王斌

（西北農(nóng)林科技大學(xué)，陜西楊凌712100）

葡萄原花青素運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑對(duì)運(yùn)動(dòng)員免疫力的調(diào)節(jié)研究

王斌

（西北農(nóng)林科技大學(xué)，陜西楊凌712100）

制備含原花青素的運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑，并選擇20名男女各半的速滑運(yùn)動(dòng)員進(jìn)行功能性分析。所有的運(yùn)動(dòng)員均服用原花青素運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑，并通過(guò)為期10周共5個(gè)階段的訓(xùn)練，我們分析各個(gè)階段運(yùn)動(dòng)員血液中免疫相關(guān)指標(biāo)均出現(xiàn)變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明所有男、女運(yùn)動(dòng)員的體液免疫和細(xì)胞免疫水平均較訓(xùn)練開(kāi)始前明顯增強(qiáng)（P＜0.05），并未出現(xiàn)由于大強(qiáng)度訓(xùn)練而導(dǎo)致的免疫水平下降問(wèn)題。通過(guò)安全性分析，證明含原花青素的運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑具有調(diào)節(jié)免疫水平的功效，并具有一定的安全性。

原花青素；葡萄；體液免疫；細(xì)胞免疫

原花青素（Procyanidins，簡(jiǎn)稱PC）是一大類自然界中代表性的植物聚多酚類混合物，從葡萄、番荔枝、銀杏、松樹(shù)皮、山楂等植物中均可以提?。?］。人類最早從葡萄中提取到較高純度原花青素，對(duì)其成分進(jìn)行研究，表明原花青素主要由兒茶素沒(méi)食子酸、表兒茶素和兒茶素單體組成［2］，同時(shí)近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，以咖啡酸為主的有機(jī)酸也是原花青素的主要成分，它們通過(guò)協(xié)同聚合的方法有機(jī)的聚合在一起，共同發(fā)揮多種生物活性功能［3］。大量研究發(fā)現(xiàn)葡萄原花青素在調(diào)節(jié)免疫力、抗心血管疾病、清除自由基、抗氧化活性、保護(hù)神經(jīng)（元）、抗腫瘤、抗疲勞、抗衰老等方面表現(xiàn)出極佳功效［4］。多年的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練經(jīng)驗(yàn)表明，只有通過(guò)大強(qiáng)度的訓(xùn)練才能對(duì)運(yùn)動(dòng)員機(jī)體產(chǎn)生足夠的刺激，達(dá)到提高運(yùn)動(dòng)比賽成績(jī)的目的［5］。然而，常年累月的進(jìn)行大強(qiáng)度訓(xùn)練，必然對(duì)運(yùn)動(dòng)員的身體產(chǎn)生一定影響，將會(huì)導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)員發(fā)生免疫力水平下降［6］。那么要保持運(yùn)動(dòng)員競(jìng)技能力持續(xù)提高，使運(yùn)動(dòng)員身體狀態(tài)與運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練強(qiáng)度保持一致。因此，除通過(guò)平衡膳食維持營(yíng)養(yǎng)和能量的攝入外，運(yùn)動(dòng)員還需要使用運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑對(duì)機(jī)體進(jìn)行調(diào)節(jié)［7］。在本研究中，我們通過(guò)對(duì)運(yùn)動(dòng)員使用含原花青素運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑，并采用科學(xué)的方式指導(dǎo)運(yùn)動(dòng)員進(jìn)行大強(qiáng)度訓(xùn)練，探討含原花青素運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑對(duì)男女運(yùn)動(dòng)員訓(xùn)練后體液免疫和細(xì)胞免疫水平的影響。

1　材料與方法

1.1材料

取新鮮葡萄進(jìn)行整粒脫水干燥，再進(jìn)脫脂處理。

1.2主要試劑及儀器

離心機(jī)（Allegra X-15R）：美國(guó)貝克曼；旋轉(zhuǎn)干燥儀（K221A）：上海索譜儀器；高效液相色譜（1200）：安捷倫；流式細(xì)胞儀（CantoⅡ）：美國(guó)BD；酶標(biāo)儀（Elx800）：美國(guó)寶特。

流式細(xì)胞儀分析所用試劑：購(gòu)買自美國(guó)BD公司；人類血清IgA、IgG、IgM間接ELISA檢測(cè)設(shè)計(jì)和乙醇等試劑：均為分析純。

