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        屏障系統(tǒng)中SPF級(jí)NIH小鼠的飼養(yǎng)與運(yùn)營(yíng)管理

        2016-11-01 20:46:04
        畜牧與飼料科學(xué) 2016年1期
        關(guān)鍵詞:屏障標(biāo)準(zhǔn)化小鼠

        田 攀

        (蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司,甘肅 蘭州 730046)

        屏障系統(tǒng)中SPF級(jí)NIH小鼠的飼養(yǎng)與運(yùn)營(yíng)管理

        田 攀

        (蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司,甘肅 蘭州 730046)

        為建立良好的SPF級(jí)NIH小鼠飼養(yǎng)的規(guī)范化、規(guī)?;a(chǎn)平臺(tái),以蘭州生物制品研究所SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物屏障設(shè)施中的NIH小鼠作為研究對(duì)象,對(duì)屏障系統(tǒng)中SPF級(jí)NIH小鼠的飼養(yǎng)、管理和運(yùn)營(yíng)模式進(jìn)行詳細(xì)闡述。通過科學(xué)的飼養(yǎng)管理和嚴(yán)格的運(yùn)營(yíng)模式,形成了SPF級(jí)NIH小鼠的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)?;a(chǎn),可為標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生產(chǎn)運(yùn)營(yíng)提供理論基礎(chǔ)和參考依據(jù)。

        屏障系統(tǒng);SPF級(jí)NIH小鼠;飼養(yǎng)管理;生產(chǎn)運(yùn)營(yíng)

        隨著醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)領(lǐng)域高新技術(shù)的飛躍發(fā)展,人們對(duì)藥物、生物制劑等的安全性和有效性需求也越來越高。因此,有效的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物評(píng)價(jià)體系已成為生物制品得到國(guó)際認(rèn)可、進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)的重要途徑。目前,國(guó)際上已公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為SPF級(jí)動(dòng)物,并已廣泛標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)和使用[1]。SPF級(jí)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化包括動(dòng)物生產(chǎn)條件標(biāo)準(zhǔn)化、動(dòng)物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)條件標(biāo)準(zhǔn)化,而屏障設(shè)施系統(tǒng)為其標(biāo)準(zhǔn)化提供了最理想的基礎(chǔ)支撐。我國(guó)也逐步實(shí)現(xiàn)了以屏障系統(tǒng)為支撐的SPF級(jí)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn),并開始建立健全各項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)化法規(guī)。蘭州生物制品研究所是一個(gè)從事生物制品研發(fā)和生產(chǎn)的單位,先后建立了多套SPF級(jí)動(dòng)物屏障系統(tǒng),取得了SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)設(shè)施合格證[2],已實(shí)現(xiàn)地鼠、新西蘭家兔、NIH小鼠、昆明(KM)小鼠、BAL/C小鼠、豚鼠等多種SPF級(jí)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化、商品化、社會(huì)化供應(yīng),為科學(xué)研究、教學(xué)、生物制品或藥品鑒定及其他科學(xué)活動(dòng)提供了實(shí)驗(yàn)材料來源。

        國(guó)內(nèi)外關(guān)于SPF級(jí)動(dòng)物屏障系統(tǒng)的建立與管理有許多報(bào)道[2-7],但由于屏障的基礎(chǔ)條件和配套設(shè)施不同,屏障系統(tǒng)周圍環(huán)境因子及服務(wù)對(duì)象不同,SPF級(jí)動(dòng)物的飼養(yǎng)與運(yùn)營(yíng)管理無法套用現(xiàn)有的模式。筆者以蘭州生物制品研究所SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物屏障設(shè)施中的NIH小鼠作為研究對(duì)象,詳細(xì)闡述屏障系統(tǒng)中NIH小鼠的飼養(yǎng)、管理和運(yùn)營(yíng)模式,為標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生產(chǎn)運(yùn)營(yíng)提供理論基礎(chǔ)和參考依據(jù)。

        1 材料與系統(tǒng)

        1.1 SPF級(jí)NIH小鼠SPF級(jí) (Specific Pathogen Free)動(dòng)物又稱無特定病原體動(dòng)物,是指不攜帶特定病原體(細(xì)菌、病毒、寄生蟲),但帶有未知的微生物群的動(dòng)物[1]。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物根據(jù)微生物控制程度分為4大類,其中SPF級(jí)動(dòng)物為分類中的第3等級(jí)(見表1),是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的重要組成部分[8]。該類動(dòng)物通常來源于無菌動(dòng)物,必須飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中,實(shí)行嚴(yán)格的微生物學(xué)控制。由于其不含對(duì)人或動(dòng)物有害的生物因子,排除了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身的傳染病源及寄生蟲,利用其開展科學(xué)研究所得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠,在生物醫(yī)學(xué)各個(gè)研究領(lǐng)域中被廣泛應(yīng)用,是現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)的標(biāo)志,也是國(guó)際公認(rèn)的適用于科研的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

