申小強(qiáng)，左玉柱，邸晶美，顧文源，范京惠

(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，保定 071001)

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不同內(nèi)吞方式中的關(guān)鍵因子抗體對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞捕獲豬細(xì)小病毒樣顆粒的影響

申小強(qiáng)，左玉柱*，邸晶美，顧文源，范京惠*

(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，保定 071001)

為了探明豬脾樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)捕獲豬細(xì)小病毒樣顆粒的方式，通過(guò)磁性篩選的方法從豬的脾分離DC，DC與肌動(dòng)蛋白抗體小窩蛋白caveolin-1抗體、豬IgG受體FcγRI(CD64)的抗體及DEC205抗體分別在37 ℃下作用1 h后，再與熒光素FITC標(biāo)記的豬細(xì)小病毒樣顆粒(FITC-PPV-VLPs-E290)在37 ℃下作用1 h，應(yīng)用流式細(xì)胞儀及共聚焦顯微鏡檢測(cè)體外DC對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的捕獲情況。結(jié)果顯示，經(jīng)肌動(dòng)蛋白抗體處理的DC幾乎不能捕獲FITC-PPV-VLPs-E290，經(jīng)caveolin-1抗體處理的DC 對(duì)PPV-VLPs-E290的捕獲效率明顯下降。而CD64 及DEC205抗體則對(duì)DC的捕獲效率無(wú)影響，表明DC對(duì)PPV-VLPs-E290的捕獲依賴(lài)于肌動(dòng)蛋白，與巨胞飲、小窩蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞方式有關(guān)，而與吞噬作用及DEC205依賴(lài)的網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的方式無(wú)關(guān)。

病毒樣顆粒；樹(shù)突狀細(xì)胞；捕獲方式

病毒樣顆粒(virus-like particles，VLPs)是含有某種病毒的一個(gè)或多個(gè)蛋白的空心顆粒，在結(jié)構(gòu)上保留了天然病毒的空間構(gòu)象和誘導(dǎo)中和抗體的抗原表位；且允許外源基因或基因片段插入而形成嵌合型VLPs，并將外源性抗原展示在其表面[1]，既能激發(fā)體液免疫，又能激發(fā)細(xì)胞和黏膜免疫，可作為外源性抗原的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)[2]，來(lái)設(shè)計(jì)攜帶不同抗原表位的嵌合VLPs。對(duì)PPV的相關(guān)研究表明，PPV的VP2核衣殼蛋白基因在體外表達(dá)后，可以自我組裝成VLPs，用其免疫母豬能夠使母豬抵御強(qiáng)毒的攻擊[3]，在 PPVVP2基因的N端插入外源基因(片段)不影響VLPs的形成，且形成的嵌合型VLPs可引起機(jī)體產(chǎn)生同時(shí)針對(duì)外源肽和載體的免疫反應(yīng)，具有雙重免疫效果，國(guó)內(nèi)外學(xué)者利用PPV VP2蛋白基因的這一特點(diǎn)，分別構(gòu)建了攜帶不同抗原表位的豬細(xì)小病毒樣顆粒(PPV-VLPs)，并證實(shí)了這些嵌合PPV-VLPs的良好免疫原性及其作為病毒樣顆粒疫苗的廣闊應(yīng)用前景[4-6]。然而，嵌合型病毒樣顆粒作為外源性抗原被提呈至MHC Ⅰ類(lèi)分子途徑，引發(fā)外源抗原表位特異性CTL反應(yīng)的機(jī)制，目前并不明確。

我們以前的研究已經(jīng)證實(shí)，PPV-VLPs-E290可被豬DC捕獲，并定位于DC的晚期內(nèi)吞體[7]，為了進(jìn)一步探明豬DC捕獲攜帶外源抗原表位的豬細(xì)小病毒樣顆粒的方式，本研究使用不同的抗體對(duì)DC捕獲抗原的可能途徑進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)DC對(duì)PPV-VLPs的捕獲與肌動(dòng)蛋白、巨胞飲及小窩蛋白介導(dǎo)的方式有關(guān)，而與吞噬作用及網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的方式無(wú)關(guān)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)PCR 和ELISA 檢測(cè)，CSFV及PPV核酸及其抗體均為陰性的仔豬。