1.3葡萄原花青素的提取與純化

首先將葡萄籽進(jìn)行脫脂處理，按照料液比1∶10（g/mL）加入70%乙醇混合后進(jìn)行提取。具體的提取步驟如下：1）室溫提取過(guò)程，每次作用45 min，之后進(jìn)行離心（5 000 r/min）30 min，收集上清液，此步驟重復(fù)3次，將提取液混合后進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)；2）提取液進(jìn)行初步濃縮，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的方式濃縮總體積至100 mL；3）提取液初步純化，采用大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，之后采用50%濃度乙醇洗脫處理；4）純化結(jié)束后進(jìn)行兩步法濃縮，首先使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的方式進(jìn)行將提取液體積控制在50 mL左右，再采用冷凍干燥的方法得到葡萄原花青素干粉；5）采用高效液相色譜對(duì)所得產(chǎn)物進(jìn)行分析，結(jié)果表明純化產(chǎn)物中葡萄原花青素的含量達(dá)到99.5%以上。

1.4含原花青素運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑的制備方法

取原花青素10 mg、淀粉25 mg、磷酸鉀2.1 mg、磷酸二鈉鹽2.2 mg，過(guò)篩去除雜質(zhì)后采用粉碎機(jī)再次粉碎，取粉末充分?jǐn)嚢杌靹颍谷雺浩Ｐ椭羞M(jìn)行壓片處理，使用具有標(biāo)識(shí)的藥瓶進(jìn)行分裝密封，瓶?jī)?nèi)需裝有干燥劑。

1.5研究對(duì)象與運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑補(bǔ)充方案

選擇吉林省男女速滑運(yùn)動(dòng)員20人，入選運(yùn)動(dòng)員的基本情況見(jiàn)表1。

表1　運(yùn)動(dòng)員基本資料Table 1The basic conditions of athletes

所有參與實(shí)驗(yàn)的運(yùn)動(dòng)員開(kāi)始訓(xùn)練后，每日服用含有花青素的運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑3次，早中晚各一次，服用至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

1.6訓(xùn)練方案

運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練方法的設(shè)計(jì)參考文獻(xiàn)［8］，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行修改，見(jiàn)表2。

表2　運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練方案Table 2Exercise training project based on research

1.7測(cè)試指標(biāo)

在訓(xùn)練開(kāi)始后的各個(gè)階段第一天對(duì)所有運(yùn)動(dòng)員進(jìn)行空腹采血，采用流式細(xì)胞儀分析免疫細(xì)胞水平，同時(shí)采用間接ELISA法檢測(cè)血清中免疫相關(guān)因子的表達(dá)水平。

1.8安全性分析

在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行過(guò)程中，進(jìn)行嚴(yán)密監(jiān)控和記錄，避免任何不良反應(yīng)事件發(fā)生，并準(zhǔn)備緊急手段隨時(shí)進(jìn)行救助。

1.9數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料進(jìn)行采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1體液免疫水平檢測(cè)

服用含花青素運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑后，參與實(shí)驗(yàn)的男女運(yùn)動(dòng)員血清中體液免疫水平變化如表3、表4所示。

表3　男運(yùn)動(dòng)員體液免疫水平變化Table 3Changes of indicators of humoral immunity in male athletes atvarious training phrases g/L

表4　女運(yùn)動(dòng)員體液免疫水平變化Table 4Changes of indicators of humoral immunity in female athletes at various training phrases g/L

從結(jié)果可知，參與實(shí)驗(yàn)的男、女運(yùn)動(dòng)員在訓(xùn)練過(guò)程中服用含有原花青素的運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑對(duì)體液免疫的3個(gè)主要指標(biāo)IgM，IgA，IgG表現(xiàn)逐步增強(qiáng)的趨勢(shì)。在準(zhǔn)備階段和第一訓(xùn)練階段體液免疫水平未發(fā)生明顯增強(qiáng)（P＞0.05），隨著訓(xùn)練強(qiáng)度的加大，在訓(xùn)練的第二、第三和訓(xùn)練后休息階段，男、女運(yùn)動(dòng)員的體液免疫水平未發(fā)生下降，較準(zhǔn)備階段出現(xiàn)明顯增強(qiáng)（P＜0.05），差異顯著。

2.2細(xì)胞免疫水平檢測(cè)