        表1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物控制程度分類

        表2 NIH小鼠的生物學(xué)特性

        表2 NIH小鼠的生物學(xué)特性(續(xù))

        表3 SPF級(jí)NIH小鼠屏障系統(tǒng)主要設(shè)計(jì)參數(shù)

        NIH小鼠 (NIH Mouse)屬哺乳綱嚙齒目鼠科(Muridae)小鼠屬(Musculus),為遠(yuǎn)交群,由美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院(NIH)培育而成,故得名NIH小鼠,于1980年引入我國(guó)。該小鼠具有繁殖力強(qiáng)、產(chǎn)仔成活率高等特性,常用于藥理毒理研究和生物制品的檢定。NIH小鼠的生物學(xué)特性見表2。

        1.2 屏障系統(tǒng)屏障系統(tǒng)(Barrier System)是將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生存的環(huán)境與外界隔離的場(chǎng)所[2]。屏障系統(tǒng)主要通過空調(diào)系統(tǒng)、通風(fēng)系統(tǒng)、供電系統(tǒng)等嚴(yán)格控制系統(tǒng)內(nèi)微生物變化程度,因此屏障系統(tǒng)具有恒溫、恒濕、潔凈等特點(diǎn)。該系統(tǒng)控制參數(shù)主要包括溫度、濕度、照度、氣流、空氣質(zhì)量、壓強(qiáng)等,是目前國(guó)內(nèi)外使用最多也是普遍認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育飼養(yǎng)設(shè)施,一般用于SPF級(jí)動(dòng)物的繁育飼養(yǎng)。

        2 SPF級(jí)NIH小鼠的飼養(yǎng)與管理

        2.1 飼養(yǎng)環(huán)境

        2.1.1 屏障環(huán)境:依據(jù)《GB 14925-2010實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境及設(shè)施》[9],結(jié)合本地氣候特點(diǎn),SPF級(jí) NIH 小鼠屏障系統(tǒng)主要參數(shù)設(shè)計(jì)見表3。

        2.1.2 飼養(yǎng)用品:鼠盒與鼠盒蓋:NIH小鼠飼養(yǎng)盒既要保證小鼠的活動(dòng)空間,又要便于清洗消毒。參照市場(chǎng)銷售的鼠盒規(guī)格并與生產(chǎn)廠家反復(fù)溝通,特制了不易破裂、表面光滑的大、小兩種規(guī)格的塑料鼠盒,小盒(長(zhǎng)×寬×高)規(guī)格為 29 cm×12 cm×19 cm,大盒規(guī)格為46 cm×27 cm×15 cm,鼠盒蓋與鼠盒大小配套,采用直徑為0.2 cm的不銹鋼絲制作,易清洗,耐高溫。盒蓋左邊有飲水管插入口,中間設(shè)置不銹鋼薄片作為隔離擋板,右邊用于放置飼料?;\架:采用不銹鋼板結(jié)合不銹鋼管制作的籠架,可放置4層鼠盒,每層可擺放14個(gè)NIH小鼠盒或4個(gè)NIH大鼠盒,具有足夠的層間距,便于通風(fēng)?;\架可移動(dòng),并易擦拭,可經(jīng)受多種方法消毒滅菌[10]。墊料:墊料應(yīng)滿足價(jià)廉易得、無毒性、無污染、無芳烴類氣味、對(duì)人和動(dòng)物無害、干燥、吸濕性好、保溫性好、易于做窩、無營(yíng)養(yǎng)、不被動(dòng)物食用、易清理、不助長(zhǎng)微生物、不誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生酶、不引起動(dòng)物皮膚與黏膜損傷等特點(diǎn)[8,10]。采用外購(gòu)的純木漿紙質(zhì)墊板作為墊料,規(guī)格為21 cm×12 cm×0.2 cm,既能在NIH小鼠飼養(yǎng)過程中吸附其排泄物,維持鼠盒及NIH小鼠自身的清潔衛(wèi)生,又能降低氨氣濃度,維持適宜的溫度,滿足NIH小鼠生長(zhǎng)繁殖所需的干爽舒適的小環(huán)境。飲水瓶與瓶塞:采用250 mL、500 mL兩種規(guī)格塑料飲水瓶,并配有塑膠瓶塞。瓶塞上方包裹不銹鋼薄片,并插有長(zhǎng)7 cm的不銹鋼飲水管,便于NIH小鼠飲水,又可防止小鼠啃咬瓶塞。