1.1.2主要試劑Ficoll-Paque PREMIUM 1.084單核細(xì)胞分離液為GE Healthcare Life Science公司產(chǎn)品；anti-porcine CD172 antibody 及anti-porcine CD11R antibody為AbDSerotec公司產(chǎn)品；Rat anti-mouse IgG1 microbeads 及磁性分選器為Miltenyi Biotec產(chǎn)品；anti-caveolin-1 抗體、anti-DEC-205 抗體、anti-CD64 抗體及 anti-actin 抗體均為Abcam產(chǎn)品。

1.2方法

1.2.1DC及FITC-PPV-VLPs-E290的制備豬脾CD172a+CD11R+DC及FITC-PPV-VLPs-E290的制備按照文獻(xiàn)[7]制備方法進(jìn)行。

1.2.2DC對(duì) PPV-VLPs-E290體外攝取效率分析為了確定DC在體外對(duì) PPV-VLPs-E290的攝取效率，將制備的CD172a+CD11R+DC分別與10、20、30、40、50、60 μg 的FITC-PPV-VLPs-E290在37 ℃和0 ℃各孵育15 min、0.5 h、1 h、1.5 h。反應(yīng)結(jié)束后，加入冷的PBS，350 g離心5 min，洗滌細(xì)胞，共洗滌3次，以去除未被攝取的FITC-PPV-VLPs-E290。取一部分細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析，檢測(cè)攝入FITC-PPV-VLPs-E290的DC比例。

1.2.3不同抗體對(duì)DC捕獲 PPV-VLPs-E290的抑制分析未免疫豬的CD172a+CD11R+ DCs，先分別與小窩蛋白(caveolin-1)的抗體(3 μg·mL-1)、DEC-205抗體(2 μg·mL-1)、IgG受體CD64的抗體(5 μg·mL-1)、肌動(dòng)蛋白抗體(2 μg·mL-1)、在37 ℃作用1 h后，加入FITC-PPV-VLPs-E290再孵育1 h，DC細(xì)胞經(jīng)PBS洗滌3次后，一部分用共聚焦顯微鏡觀(guān)察捕獲FITC-PPV-VLPs-E290情況，一部分經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)FITC陽(yáng)性細(xì)胞的比例，同時(shí)設(shè)立同種型抗體處理組及非處理的DCs作為對(duì)照。

2　結(jié)　果

2.1DC 對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的捕獲效率分析

分別用10、20、30、40、50、60 μg的FITC-PPV-VLPs-E290，體外與DC在37 ℃共孵育1 h，流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC的攝取效率。結(jié)果顯示，當(dāng)DC與50 μg的FITC-PPV-VLPs-E290共孵育時(shí)，攝取效率最高(圖1)。

圖1　不同劑量的FITC-PPV-VLPs-E290對(duì)DC的攝取效率影響檢測(cè)Fig.1　Endocytosis ability analysis of DCs to diffrent amount of FITC-PPV-VLPs-E290

分別取與50 μg FITC-PPV-VLPs-E290在37 ℃共孵育15 min、0.5 h、1 h、1.5 h的DC，PBS洗滌后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同孵育時(shí)間對(duì)DC捕獲FITC-PPV-VLPs-E290效率的影響。同時(shí)設(shè)立0 ℃反應(yīng)的DC為對(duì)照。結(jié)果表明，DC在孵育0.5 h時(shí)，對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的攝取率為40%左右，孵育1 h時(shí)，攝取率達(dá)72%左右，之后隨時(shí)間的增加，攝取率增加不明顯(圖2、3)。

2.2抗肌動(dòng)蛋白抗體對(duì)DC內(nèi)吞 PPV-VLPs-E290的抑制分析

抗肌動(dòng)蛋白抗體與DC反應(yīng)后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)及共聚焦顯微鏡觀(guān)察，均顯示與未處理組相比，F(xiàn)ITC陽(yáng)性細(xì)胞的比例明顯下降，幾乎降至空白對(duì)照細(xì)胞水平，表明肌動(dòng)蛋白抗體能?chē)?yán)重抑制DC捕

