田瑞敏　楊梅　廖榮瓊　賈惠荔　曾頔　張語　譚茜　孔永　廖桃紅　陳建華Δ

(1.川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院藥理教研室，四川 南充　637100；2.川北醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系，四川 南充　637100)

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比較兩種途徑釆血對比色法測定水楊酸鈉血漿半衰期的影響

田瑞敏1楊梅2廖榮瓊2賈惠荔2曾頔2張語2譚茜2孔永2廖桃紅2陳建華1Δ

(1.川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院藥理教研室，四川 南充637100；2.川北醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系，四川 南充637100)

目的：觀察心臟釆血和頸總動脈釆血對比色法測定家兔水楊酸鈉血漿半衰期的影響。方法：將12只家兔(雌雄不限)分為心臟釆血組和頸總動脈釆血組，經(jīng)耳緣靜脈注射10%水楊酸鈉溶液(2 ml·kg-1)，分別于給藥前、給藥后10 min和40 min釆血，處理血樣，分光光度計(jì)在510 nm下測定血漿水楊酸的光密度值，計(jì)算其半衰期。結(jié)果：心臟釆血組家兔10%水楊酸鈉溶液的半衰期比頸總動脈釆血組明顯延長(P<0.05)，頸總動脈釆血組家兔的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)較心臟釆血組更為穩(wěn)定。結(jié)論：頸總動脈釆血法較心臟釆血法對水楊酸鈉半衰期的測定更為穩(wěn)定。

水楊酸鈉；半衰期；心臟；頸總動脈；比色法

藥物血漿半衰期(或稱消除半衰期，Elimination half-life time，t1/2)是指血漿藥物濃度下降一半所需時(shí)間。它是重要的藥動學(xué)參數(shù)之一，可表明藥物在機(jī)體代謝，排泄的規(guī)律。“水楊酸鈉血漿半衰期的測定”實(shí)驗(yàn)屬于藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)或機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)當(dāng)中的一個(gè)重要內(nèi)容[1]，然而關(guān)于其半衰期的測定結(jié)果各個(gè)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室相差較大。在該實(shí)驗(yàn)操作中，多次、準(zhǔn)確、及時(shí)的采取足量的動物血液是保證實(shí)驗(yàn)成功的重要因素。本文分別采用了心臟釆血和頸總動脈釆血兩種途徑釆血，在檢測方法上采用了比色法，觀察其對水楊酸鈉半衰期測定結(jié)果的影響，為以后該實(shí)驗(yàn)方法的改進(jìn)提供一定依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動物

健康家兔12只(2.5 kg左右，由川北醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心提供)。

1.1.2實(shí)驗(yàn)器材

V1200分光光度計(jì)(上海美普達(dá)儀器有限公司)，離心機(jī)(CENTRIFUGE，MODEL 0406-1)，哺乳動物手術(shù)器械，5 ml注射器及針頭，動脈插管、動脈夾、三通管、紗布、兔臺由川北醫(yī)學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.1.3藥物試劑

10%水楊酸鈉溶液(成都市科龍化工試劑廠生產(chǎn))，10%三氯乙酸溶液(成都市科龍化工試劑廠生產(chǎn))，10%三氯化鐵溶液(成都市科龍化工試劑廠生產(chǎn))，1%戊巴比妥鈉(默克公司生產(chǎn))，1%肝素鈉溶液(成都市科龍化工試劑廠生產(chǎn))和蒸餾水，由川北醫(yī)學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2方法

1.2.1分組與血樣采集

將家兔隨機(jī)數(shù)字單盲法分為兩組，每組6只：心臟釆血組和頸總動脈釆血組；分別將兩組家兔用1%戊巴比妥鈉溶液(3 ml·kg-1)全身麻醉，頸部正中皮膚做5-7 cm縱行切口；將心臟釆血組的家兔用1%肝素鈉溶液(1 ml·kg-1)全身肝素化；將頸總動脈釆血組的家兔的左側(cè)頸總動脈分離出來，用1%肝素鈉溶液(1 ml·kg-1)全身肝素化，然后在頸總動脈上插管；分別自心臟和頸總動脈取血2 ml，置于加了7 ml 10%三氯乙酸的離心管A中；耳緣靜脈注射10%水楊酸鈉溶液后，分別自心臟和頸總動脈于10 min和40 min各取血2 ml置于加了7 ml 10%三氯乙酸的離心管B和C中備用。

1.2.2處理血樣

將各離心管中的血液與三氯乙酸搖勻，以2000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min。準(zhǔn)確吸取離心后的上清液各6 ml 分別置入編號的試管中，每管加10%三氯化鐵溶液0.5 ml，搖勻，顯色。

1.2.3樣品測定

以A管為對照，用分光光度計(jì)在510 nm波長處分別測定B管和C管的光密度值D1和D2。

1.2.4計(jì)算半衰期

根據(jù)公式計(jì)算水楊酸鈉的血漿半衰期值t1/2=0.301t/(lgD1-lgD2)

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2　結(jié)果

心臟和頸總動脈兩種途徑釆血對水楊酸鈉半衰期測定結(jié)果的影響如表1所示，心臟采血組半衰期較頸總動脈釆血組明顯延長(P=0.001)，可見，頸總動脈釆血組的半衰期測定數(shù)據(jù)較心臟釆血組更為穩(wěn)定。