        2.1.3 飼料和飲用水:NIH小鼠飼料為全價(jià)營(yíng)養(yǎng)柱狀飼料,直徑1.5 cm左右,長(zhǎng)3~10 cm,裝入塑料大桶。飼料中含有一定比例的粗纖維,使成型飼料具有一定硬度,以便NIH小鼠磨牙。同時(shí)應(yīng)維持營(yíng)養(yǎng)成分相對(duì)穩(wěn)定,具體營(yíng)養(yǎng)要求參照 《GB 14924.3-2010實(shí)驗(yàn)動(dòng)物配合飼料營(yíng)養(yǎng)成分》[11],并結(jié)合當(dāng)?shù)卦蟻碓粗谱鱏PF級(jí)NIH小鼠飼料以滿足其各種營(yíng)養(yǎng)需求。NIH小鼠常規(guī)營(yíng)養(yǎng)需求見表4。飲用水:NIH小鼠飲用水采用三重過濾水,經(jīng)高溫高壓方法滅菌,放至室溫后喂食小鼠。

        表4 NIH小鼠常規(guī)營(yíng)養(yǎng)需求%

        2.2 飼養(yǎng)管理

        2.2.1 屏障環(huán)境管理:潔凈區(qū)要做好定期清潔消毒工作。飼養(yǎng)間在每次換盒、添加飼料工作結(jié)束后要徹底清掃。用高壓清潔水在儲(chǔ)備間配制消毒液,浸泡專用抹布、拖把,對(duì)門窗、墻壁、地面等按照從上到下、從凈到臟的原則將屏障內(nèi)所有房間進(jìn)行徹底擦拭消毒,每周1次。所用消毒液為0.1%的新潔爾滅,75%酒精,0.05%過氧乙酸,每月更換1種消毒液,防止耐藥細(xì)菌的存在。每個(gè)飼養(yǎng)間、污物走廊、儲(chǔ)備間的清潔用品不得混用。每周在所有工作結(jié)束后用0.2%過氧乙酸對(duì)空氣噴霧消毒,特別注意衛(wèi)生死角,但不能直接近距離噴射NIH小鼠。

        2.2.2 飼養(yǎng)用品管理:每周更換1次鼠盒、鼠盒蓋。飼養(yǎng)人員用不銹鋼鑷子將NIH小鼠挑選至干凈的鼠盒中,將使用過的鼠盒、盒蓋分別羅列放置,連同鼠盒中污物通過污物通道傳出。清洗后放入高壓鍋中高壓滅菌(0.2 MPa,121 ℃,20 min)傳入?;\架:最初經(jīng)酒精噴灑消毒后從污物走廊傳入,在飼養(yǎng)間使用過程中每周用消毒液浸泡過的抹布擦拭干凈,重復(fù)使用。墊料:拆開外購(gòu)墊板包裝,根據(jù)需要量裝入NIH大鼠盒中,通過高壓滅菌進(jìn)入飼養(yǎng)區(qū),在儲(chǔ)備間將墊板按照每個(gè)小鼠盒1片、每個(gè)大鼠盒3片平鋪于鼠盒中,待換盒時(shí)直接使用。墊板為一次性用品,不論被小鼠啃咬程度如何,都不得再重復(fù)使用。

        2.2.3 飼料和飲用水管理:桶裝飼料經(jīng)25 kGy、60Co輻照滅菌,并用酒精噴灑飼料桶,放入傳遞窗,紫外燈照射15~30 min后進(jìn)入潔凈區(qū)域使用。根據(jù)NIH小鼠胃容量小、隨時(shí)多餐采食的習(xí)性和采食量(成年鼠采食量一般為4~7 g/d,幼鼠一般為2~3 g/d),每周用不銹鋼小鏟添加飼料2~3次,空桶傳出,重復(fù)利用。根據(jù)NIH小鼠不同階段的生長(zhǎng)發(fā)育特點(diǎn),應(yīng)有不同的給飼標(biāo)準(zhǔn)。飲用水:將飲水瓶盛裝三重過濾水,排列在不銹鋼絲制作的水框中,經(jīng)高壓滅菌(0.2 MPa,121 ℃,30 min)進(jìn)入潔凈區(qū)儲(chǔ)備間,待溫度降至室溫時(shí)加蓋瓶塞備用。每周一、三、五統(tǒng)一更換。在換水時(shí)應(yīng)常檢查瓶塞,防止漏水造成動(dòng)物溺死或飲水管堵塞致使NIH小鼠嚴(yán)重缺水而相互撕咬或脫水死亡。更換下的飲水瓶連同瓶塞經(jīng)污物走廊傳出,清洗,重復(fù)利用。