獲PPV-VLPs-E290的效率(圖4、5)。

圖2　不同作用時(shí)間及溫度對(duì)DC的攝取效率影響檢測(cè)Fig.2　Effect of different reaction time and temperature to endocytosis ability of DCs

圖3　樹(shù)突狀細(xì)胞的內(nèi)吞分析Fig.3　Uptake analysis of DC

A.mock DC細(xì)胞；B.經(jīng)肌動(dòng)蛋白抗體處理DC對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的內(nèi)吞；C.未經(jīng)處理DC對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的內(nèi)吞A.Mock dendritic cells；B.FITC-PPV-VLPs-E290 capture of DC treated by anti-actin antibody；C.FITC-PPV-VLPs-E290 capture of untreated DC圖4　流式細(xì)胞儀檢測(cè)肌動(dòng)蛋白抗體對(duì)DC內(nèi)吞FITC-PPV-VLPs-E290的影響Fig.4　Endocytosis effect of anti-actin antibody detected by flow cytometry

A.DC mock 對(duì)照；B．未經(jīng)處理的DC對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的內(nèi)吞；C.經(jīng)肌動(dòng)蛋白抗體處理DC對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的內(nèi)吞A.Mock dendritic cells；B.FITC-PPV-VLPs-E290 capture of untreated DC；C.FITC-PPV-VLPs-E290 capture of DC treated by anti-actin antibody圖5　共聚焦顯微鏡檢測(cè)肌動(dòng)蛋白抗體對(duì)DC內(nèi)吞FITC-PPV-VLPs-E290的影響Fig.5　Endocytosis effect of anti-actin antibody detected by confocal microscopy

2.3抗DEC-205抗體對(duì)DC內(nèi)吞 PPV-VLPs-E290的抑制分析

DC經(jīng)DEC205抗體處理后，與FITC-PPV-VLPs-E290在37 ℃共孵育1 h，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)及共聚焦顯微鏡觀(guān)察，F(xiàn)ITC陽(yáng)性DC細(xì)胞的比例未發(fā)生明顯改變(圖6、7)。

A.Mock DC細(xì)胞；B.經(jīng)DEC205抗體處理DC對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的內(nèi)吞；C.未經(jīng)處理DC對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的內(nèi)吞A.Mock dendritic cells；B.FITC-PPV-VLPs-E290 capture of DC treated by anti-DEC205 antibody；C.FITC-PPV-VLPs-E290 capture of untreated DC圖6　流式細(xì)胞儀檢測(cè)DEC205抗體對(duì)DC內(nèi)吞FITC-PPV-VLPs-E290的影響Fig.6　Endocytosis effect of anti-DEC205 antibody assessed by Flow cytometry

A.Mock DC細(xì)胞對(duì)照；B.未經(jīng)處理的DC對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的內(nèi)吞；C.經(jīng)DEC205抗體處理的DC對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的內(nèi)吞A.Mock dendritic cells；B.FITC-PPV-VLPs-E290 capture of untreated DC；C.FITC-PPV-VLPs-E290 capture of DC treated by anti-DEC205 antibody圖7　共聚焦顯微鏡檢測(cè)DEC205抗體對(duì)DC內(nèi)吞FITC-PPV-VLPs-E290的影響Fig.7　Endocytosis effect of anti-DEC205 antibody assessed by confocal microscopy

2.4抗caveolin-1抗體對(duì)DC內(nèi)吞 PPV-VLPs-E290的抑制分析

抗caveolin-1抗體與DC反應(yīng)后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)及共聚焦顯微鏡觀(guān)察，均顯示FITC陽(yáng)性細(xì)胞的比例明顯較少。表明caveolin-1抗體能抑制DC內(nèi)吞 PPV-VLPs-E290的效率(圖8、9)。