服用含花青素運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑后，參與實(shí)驗(yàn)的男女運(yùn)動(dòng)員血清中細(xì)胞免疫水平變化如表5、表6所示。

表5　男運(yùn)動(dòng)員細(xì)胞免疫水平變化Table 5Changes of indicators of cell-mediated immunity in male athletes at various training phrases109/L

表6　女運(yùn)動(dòng)員細(xì)胞免疫水平變化Table 6Changes of indicators of cell-mediated immunity in female athletes at various training phrases109/L

從結(jié)果分析，男、女運(yùn)動(dòng)員的白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的變化趨勢(shì)類似于體液免疫水平，但存在一些區(qū)別。在準(zhǔn)備階段和第一訓(xùn)練階段男女運(yùn)動(dòng)員的細(xì)胞免疫水平未發(fā)生明顯變化，P＞0.05，差異不顯著，而訓(xùn)練的第二階段，訓(xùn)練強(qiáng)度增強(qiáng)后，男女運(yùn)動(dòng)員的細(xì)胞免疫水平出現(xiàn)下降，下降趨勢(shì)顯著，P＜0.05，差異顯著。當(dāng)進(jìn)入訓(xùn)練的第三階段后，運(yùn)動(dòng)員組別實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練強(qiáng)度，細(xì)胞免疫水平也得到明顯提高，當(dāng)進(jìn)入休息階段后，男，女運(yùn)動(dòng)員的細(xì)胞免疫水平較訓(xùn)練準(zhǔn)備階段顯著提高，P＜0.05。

2.3安全性分析

在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的過(guò)程中，所有參與實(shí)驗(yàn)的運(yùn)動(dòng)員均未發(fā)生任何不良反應(yīng)。

3　結(jié)論與討論

大量的藥理、毒理、臨床以及藥物動(dòng)力學(xué)研究表明，葡萄原花青素具有優(yōu)秀的生物活性和無(wú)副作用的特點(diǎn)，已經(jīng)成為風(fēng)靡世界的保健佳品［9］。目前，我國(guó)已經(jīng)開(kāi)始大力發(fā)展葡萄原花青素的應(yīng)用研究，將我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)理論與科學(xué)的保健理論相結(jié)合，多種以葡萄原花青素為主的保健制品已經(jīng)上市［10］。然而，葡萄原花青素在運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑領(lǐng)域的研究進(jìn)展緩慢，由于葡萄原花青素的提取、制備工藝已經(jīng)成熟，為開(kāi)展葡萄原花青素的運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。本研究通過(guò)大孔樹(shù)脂純化葡萄原花青素提取液，達(dá)到純度超過(guò)99.5%的原花青素提取物，以此為基礎(chǔ)制備含有原花青素的運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑。在科學(xué)合理的訓(xùn)練計(jì)劃中，選取20名男女速滑運(yùn)動(dòng)員進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。通過(guò)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們證明服用含有原花青素的運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑后，所有參與實(shí)驗(yàn)的男女運(yùn)動(dòng)員均出現(xiàn)體液免疫和細(xì)胞免疫水平增高的趨勢(shì)，同時(shí)在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，未發(fā)生任何的不良反應(yīng)事件。因此，我們認(rèn)為含原花青素的運(yùn)動(dòng)補(bǔ)劑對(duì)調(diào)節(jié)大強(qiáng)度訓(xùn)練中運(yùn)動(dòng)員的免疫水平具有一定作用，并具有安全性高的特點(diǎn)。

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Research on the Regulating of Grape Procyanidine Sports Supplement on Athlete Immunity

WANG Bin
（Northwest A&F University，Yangling 712100，Shaanxi，China）

Procyanidine was preparation into sprots supplements，and 20 speed skater（half male and half female）were taked function analysis in this research.All athletes were take procyanidine sports supplement，and by five stages training of 10 weeks，the blood immune parameter of each athletes were analyzed in each stage. The experimental results proved that the levels of humoral immunity and cell immunity of all the male and female athletes in training end were enhanced obviously than training start（P＜0.05），the immune level of all athlete were not decline due to intensive training.By security analysis，the procyanidine sports supplements had the effect of regulating immunity levels，and have certain security.

procyanidine；grape；humoralimmunity；cellularimmunity

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.20.043

王斌（1976—），男（漢），講師，碩士，研究方向：體育教學(xué)與管理。

2016-06-22