朱尾銀

（福建林業(yè)科技試驗(yàn)中心，福建漳州363600）

濕加松組織培養(yǎng)快繁技術(shù)的研究

朱尾銀

（福建林業(yè)科技試驗(yàn)中心，福建漳州363600）

以半木質(zhì)化穗條莖段為外植體，開展?jié)窦铀山M培快繁關(guān)鍵技術(shù)對(duì)比試驗(yàn)，探討不同的外植體消毒方法、培養(yǎng)基類型、植物激素對(duì)芽的誘導(dǎo)、增殖、分化和生根的影響。結(jié)果表明：滅菌凈浸泡8min+75%乙醇消毒10 s+含吐溫-20的0.1%HgCl2消毒8min，或滅菌凈浸泡8min+75%乙醇消毒15 s+含吐溫-20的0.1%HgCl2消毒6 min，消毒效果最佳；改良MS+0.5mg·L-16-BA+0.8mg·L-1ZT+0.3mg·L-1IBA是最優(yōu)的繼代增殖培養(yǎng)基，增殖倍數(shù)3.2，基部長(zhǎng)出的叢生芽健壯，生長(zhǎng)力強(qiáng)。以1/2改良MS為生根培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基，添加的生長(zhǎng)素濃度組合以0.8mg·L-1IBA+0.1mg·L-1NAA為最佳，生根率可達(dá)36.7%。

濕加松；組織培養(yǎng)；基本培養(yǎng)基；激素；生根率

濕加松（Pinus elliottii×Pinus oaribaea）又名濕加雜交松，澳大利亞研究選育出的優(yōu)良品種，由濕地松與洪都拉斯加勒比松互為父母本的雜交后代［1-3］再經(jīng)雜交而成的二代雜交品種，綜合了雙親的優(yōu)點(diǎn)，雜種優(yōu)勢(shì)極其明顯，樹形圓滿通直，木材纖維長(zhǎng)度和基本密度在二個(gè)親本之間，耐水濕能力、抗風(fēng)與抗病蟲害能力強(qiáng)，生長(zhǎng)迅速，適應(yīng)范圍廣［4-5］，產(chǎn)脂量也遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于親本和馬尾松，是一個(gè)速生、豐產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的優(yōu)良樹種，極具推廣價(jià)值［6-7］。濕加松以全新的松屬中的一員進(jìn)入中國(guó)的市場(chǎng)，對(duì)它的研究較少［8-9］。為保持其優(yōu)良基因型，濕加松主要采用無性繁殖方式進(jìn)行種苗生產(chǎn)。組織培養(yǎng)是迅速擴(kuò)大種苗生產(chǎn)規(guī)模的重要途徑。目前，濕加松組織培養(yǎng)快繁技術(shù)研究取得一定進(jìn)展，但還存在增殖系數(shù)低、胚狀體發(fā)生頻率低、生根困難等問題［10-13］，提高了組培苗生產(chǎn)成本，嚴(yán)重限制了組培技術(shù)在現(xiàn)階段的應(yīng)用［14］。本研究以半木質(zhì)化穗條莖段為外植體，開展?jié)窦铀山M培快繁關(guān)鍵技術(shù)對(duì)比試驗(yàn)，探討不同的外植體消毒方法、培養(yǎng)基類型、植物激素對(duì)芽的誘導(dǎo)、增殖、分化和生根的影響，提高叢生芽的增殖系數(shù)、生根率，對(duì)完善濕加松組培快繁技術(shù)，解決濕加松的種苗規(guī)?；a(chǎn)的瓶頸問題，促進(jìn)濕加松在林業(yè)上的推廣應(yīng)用，具有重要意義。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料來源

從福建省林業(yè)科技試驗(yàn)中心五板橋試驗(yàn)基地濕加松采穗圃選取生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的嫩芽莖段作為外植體。濕加松采穗圃建于2007年。