A.Mock DC細(xì)胞；B.經(jīng)caveolin-1抗體處理DC對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的內(nèi)吞；C.未經(jīng)處理的DC對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的內(nèi)吞A.Mock dendritic cells；B.FITC-PPV-VLPs-E290 capture of DC treated by anti-caveolin-1 antibody；C.FITC-PPV-VLPs-E290 capture of untreated DC圖8　流式檢測(cè)caveolin-1抗體對(duì)DC內(nèi)吞FITC-PPV-VLPs-E290的影響Fig.8　Endocytosis effection of caveolin-1 antibody assessed by Flow cytometry

A.DC mock 對(duì)照；B.未經(jīng)處理的DC對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的內(nèi)吞；C.經(jīng)caveolin-1抗體處理DC對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的內(nèi)吞A.Mock dendritic cells；B.FITC-PPV-VLPs-E290 capture of untreated DC；C.FITC-PPV-VLPs-E290 capture of DC treated by anti-caveolin-1 antibody圖9　共聚焦顯微鏡檢測(cè)caveolin-1抗體對(duì)DC內(nèi)吞FITC-PPV-VLPs-E290的影響Fig.9　Endocytosis effection of anti-caveolin-1 antibody assessed by confocal microscopy

2.5CD64抗體對(duì)DC內(nèi)吞 PPV-VLPs-E290的抑制分析

DC經(jīng)CD64抗體處理后，與FITC-PPV-VLPs-E290在37 ℃共孵育1 h，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)及共聚焦顯微鏡觀(guān)察，F(xiàn)ITC陽(yáng)性DC細(xì)胞的比例均未發(fā)生明顯改變(圖10、11)。

A.mock DC細(xì)胞；B.經(jīng)CD64抗體處理DC對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的內(nèi)吞；C未經(jīng)處理DC對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的內(nèi)吞A.mock dendritic cells；B.FITC-PPV-VLPs-E290 capture of DC treated by anti-CD64 antibody；C.FITC-PPV-VLPs-E290 capture of untreated DC圖10　流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD64抗體對(duì)DC內(nèi)吞FITC-PPV-VLPs-E290的影響Fig.10　Endocytosis effect of anti-CD64 antibody assessed by Flow cytometry

A.DC mock 對(duì)照；B.經(jīng)CD64抗體處理的DC對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的內(nèi)吞；C.未經(jīng)處理的DC對(duì)FITC-PPV-VLPs-E290的內(nèi)吞A.Mock dendritic cells；B.FITC-PPV-VLPs-E290 capture of DC treated by anti-CD64 antibody；C.FITC-PPV-VLPs-E290 capture of untreated DC圖11　共聚焦顯微鏡檢測(cè)抗體受體對(duì)DC內(nèi)吞FITC-PPV-VLPs-E290的影響Fig.11　Endocytosis effect of anti-CD64 antibody assessed by confocal microscopy

3　討　論

樹(shù)突狀細(xì)胞是體內(nèi)的一類(lèi)專(zhuān)職抗原提呈細(xì)胞，它們的功能是捕獲、處理抗原，并將處理后的抗原呈遞給T淋巴細(xì)胞。在樹(shù)突狀細(xì)胞攝取外界抗原物質(zhì)的過(guò)程中，肌動(dòng)蛋白及其調(diào)節(jié)蛋白發(fā)揮了重要作用。肌動(dòng)蛋白聚合，促使細(xì)胞膜內(nèi)化，在吞噬作用和巨胞飲中尤為明顯[8-9]。另外，在受體介導(dǎo)的內(nèi)吞方式中，肌動(dòng)蛋白亦與網(wǎng)格蛋白、及其他蛋白相互作用，促使質(zhì)膜囊泡內(nèi)化[10]。 為了確定豬DC捕獲細(xì)小病毒樣顆粒PPV-VLPs-E290的方式，是否與肌動(dòng)蛋白有關(guān)，本研究首先用抗肌動(dòng)蛋白的抗體與DC在37 ℃作用1 h，然后再與FITC-PPV-VLPs-E290作用，結(jié)果顯示，F(xiàn)ITC陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量與未處理組出現(xiàn)明顯差異。經(jīng)肌動(dòng)蛋白抗體處理的DC幾乎不能捕取FITC-PPV-VLPs-E290。說(shuō)明豬DC對(duì)細(xì)小病毒樣顆粒PPV-VLPs-E290的捕獲與肌動(dòng)蛋白密切相關(guān)。