表1　心臟釆血和頸總動脈釆血對藥物半衰期的比較±SD，n=6)

注：與頸總動脈釆血組相比，*P<0.05。

3　討論

水楊酸鈉屬于非甾體類抗炎藥中的水楊酸類，能抑制前列腺素的生物合成，具有解熱、鎮(zhèn)痛和抗炎抗風(fēng)濕作用，其中抗炎抗風(fēng)濕作用較強(qiáng)，曾用于風(fēng)濕熱和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療，因其刺激性大，不良反應(yīng)多，現(xiàn)臨床使用少見。而水楊酸鈉在藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)中卻是一個(gè)重要的藥物，“水楊酸鈉半衰期的測定”實(shí)驗(yàn)是藥理學(xué)中研究藥物藥動學(xué)的一個(gè)重要實(shí)驗(yàn)。目前該實(shí)驗(yàn)半衰期計(jì)算所需測定參數(shù)為不同時(shí)間點(diǎn)血液中的水楊酸鈉的光密度值，多采用比色法[1-4]，但有關(guān)半衰期的測定結(jié)果各實(shí)驗(yàn)室相差較大[2]。

影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一個(gè)重要因素是需要在不同時(shí)間點(diǎn)采集定量的血樣。血樣的采集目前多采用心臟釆血法[1]，也有改良使用兔耳中央動脈取血法[5]，但這兩種方法取血對學(xué)生的技術(shù)要求較高，很難準(zhǔn)時(shí)取出足量血，造成測定誤差。為了縮小由于取血不及時(shí)所致誤差，張團(tuán)笑等[4]采用頸總動脈和頸外靜脈插管釆血法，測定水楊酸鈉的半衰期。

本文中我們分別采取頸總動脈釆血法和心臟釆血法兩種途徑取血，比色法測定水楊酸鈉半衰期，為了避免由于手術(shù)和麻醉所致誤差，兩組采用均在全麻下進(jìn)行，觀察到心臟釆血組半衰期比頸總動脈釆血組明顯延長，頸總動脈釆血組的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)較心臟釆血組更為穩(wěn)定，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示頸總動脈采血時(shí)間容易控制，采血量充足，可多次采血，能滿足實(shí)驗(yàn)要求，縮小實(shí)驗(yàn)誤差。但是相比于心臟采血法，頸總動脈釆血操作較為復(fù)雜，對學(xué)生的動手能力要求較高，該法可以在學(xué)生實(shí)驗(yàn)中探索應(yīng)用。

1鄭茜. 醫(yī)學(xué)機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)[M]. 北京: 科學(xué)出版社, 2013, 113-114.

2張慧芝,李麗芬,李進(jìn)霞,等. 水楊酸鈉血漿半衰期的測定及其意義[J]. 大同醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校學(xué)報(bào), 2004, 11(2): 1-2.

3李姝,李榮,吳紅. 改進(jìn)水楊酸鈉血漿T1/2測定方法提高實(shí)驗(yàn)成功率[J]. 牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2009, 30(5): 90-91.

4張團(tuán)笑,買文麗,牛彩琴,等. 麻醉和手術(shù)對實(shí)驗(yàn)動物血漿藥物半衰期的影響[J]. 四川生理科學(xué)雜志, 2009, 31(1): 19-20.

5范平,陳蓉春. 水楊酸鈉血漿半衰期測定方法的改進(jìn)[J]. 川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 1995, 10(1): 38-39.

Effect of blood samples collected from two ways on the half-life of plasma sodium salicylic by colorimetric method

Tian Rui-min1,Yang Mei2, Liao Rong-qiong2, Jia Hui-li2, Zeng Di2,Zhang Yu2, Tan Xi2, Kong Yong2, Liao Tao-hong2, Chen Jian-hua1△

(1.Department of Pharmacology，North Sichuan Medical College，Sichuan Nanchong 637100;2.Department of Clinical Medicine, North Sichuan Medical College, Sichuan Nanchong 637100)

Objective：To observe the effect of blood samples collected from heart and common carotid artery on the half-life of plasma sodium salicylic in rabbits by colorimetric method. Methods: Twelve rabbitsof either genderwere divided into two groups according to blood collection method: group A: the blood samples were collected from the heart and groupB: the blood samples were collectedfrom the common carotid artery.All rabbits were injected 10% sodium salicylic solution 2 (ml·kg-1)through the ear vein. Blood samples were collected before the administration, 10 and 40 min after the administration respectively from heart and common carotid artery to measure the half-life of plasma salicylic sodium by colorimetric method. Results: The half-life in the groups whose blood samples were collected from heart were significantly longer than those in another groups (P<0.05). The experimental data in the groups whose blood samples were collected from common carotid artery were more stable. Conclusions: The blood samples from common carotid artery are more stable than those from heart on the half-life of plasma sodium salicylic.

Sodium Salicylic; Half-life; Heart; Common carotid artery; Colorimetric method

田瑞敏，女，講師，主要從事藥理學(xué)研究，Email：truimin@126.com。

陳建華，女，職稱，主要從事藥理學(xué)研究，Email：623551832@qq.com。

2016-4-28)