1.2材料處理與培養(yǎng)條件

從采穗圃采回的幼嫩枝條，用自來水沖洗15min后用洗衣粉浸泡10min，再用自來水沖洗30min。在超凈工作臺(tái)上切成2.0～2.5 cm長(zhǎng)的具潛伏芽的莖段，用無菌水沖洗一次，置工作臺(tái)上進(jìn)行不同消毒措施對(duì)比試驗(yàn)。繼代培養(yǎng)基對(duì)比試驗(yàn)、激素濃度和組合對(duì)比試驗(yàn)、生長(zhǎng)素濃度對(duì)比試驗(yàn)均使用誘導(dǎo)的無菌材料進(jìn)行接種。培養(yǎng)室溫度控制在（24±2）℃，光強(qiáng)為2 000～3 000 Lx，光照時(shí)間為12 h·d-1。

1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1外植體消毒方法的篩選

將濕加松中上部幼嫩莖段預(yù)處理后進(jìn)行消毒處理，消毒程序依次為滅菌凈浸泡后用無菌水清洗3遍，接著75%乙醇消毒，然后再用含吐溫-20的0.1% HgCl2消毒，無菌水洗凈后接種。試驗(yàn)采用滅菌凈（B）、75%乙醇（C）和含吐溫-20的0.1%HgCl2（D）3因子的3個(gè)消毒處理的時(shí)間梯度的正交L9（34）設(shè)計(jì)，共計(jì)9個(gè)組合（見表1），其中消毒時(shí)間梯度，B因子為0、5、8min；C因子水平為10、15、20 s；D因子水平為6、7、8 min。消毒完成后按正常接種程序，接種于MS+ZT（0.8mg·L-1）+IBA（0.2mg·L-1）誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。每組接種50個(gè)，試驗(yàn)重復(fù)3次。接種15 d后調(diào)查污染率，比較消毒效果，篩選最佳消毒方法。

1.3.2繼代培養(yǎng)基的選擇

將誘導(dǎo)的無菌材料分別接種于MS、改良MS、0.5MS、0.3MS、WPM、B5、SH培養(yǎng)基，各培養(yǎng)基里均添加ZT0.8 mg·L-1和IBA0.2 mg·L-1植物激素。各培養(yǎng)基同時(shí)接種50個(gè)，試驗(yàn)重復(fù)3次。培養(yǎng)60 d后，觀察并記錄不定芽形成情況，計(jì)算芽的誘導(dǎo)率和芽的形成能力（感染細(xì)菌、死亡的接種徑段不參與統(tǒng)計(jì)）。

1.3.3激素濃度組合的篩選

濕加松增殖培養(yǎng)激素濃度組合的篩選，采用6-BA（0.3、0.5、0.8 mg·L-1）和ZT（0.5、0.8、1.2 mg·L-1）和IBA（0.1、0.2、0.3 mg·L-1）三因素三水平的正交L9（34）設(shè)計(jì)，共計(jì)9個(gè)組合，基本培養(yǎng)基為改良MS，每組接種50個(gè)，試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3.4生根激素濃度的篩選

生根使用常規(guī)的IBA和NAA組合，采用隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，A因素為IBA（0.5、0.8、1.0 mg·L-1）和B因素NAA（0.05、0.1、0.2mg·L-1），共9個(gè)處理?；九囵B(yǎng)基為1/2改良MS，試驗(yàn)重復(fù)3次。將濕加松叢生芽中2～3 cm高的芽切割成單株，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行不定根誘導(dǎo)，30 d后試驗(yàn)結(jié)果調(diào)查，篩選最佳生根的激素濃度。

1.4數(shù)據(jù)處理

用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。不同外植體消毒方法下的無菌率、存活率情況統(tǒng)計(jì)結(jié)果和繼代培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1，方差分析結(jié)果見表2、表3。激素濃度和組合篩選的試驗(yàn)結(jié)果見表4，生根激素濃度篩選試驗(yàn)結(jié)果見表5。

2　結(jié)果與分析

2.1不同消毒方法對(duì)濕加松外植體污染的影響

2.1.1無菌率的差異分析

從表1可以看出，不同消毒方法的無菌率差異極大，無菌率最低的是B1C1D1組合，最大的是B3C2D1，兩者相差62.0%。表2方差分析結(jié)果表明，B因素3水平間、C因素3水平間差異均具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，D因素3水平間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，區(qū)組間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型誤差具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B、C、D三因素間存在交互作用，各因素水平間的差異不能真正反映因素的主效，所以進(jìn)行處理間多重比較，尋求最優(yōu)水平組合。多重比較結(jié)果見表1。從表1可知，除B3C3D2與B3C1D3間、B2C2D3與B2C1D2間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其它處理組合間均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。外植體消毒處理后的無菌率表現(xiàn)上，最優(yōu)水平組合為