為了進(jìn)一步明確DC捕獲豬細(xì)小病毒樣顆粒PPV-VLPs-E290的方式，我們首先對(duì)目前了解較為透徹的網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞方式進(jìn)行了鑒定。網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞是一種嚴(yán)格受體依賴(lài)，并需要網(wǎng)格蛋白和 GTPase發(fā)動(dòng)蛋白參與的內(nèi)吞方式[11-12]。在各種不同的受體中，屬于C型凝集素超家族成員的甘露糖受體家族(MR)，是一類(lèi)由細(xì)胞膜經(jīng)網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用而進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部的受體家族。在受體介導(dǎo)的內(nèi)吞過(guò)程中起重要作用[13]。作為其成員之一的DEC-205，分布于腸上皮細(xì)胞、胸腺上皮細(xì)胞、B細(xì)胞、以及樹(shù)突狀細(xì)胞等多種抗原提呈細(xì)胞表面，除了能夠介導(dǎo)抗原提呈細(xì)胞對(duì)抗原物質(zhì)的內(nèi)化外，還能高效介導(dǎo)抗原在抗原提呈細(xì)胞內(nèi)的處理及提呈[14]。降低抗原提呈細(xì)胞表面DEC-205 的表達(dá)，會(huì)導(dǎo)致抗原提呈細(xì)胞對(duì)抗原捕獲和提呈效率的下降[15]。 而一些無(wú)法被體內(nèi)抗原提呈細(xì)胞有效捕獲，并提呈至T細(xì)胞的多肽或小分子抗原，與DEC-205的抗體通過(guò)基因工程或化學(xué)融合技術(shù)結(jié)合后，則可有效激活體內(nèi)的T細(xì)胞，引發(fā)T細(xì)胞免疫反應(yīng)[16，17]，或刺激保護(hù)性T細(xì)胞免疫應(yīng)答[18]。另外，在介導(dǎo)外源性抗原的交叉提呈方面，許多能介導(dǎo)外源性抗原交叉提呈的抗原內(nèi)化受體如MR/CD206及DC-SIGN/CD209 等[19]，交叉提呈抗原的效率亦明顯低于DEC-205[20]。 為了明確豬DC捕獲細(xì)小病毒樣顆粒PPV-VLPs-E290的方式，是否與DEC-205依賴(lài)的網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞方式有關(guān)，本研究使用的DC先用抗DEC-205的抗體處理，然后再與FITC-PPV-VLPs-E290作用，流式細(xì)胞儀及共聚焦顯微鏡檢測(cè)結(jié)果顯示，經(jīng)DEC-205抗體處理后的DC，對(duì)PPV-VLPs-E290的捕獲效率未見(jiàn)明顯變化。說(shuō)明DEC-205依賴(lài)的、網(wǎng)格蛋白包被小窩介導(dǎo)的內(nèi)吞在PPV-VLPs-E290的攝取過(guò)程未起到明顯的作用。

細(xì)胞膜的膜穴樣凹陷(caveolae)介導(dǎo)的內(nèi)吞是樹(shù)突狀細(xì)胞捕獲外界抗原物質(zhì)的另一重要方式[21]，在此過(guò)程中，小窩蛋白(caveolin)尤其是caveolin-1發(fā)揮著了重要作用，常將其作為該捕獲方式的標(biāo)志蛋白。為了確定豬DC捕獲豬細(xì)小病毒樣顆粒PPV-VLPs-E290的方式，是否與caveolin-1介導(dǎo)的方式有關(guān)，DC預(yù)先用抗caveolin-1抗體處理，然后再與FITC-PPV-VLPs-E290作用，結(jié)果顯示，F(xiàn)ITC陽(yáng)性細(xì)胞的比例明顯下降。

