堿的純度結(jié)果具有較好的一致性。

另外，標(biāo)準(zhǔn)樣品純度分析常用的方法是面積歸一化法，但由于化合物種類不同，其紫外特征吸收波長(zhǎng)也不同，單一的檢測(cè)波長(zhǎng)往往會(huì)忽略雜質(zhì)的存在，因此采用等度洗脫的條件，配備二極管陣列檢測(cè)器，采集了β-煙堿的三維色譜圖(圖1)，除溶劑峰外，其他波長(zhǎng)下無(wú)明顯雜質(zhì)峰出現(xiàn)。

2.2.2氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)樣品中的雜質(zhì)可能存在紫外檢測(cè)器無(wú)響應(yīng)的情況，利用β-煙堿的揮發(fā)性質(zhì)，采用GC-MS法對(duì)該樣品的純度進(jìn)一步確定，GC-MS總離子圖中未發(fā)現(xiàn)明顯雜質(zhì)峰，測(cè)得β-煙堿的純度為99.09%。

2.2.3硅鎢酸重量法利用硅鎢酸與β-煙堿反應(yīng)生成不溶性煙堿硅鎢酸鹽的特點(diǎn)，直接稱重即可準(zhǔn)確計(jì)算β-煙堿的純度。通過(guò)5次純度測(cè)定，得到β-煙堿的平均純度為99.01%。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，硅鎢酸重量法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法的測(cè)定結(jié)果基本一致，證明本文所研制的β-煙堿具有較好的純度，適用于煙草及相關(guān)領(lǐng)域的化學(xué)分析和質(zhì)量控制。

2.3結(jié)構(gòu)確認(rèn)

表1　β-煙堿的1H 和13C NMR測(cè)試結(jié)果Table 1　Results of 1H and 13C NMR spectrograms

2.4均勻性檢驗(yàn)

采用隨機(jī)順序重復(fù)測(cè)量的方法，根據(jù)隨機(jī)數(shù)表，分別抽取10個(gè)樣品進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)。按“1.2.2”純度分析方法，每個(gè)樣品平行檢測(cè)3次，以峰面積百分比讀取樣品的純度值。檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，以F值檢驗(yàn)，確定了β-煙堿樣品的均勻性良好。檢驗(yàn)結(jié)果見表2～3。

表2　均勻性檢驗(yàn)結(jié)果Table 2　Results of homogeneity

表3　均勻性檢驗(yàn)方差分析結(jié)果Table 3　Results of variance analysis for the homogeneity

瓶間標(biāo)準(zhǔn)偏差是瓶間方差的平方根：Sbb=SA=1.36×10-4，均勻性檢驗(yàn)引入的不確定度u均=Sbb=1.36×10-4。

2.5穩(wěn)定性檢驗(yàn)

按“1.2.2”純度分析方法，分別于0，3，6，9，12月檢測(cè)β-煙堿樣品，每個(gè)樣品平行檢測(cè)3次，以峰面積百分比讀取樣品的純度值。穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果見表4。

采用直線作為經(jīng)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，觀察斜率值是否有顯著變化，以此對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品的穩(wěn)定性變化進(jìn)行預(yù)測(cè)。

表4　穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果Table 4　Results of stability

斜率可用下式計(jì)算：

取其平方根s=0.031 6%，與斜率相關(guān)的不確定度用公式計(jì)算：

自由度為n-2和p=0.95(95%置信水平)的分布t因子為3.128,由于|b1|

2.6定值結(jié)果

對(duì)聯(lián)合定值的8家實(shí)驗(yàn)室所采集的測(cè)定結(jié)果，采用Grubbs檢驗(yàn)法進(jìn)行檢驗(yàn)，未發(fā)現(xiàn)異常值。經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，計(jì)算得出β-煙堿標(biāo)準(zhǔn)樣品的標(biāo)準(zhǔn)值和不確定度。定值結(jié)果見表5～6。