表2　外植體消毒試驗(yàn)結(jié)果方差分析表

表3　不同基本培養(yǎng)基對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果方差分析

2.1.2保存率差異分析

從表1可以看出，不同消毒方法的保存率差異很大。組合B1C1D1、B1C2D2保存率最高，達(dá)到100%，組合B3C3D2的保存率最低，僅為78.0%。表2方差分析結(jié)果表明，表2方差分析結(jié)果表明，B因素3水平間、C因素3水平間差異均具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，D因素3水平間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，區(qū)組間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，模型誤差具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多重比較結(jié)果（表1）表明，B1C1D1、B1C2D2間，B1C3D3、B2C1D2、B2C3D1、B3C1D3間，B2C2D3、B3C2D1間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其它水平組合間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從保存率上看，最優(yōu)水平組合為B1C1D1、B1C2D2。

無菌率衡量的是對(duì)外植體上的細(xì)菌的滅殺效果，無菌率越高，說明滅菌效果越好，但也可能存在滅菌過度，從而殺死外植體。保存率指無感染的外植體中還存活著的外植體的比重，是衡量是否滅菌過度的一個(gè)重要指標(biāo)。保存率低，說明該消毒措施在滅殺細(xì)菌的同時(shí)，對(duì)外植體也產(chǎn)生嚴(yán)重毒害作用。因此，兩指標(biāo)必須綜合考慮。

2.1.3消毒效果差異分析

為了準(zhǔn)確優(yōu)選消毒方案，以無菌率與保存率的乘積（即消毒效果）來作為最終選擇的指標(biāo)。從表1消毒效果統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)可以看出，B3C1D3組合的消毒效果數(shù)據(jù)最高，達(dá)到0.76；B3C2D1組合的消毒效果次之；9個(gè)水平組合中，B1C1D1最低，僅為0.2。表2方差分析結(jié)果表明，B因素3水平間、C因素3水平間的消毒效果差異均具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，D因素3水平間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，區(qū)組間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，模型誤差具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表1中的多重比較結(jié)果表明，除B3C1D3與B3C2D1之間、B3C3D2與B2C3D1之間、B2C1D2與B2C3D1之間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其他水平組合間均具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義或具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。最優(yōu)消毒效果的水平組合為B3C1D3、B3C2D1。

2.2濕加松繼代培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基、激素濃度組合的篩選

2.2.1基本培養(yǎng)基對(duì)平均不定芽數(shù)和不定芽誘導(dǎo)頻率的影響

從表1基本培養(yǎng)基對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果可以看出，不同的基本培養(yǎng)基，在平均不定芽數(shù)、不定芽誘導(dǎo)頻律上，均存在明顯差異，其中，改良MS的平均不定芽數(shù)、不定芽誘導(dǎo)頻率均最高。接種于B5和SH培養(yǎng)基上的外植體，在相同的條件下幾乎不能出芽，外植體生長(zhǎng)50 d后，出現(xiàn)發(fā)黃、頂端枯萎等現(xiàn)象，逐漸失去生長(zhǎng)能力，直至死亡，如圖1（a），圖1（b）。而接種于其它培養(yǎng)基MS、0.5MS、0.3MS上的外植體雖有新芽長(zhǎng)出，但相對(duì)于改良MS培養(yǎng)基上的外植體而言，誘導(dǎo)出的腋芽數(shù)量較少，同時(shí)生長(zhǎng)也較慢。