吞噬作用依賴(lài)于肌動(dòng)蛋白、發(fā)動(dòng)蛋白以及與細(xì)胞膜受體等位的多價(jià)配體[21-22]。吞噬主要捕獲大于0.5～1 μm的顆粒[23]。除了單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV-1) 和巨型病毒(mimivirus)或人類(lèi)腺病毒(HAdV-C2)被聚集于可溶性的受體，并靶向結(jié)合于Fc受體 CD64外[24-25]，小于0.5 μm的分子主要通過(guò)內(nèi)吞的方式而非吞噬的方式被攝取。為了了解豬細(xì)小病毒樣顆粒PPV-VLPs-E290是否可以通過(guò)Fc受體 CD64介導(dǎo)的吞噬方式進(jìn)入DC，本研究中作者先用抗CD64的抗體處理DC，然后再與FITC-PPV-VLPs-E290作用，結(jié)果顯示，抗CD64的抗體對(duì)DC捕獲病毒樣顆粒FITC-PPV-VLPs-E290的效率沒(méi)有影響。

以上研究結(jié)果表明，DC攝取FITC-PPV-VLPs-E290方式依賴(lài)于肌動(dòng)蛋白，與DEC-205依賴(lài)的網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞及吞噬作用無(wú)關(guān)，而與膜穴樣凹陷介導(dǎo)的內(nèi)吞有關(guān)。 考慮到巨胞飲介導(dǎo)的內(nèi)吞亦依賴(lài)于肌動(dòng)蛋白，而caveolae-1依賴(lài)的膜穴樣凹陷介導(dǎo)的內(nèi)吞方式被抑制后，DC捕獲FITC-PPV-VLPs-E290的效率雖然明顯下降，但并未完全抑制。因此推斷，巨胞飲在DC 捕獲FITC-PPV-VLPs-E290的過(guò)程中亦發(fā)揮了重要作用。但DC是否還可通過(guò)網(wǎng)格蛋白及小窩蛋白(caveolin)非依賴(lài)的其他途徑攝取FITC-PPV-VLPs-E290，有待于進(jìn)一步的研究。

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(編輯白永平)

The Influence of Antibodies against Key Factors of Different Endocytic Pathways on Dendritic Cells Uptake Recombinant Parvovirus-like Particles

SHEN Xiao-qiang，ZUO Yu-zhu*，DI Jing-mei，GU Wen-yuan，F(xiàn)AN Jing-hui*

(CollegeofVeterinaryMedicine，AgriculturalUniversityofHebei，Baoding071001，China)

Recombinant parvovirus-like particles (PPV-VLPs) are particulate exogenous antigens that induce strong CTL response.In order to decipher the mechanisms responsible for CTL activation by such exogenous antigen and the probable endocytic pathways in PPV-VLP capture，we analyzed the influence of different antibodies on dendritic cells (DCs) endocytic uptaking recombinant parvovirus-like particles.The results analyzed by FACStar cytometer and confocal microscopy showed that the PPV-VLPs capture efficiency of spleen DCs pretreated with anti-CD64 and anti-DEC205 antibodies was not affected.However，anti-caveolin-1 antibodies treated DCs was severely reduced.DCs pretreated with anti-actin antibodies were barely to uptake PPV-VLPs.These results showed that the uptake of PPV-VLPs seems to be related to macropinocytosis and caveolae-mediated endocytosis in an actin-dependent pathway，not clathrin-coated pits or phagocytosis.

parvovirus-like particles；dendritic cells；uptake pathways

10.11843/j.issn.0366-6964.2016.09.022

2016-03-09

國(guó)家自然基金資助項(xiàng)目(31101847)

申小強(qiáng)(1989-)，男，河北邯鄲人，碩士生，主要從事動(dòng)物傳染病學(xué)研究

左玉柱，男，副教授，碩導(dǎo)，主要從事動(dòng)物傳染病學(xué)的教學(xué)、科研與社會(huì)服務(wù)工作，E-mail：zuoyuzhu@163.com；范京惠，女，博士，副教授，碩導(dǎo)，主要從事獸醫(yī)微生物與免疫學(xué)的教學(xué)與科研工作，E-mail：jinghui76@163.com

S852.4

A

0366-6964(2016)09-1924-07