表6　定值方差分析結(jié)果Table 6　Results of variance analysis for the certification

制備所得標(biāo)準(zhǔn)樣品定值結(jié)果的不確定度組成如下：均勻性檢驗(yàn)引入的不確定度,穩(wěn)定性檢驗(yàn)引入的不確定度以及多個(gè)實(shí)驗(yàn)室定值引入的不確定度。

在置信概率為95%時(shí)，k=2，則擴(kuò)展不確定度UCRM=2uCRM=0.32%×2=0.64%。

3　結(jié)　論

針對(duì)我國(guó)尚無(wú)β-煙堿國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)樣品的現(xiàn)狀，開展了該標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制工作，成功建立了β-煙堿樣品的制備方法。并依據(jù)GB/T 15000標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則，對(duì)制得的β-煙堿樣品進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)、穩(wěn)定性檢驗(yàn)及定值研究，最終申報(bào)獲批成為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)樣品。

β-煙堿標(biāo)準(zhǔn)樣品的標(biāo)準(zhǔn)值為99.12%，擴(kuò)展不確定度(95%置信區(qū)間)為0.64%。該標(biāo)準(zhǔn)樣品符合GB/T 15000標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則要求，填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)該領(lǐng)域研究的空白，不僅滿足煙草及相關(guān)產(chǎn)品分析檢測(cè)、質(zhì)量控制工作的需求，也為檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可比性以及溯源性提供了技術(shù)支撐。

[1]Rao G H，Zhao M M，Lin W F，Yang X Q.Resour.Sci.(饒國(guó)華，趙謀明，林偉鋒，楊曉泉．資源科學(xué))，2005，27(5)：120-127.

[2]Dong E H，Tan H，Bao N，Yuan X，Ma K,He J L.GuangzhouChem.Ind.(董二慧，譚紅，包娜，袁鑫，馬凱，何錦林．廣州化工)，2012，40(15)：33-35.

[3]Shi J L，Pang T，Li Y，Song Z B，Gao Y L，Wang B W，Song C M.J.Instrum.Anal.(師君麗，逢濤，李勇，宋中邦，高玉龍，王丙武，宋春滿．分析測(cè)試學(xué)報(bào))，2014，33(3)：334-338.

[4]Xue X P，Chen Y，Wang M S，Pan W J，Li J X.J.AnhuiAgric.Sci.(薛小平，陳懿，王茂勝，潘文杰，李繼新．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué))，2008，36(10)：4121-4123.

[5]Ma J B.GuangdongChem.Ind.(馬俊勃．廣東化工)，2011，38(10)：33-35.

[6]Zeng X，Ni J P，Ma Y F，Shi J J，Yan L，Ni L B.Mod.Agrochem.(曾霞，倪玨萍，馬亞芳，施娟娟，嚴(yán)柳，倪龍博．現(xiàn)代農(nóng)藥)，2013，12(6)：1-5.

[7]Lü C J，Zhong B Z，Qian J，Gou Z H，Qin W Q.J.Biosaf.(呂朝軍，鐘寶珠，錢軍，茍志輝，覃偉權(quán)．生物安全學(xué)報(bào))，2013，22(3)：201-205.

[8]Liu J N，Huang H P，Hua J Z，Zhang Y Y，Yao L Y.GuizhouAgric.Sci.(劉佳妮，黃鶴平，華金珠，張瑜瑜，姚麗媛．貴州農(nóng)業(yè)科學(xué))，2015，43(3)：78-81.

[9]Jia B，Xu H P，Zhang R X，Li G R，Liu Y，F(xiàn)u L.Chin.J.Crit.CareMed.(賈寶，徐宏平，張瑞星，李國(guó)榮，劉艷，付莉．中國(guó)急救醫(yī)學(xué))，2013，33(2)：168-170.

[10]Zhang Z N，Zhang G Z.ActaTabacariaSin.(張真娜，張桂治．中國(guó)煙草學(xué)報(bào))，2013，19(6)：114-119.