圖1　在B5（a）和SH（b）培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況

由于平均不定芽數(shù)屬于計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)，不定芽誘導(dǎo)頻率數(shù)據(jù)小于70%，均標(biāo)準(zhǔn)化處理后參與方差分析。表3方差分析結(jié)果表明，基本培養(yǎng)基間在平均不定芽數(shù)、不定芽誘導(dǎo)頻率上，差異均具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表1多重比較結(jié)果表明，在平均不定芽數(shù)上，MS、0.3MS間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，0.3MS、WPM、B5、SH間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其它均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在不定芽誘導(dǎo)頻率上，除0.3MS、B5、SH間不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其它均存在具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。改良MS培養(yǎng)基，在平均不定芽數(shù)、不定芽誘導(dǎo)頻率上，均顯著優(yōu)于其它基本培養(yǎng)基。所以，選擇改良MS培養(yǎng)基為后續(xù)試驗(yàn)的基本培養(yǎng)基。

不定芽形成能力，是不定芽誘導(dǎo)頻率與平均不定芽數(shù)的乘積，作為篩選基本培養(yǎng)基的重要指標(biāo)，更具直觀性。表3方差分析結(jié)果表明，不同的基本培養(yǎng)基間，在不定芽形成能力上，差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表1中多重比較結(jié)果表明，改良MS的不定芽形成能力最好，與其他基本培養(yǎng)基間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，進(jìn)一步驗(yàn)證了改良MS是7種基本培養(yǎng)基中最適合濕加松繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

2.2.2激素濃度組合對(duì)濕加松增殖的影響

圖2　處理L5（a）、L7（b）和L9（c）的濕加松生長(zhǎng)情況

表4　6-BA和ZT、IBA對(duì)濕加松增殖的影響

從表4可以看出，在改良MS中添加不同濃度組合的激素，增殖倍數(shù)差異較大，變動(dòng)浮動(dòng)為1.5～3.7，方差分析結(jié)果（表4）表明，6-BA不同濃度間、ZT不同濃度間的增殖倍數(shù)，差異均具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此確定6-BA、ZT濃度，構(gòu)成最優(yōu)激素濃度組合，對(duì)提高組培效果，降低組培成本，具有重要意義。IBA不同濃度間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。區(qū)組間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而模型誤差具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明模型誤差主要來源于3種激素在不同濃度水平組合下的交互作用，應(yīng)以3種激素的濃度水平組合進(jìn)行多重比較，優(yōu)選水平組合。多重比較結(jié)果見表4。除，L4、L7、L8之間，L1、L2、L3之間不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其它激素濃度組合間均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。L9與L8之間不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，增殖倍數(shù)最大，叢生芽多，但L9組合的叢生芽老葉容易變黃，芽高生長(zhǎng)近乎停滯（見圖2C），L8組合的叢生芽卷曲、黃化，均生長(zhǎng)狀況不正常，顯然不是最優(yōu)組合；L5與L7、L8間增殖倍數(shù)不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但L5的叢生芽從基部長(zhǎng)出，芽粗壯，生長(zhǎng)力強(qiáng)（圖2A），L7卻是基部長(zhǎng)出緊縮的芽團(tuán)。其它激素濃度組合的增殖倍數(shù)均與L5組合間存在具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且叢生芽生長(zhǎng)力不如L5。因此，L5是最優(yōu)激素濃度組合。

綜上所述，改良MS+0.5mg·L-16-BA+0.8mg·L-1ZT+ 0.3mg·L-1IBA是最適合濕加松的繼代增殖培養(yǎng)基。

表5　不同生長(zhǎng)素濃度對(duì)濕加松生根的影響

2.3不同生長(zhǎng)素濃度對(duì)濕加松生根的影響

由表5可知，以1/2改良MS為基本培養(yǎng)基進(jìn)行濕加松生根誘導(dǎo)，隨著不同濃度的IBA、NAA加入，生根率及根特征有很大差異。為探討IBA、NAA對(duì)生根率的影響，進(jìn)行雙因素方差分析，表5方差分析結(jié)果表明，不同的IBA濃度、NAA濃度的生根率差異，均具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，IBA濃度×NAA濃度交互作用，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在試驗(yàn)設(shè)定的9個(gè)濃度組合中，F(xiàn)5、F8間生根率差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，為生根率最高的濃度組合，與其他濃度組合間均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。F8存在出根不整齊問題，F(xiàn)5出根整齊，根條健壯，所以，F(xiàn)5組合，即0.8 mg·L-1IBA+0.1mg·L-1NAA為本試驗(yàn)最優(yōu)生長(zhǎng)素濃度組合。

3　結(jié)論與討論

濕加松幼嫩莖段為外植體進(jìn)行的組織培養(yǎng)，最優(yōu)消毒效果的水平組合為B3C1D3、B3C2D1，即滅菌凈浸泡8min后用無菌水清洗3遍，接著75%乙醇消毒10 s，然后再用含吐溫-20的0.1%HgCl2消毒8min，最后無菌水清洗干凈，或滅菌凈浸泡8min后用無菌水清洗3遍，接著75%乙醇消毒15 s，然后再用含吐溫-20的0.1%HgCl2消毒6 min，最后無菌水清洗干凈。改良MS培養(yǎng)基平均誘導(dǎo)不定芽個(gè)數(shù)2.9個(gè)，不定芽誘導(dǎo)頻率達(dá)到60.7%，不定芽形成能力為1.76，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義優(yōu)于其它基本培養(yǎng)基；以改良MA為繼代培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基時(shí)，激素濃度組合以0.5mg·L-16-BA+0.8 mg·L-1ZT+0.3 mg·L-1IBA為最佳，增殖倍數(shù)3.2，基部長(zhǎng)出的叢生芽健壯，生長(zhǎng)力強(qiáng)。以1/2改良MS為生根培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基，添加的生長(zhǎng)素濃度組合以0.8 mg·L-1IBA+0.1 mg·L-1NAA為最佳，生根率可達(dá)36.7%，根條正常、健壯，無愈傷化跡象。

（1）75%酒精配合0.1%升汞是比較常規(guī)的滅菌方法。75%酒精具有浸潤(rùn)和滅菌的雙重作用，能滲入外植體內(nèi)殺死病菌，但是對(duì)植物組織具毒害作用；0.1% HgCl2對(duì)植物組織也具較明顯的毒害作用。滅菌凈主要成分為三氯異氰脲酸（TCCA），有效氯含量達(dá)18%～21%，是一種強(qiáng)力、廣譜、高效的殺菌劑。它的使用可以大大減少菌的數(shù)量，提高殺菌的效果，對(duì)植物組織的破壞性不明顯。濕加松幼嫩莖段生長(zhǎng)時(shí)間短，內(nèi)生菌少，重點(diǎn)在于滅殺外植體表面細(xì)菌。用75%酒精配合0.1%升汞直接消毒，需要處理較長(zhǎng)時(shí)間才能有效殺滅全部的外植體表面細(xì)菌，但同時(shí)會(huì)導(dǎo)致外植體內(nèi)有機(jī)物溶解過多，部分細(xì)胞被毒害，所以即使消毒過關(guān)了，芽也難萌發(fā)或產(chǎn)生了畸形的芽［15］。從表2可以看出，在無菌率、保存率、消毒效果上，均存在滅菌凈F值＞75%乙醇F值＞0.1%升汞F值，說明在對(duì)無菌率、保存率、消毒效果的影響上，滅菌凈＞75%乙醇＞0.1%升汞。本試驗(yàn)結(jié)果與馬蘭珍等［16］雜交松組織培養(yǎng)中外植體的滅菌方法的研究和常金財(cái)［18］濕加松無性系組培快繁技術(shù)研究結(jié)果一致。本試驗(yàn)先用滅菌凈浸泡，降低75%乙醇消毒、0.1%HgCl2消毒時(shí)間，在達(dá)到滅菌效果的同時(shí)，較大幅度提高了保存率。

（2）濕加松對(duì)大量元素的比例要求比較苛刻，這是造成濕加松組培難的關(guān)鍵性問題。參試的MS、改良MS、0.5MS、0.3MS、WPM、B5、SH等7種培養(yǎng)基中，大量元素含量高的MS不適合，而大量元素比例相同而含量降低的0.5MS和0.3MS，以及木本植物常用的WPM、B5和SH培養(yǎng)基培養(yǎng)效果也不理想。改良MS培養(yǎng)基，突破了常規(guī)的MS大量元素比例，獲得了相對(duì)理想的繼代增殖效果。