[11]Hou X D，Lin X Y，Zhang H B，Du Y M，Jiang Y.Chin.TobaccoSci.(侯小東，藺新英，張懷寶，杜詠梅，姜迎.中國(guó)煙草科學(xué))，2014，35(6)：90-92.

[12]Li K，Wu C T.Chin.J.Exp.Surg.(李錕，吳承堂．中華實(shí)驗(yàn)外科雜志)，2015，32(4)：743-744.

[13]Zheng K L，Yu D M.J.ChongqingUniv.(鄭奎玲，余丹梅．重慶大學(xué)學(xué)報(bào))，2004，27(3)：61-64.

[14]Chu Z B，Shui H F，Chen J M.Appl.Chem.Ind.(儲(chǔ)志兵，水恒福，陳建民．應(yīng)用化工)，2007，36(1)：102-104.

[15]YC/T 247-2008.Tobacco and Tobacco Products-Determination of Nicotine Purity-Gravimetric Method Using Tungstosilicic Acid.Tobacco Industry Standards of the People′s Republic of China(煙草及煙草制品 煙堿純度的測(cè)定 硅鎢酸重量法．中華人民共和國(guó)煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)).

[16]GB/T 15000.3-2008.Directives for the Work of Reference Materials Reference(3)-Materials-General and Statistical Principles for Certification.National Standards(3)-of the People's Republic of China(標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則：(3)標(biāo)準(zhǔn)樣品:定值的一般原則和統(tǒng)計(jì)方法.中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)).

[17]Yang Y K，Li X M，Zhou J，Xu L L，Yang T.TobaccoSci.Technol.(楊葉昆，李雪梅，周瑾，徐蘭蘭，楊濤．煙草科技)，2006，1：38-40.

[18]Liu B F，Xiang X K.FineChem.(劉本發(fā)，向興凱．精細(xì)化工)，1998，1：55-57.

[19]Xu X M，Gao K D，Huang Q L.Chem.Adhes.(徐曉沐，高科達(dá)，黃伣麗．化學(xué)與黏合)，2006，1：50-53.

[20]Jeffrey I S，Jaya F,John B，Bruce E W.J.Agric.FoodChem.，1999，47(12)：5133-5145.

Development of Nicotine Certified Reference Material

WANG Wei1,3,LIN Nan1,3,ZHOU Ming-qiang1,3,LE Sheng-feng1,3,DU Ning1,2,3,ZHANG Jing-hua1,2*

(1.Beijing Centre for Physical and Chemical Analysis,Beijing100089,China；2.Specialistic Group on Natural Product of National Technical Committee on Reference Materials,Beijing100094,China；3.Beijing Key Laboralory of Detection Technology & Quality Evaluation of Organic Material,Beijing100094,China)

According to the directives for the work of reference materials GB/T 15000,nicotine certified reference material was prepared.Nicotine was prepared by extraction,column chromatography and steam distillation.Its chemical structure was identified by UV，IR，MS and NMR method.Its homogeneity and stability were systematically checked.A cooperative certification was conducted by 8 laboratories，and the results of certification for nicotine were analyzed.The homogeneity and stability of the nicotine reference material were good,and the certified value was 99.12% with expanded uncertainty of 0.64% in confidence coefficient of 95%.The reference material of nicotine conforms to directives for the work of reference materials,and it could be used for method validation and quality control of regarding products.

nicotine;tobacco;certified reference material;homogeneity;stability;certification

2016-03-28；

2016-04-09

國(guó)家質(zhì)檢總局公益性行業(yè)科研發(fā)展專項(xiàng)(201210209)

張經(jīng)華，博士，研究員，研究方向：天然產(chǎn)物分離純化，Tel：010-58717639，E-mail：wangwei_1217@126.com

分析測(cè)試技術(shù)與標(biāo)準(zhǔn)化

10.3969/j.issn.1004-4957.2016.09.025

O657.63;O629.3

A

1004-4957(2016)09-1203-06