（3）繼代增殖培養(yǎng)中，6-BA（0.5 mg·L-1）+ZT（0.8 mg·L-1）+IBA（0.3mg·L-1）為最佳激素水平。6-BA、ZT對(duì)增殖倍數(shù)的影響上，不同濃度水平間差異均具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；F值6-BA（31.77）＞ZT（16.02），6-BA不同濃度對(duì)增殖倍數(shù)的影響大于ZT。IBA濃度對(duì)增殖倍數(shù)的影響不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但由于模型誤差具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，存在不同激素間的交互作用。本試驗(yàn)中，交互作用可能存在于6-BA與ZT間，也可能存在于6-BA與IBA間，或ZT與IBA間，以及6-BA、ZT、IBA三者之間，因此，不能因IBA不同濃度水平間增殖倍數(shù)不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，忽略對(duì)IBA的濃度篩選。本試驗(yàn)首次在濕加松增殖培養(yǎng)中引進(jìn)了ZT，且發(fā)現(xiàn)最合適的濃度水平為0.8 mg·L-1。

（4）NAA、IBA對(duì)濕加松有明顯的促進(jìn)生根作用，不同濃度對(duì)生根率的影響均具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。方利娟［17］在NAA對(duì)雜交松試管苗伸長(zhǎng)生長(zhǎng)的影響研究中也發(fā)現(xiàn)，過高濃度的NAA則導(dǎo)致產(chǎn)生了大量的愈傷組織。本試驗(yàn)中，當(dāng)NAA濃度0.2 mg·L-1時(shí)，無論IBA濃度多少，均基部發(fā)生大量愈傷組織，甚至早期長(zhǎng)出的根也完全再次愈傷化，與方利娟的研究結(jié)論吻合。試驗(yàn)中IBA的F值（16.65）＞NAA的F值（9.47），IBA濃度對(duì)生根率的影響大于NAA。NAA、IBA不同濃度間的交互作用明顯，兩者搭配使用可望獲得更好的生根效果。

本試驗(yàn)以濕加松半木質(zhì)化穗條莖段為外植體，對(duì)濕加松的外植體消毒方法、繼代增殖培養(yǎng)基篩選，以及生根培養(yǎng)基添加的生長(zhǎng)素濃度組合等進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，通過方差分析和多重比較，從試驗(yàn)設(shè)計(jì)中篩選出最優(yōu)的外植體消毒技術(shù)方案、繼代增殖培養(yǎng)基和0.5MS生根培養(yǎng)基的生長(zhǎng)素濃度組合。經(jīng)試驗(yàn)優(yōu)選的濕加松組培技術(shù)方案，外植體消毒效果≥0.74，繼代培養(yǎng)增殖倍數(shù)3.2，達(dá)到較為理想水平，但生根培養(yǎng)中生根率較低，僅36.7%，有待于進(jìn)一步優(yōu)化。

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（責(zé)任編輯：葉麗娜）

Study on Tissue Culture of Pinus elliottii×Pinus caribaea

ZHUWeiyin
（Fujian Forestry Science and Technology Test Center，Zhangzhou，F(xiàn)ujian 363600）

The best explantmaterial is the scion bud stem of half lignification，key technology was developed contrast for tissue culture of Pinus elliottii×Pinus caribaea.Through the different experiment of disifection method，medium type，plant hormone on the induction，proliferation，differentiation and rooting of shoots were studied with semi wood of scion stem segment explants of Pinus elliottii×Pinus caribaea.The results showed that the optimal disinfection method was 8 min for sterilizing net，10 s for 75%alcohol and 8 min for 0.1% HgCl2，or 8 min for sterilizing net，15 s for 75%alcohol and 6min for 0.1%HgCl2.Adventitious buds grew fast and proliferation multiple reached 3.2，when grown in themodified MS adding 0.5 mg·L-16-BA，0.8 mg·L-1ZT and 0.3 mg·L-1IBA.With 1/2 the modified MS added 0.8mg·L-1IBA and 0.1mg·L-1NAA，the rooting effectwas the best，and the rooting ratewas 36.7%.

Pinus elliottii×Pinus caribaea；tissue culture；basicmedium；hormone；rooting rate

S722.347

A

1674-2109（2016）06-0014-07

2016-04-13

朱尾銀（1979-），女，漢族，工程師，主要從事林木和花卉組培研究。