        2.2.4 人員管理:科學(xué)地制定人員進(jìn)出屏障系統(tǒng)流程是保障SPF級(jí)NIH小鼠飼養(yǎng)環(huán)境和質(zhì)量一個(gè)重要環(huán)節(jié)。進(jìn)入屏障環(huán)境按照:一更→淋浴間→二更→緩沖間→儲(chǔ)備間→清潔走廊→飼養(yǎng)間的順序。首先進(jìn)入第一更衣室,去掉全部衣物,包括手機(jī)、手表以及飾品等。后進(jìn)入淋浴間,用中性洗發(fā)水和沐浴液清洗頭發(fā)和全身,尤其是面部及手部等暴露在外面的部分。清洗干凈后,用事先準(zhǔn)備好的滅菌毛巾擦干身上的水。進(jìn)入第二更衣室,穿上已備好的滅菌連體工作服和鞋,戴好口罩和乳膠手套。穿戴完畢后照鏡自檢,用75%酒精消毒雙手。后進(jìn)入潔凈區(qū)域的緩沖間,經(jīng)清潔走廊進(jìn)入飼養(yǎng)間。操作完畢后按照飼養(yǎng)間→污物走廊→緩沖間→污物出口的順序走出屏障環(huán)境。進(jìn)入屏障環(huán)境的人員應(yīng)數(shù)量少、頻率低。同時(shí)人員要有愛崗敬業(yè)、做事認(rèn)真仔細(xì)的基本素質(zhì),要具備一定的專業(yè)技術(shù),了解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的習(xí)性、繁殖體系和日常飼養(yǎng)管理,掌握實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物控制的基本知識(shí)和消毒技能,保障在屏障環(huán)境中各種操作順利完成。在屏障內(nèi)工作應(yīng)盡量避免大聲說話,動(dòng)作要輕,不可蹦跳,開關(guān)門要迅速,待第一扇門關(guān)嚴(yán)后方可開啟第二扇門。一切工作完畢后,務(wù)必將所有的門關(guān)閉嚴(yán)密。

        3 SPF級(jí)NIH小鼠的運(yùn)營(yíng)模式

        SPF級(jí)NIH小鼠的運(yùn)營(yíng)模式主要包括NIH小鼠的配種繁殖、離乳飼養(yǎng)、供應(yīng)和留種4個(gè)部分。

        3.1 配種繁殖NIH小鼠繁殖采用一雌一雄放入同一盒中長(zhǎng)期同居飼養(yǎng)。觀察記錄每盒小鼠的生長(zhǎng)繁殖狀況,在相應(yīng)的標(biāo)簽上標(biāo)明出生日期、產(chǎn)仔日期、產(chǎn)仔數(shù)、斷奶日期、離乳仔的數(shù)量等。針對(duì)年老體弱、產(chǎn)仔數(shù)減少、母性較差、吃仔等情況對(duì)NIH小鼠進(jìn)行淘汰處理,并作記錄。母鼠生產(chǎn)約5~8胎即可批量淘汰。后取預(yù)留的成熟種子鼠配種,并作詳細(xì)記錄。

        3.2 離乳待母鼠產(chǎn)仔后21 d將仔鼠離乳,置于大盒中飼養(yǎng)以便供應(yīng)所需體重的小鼠。大盒飼養(yǎng)密度不宜過大,防止鼠盒內(nèi)溫度過高而引起仔鼠死亡。同時(shí)為便于工作人員的操作,根據(jù)小鼠大小不同放置50~80只/盒。要求供應(yīng)的小鼠一般在16~26 g,即離乳后1~2月的小鼠。群養(yǎng)時(shí)體格弱小的小鼠容易采食不足,因此,剛離乳的小鼠最好在鼠盒中撒少許飼料碎末,防止其啃咬不到盒蓋上的飼料而饑餓致死,影響供應(yīng)任務(wù)的完成。

        3.3 供應(yīng)根據(jù)小鼠需求單,由動(dòng)物選發(fā)人員進(jìn)入離乳仔鼠飼養(yǎng)間挑選相應(yīng)體重、性別的小鼠,經(jīng)稱量合格,放入經(jīng)高壓消毒的帶過濾膜的高等級(jí)動(dòng)物專用運(yùn)輸盒,審核無誤后加盒蓋,并用膠帶密封盒口,貼上標(biāo)簽,經(jīng)傳遞窗出屏障系統(tǒng)。

        3.4 留種在超過供應(yīng)體重的同一批仔鼠中挑選體型好、比例勻稱、尾長(zhǎng)、體毛光滑、活動(dòng)有力、肌肉豐滿、反應(yīng)敏捷的相同數(shù)量的雌雄小鼠,分性別單獨(dú)飼養(yǎng)于籠架上作為種子,記錄留種日期和數(shù)量。同一區(qū)域的仔鼠盡量做到留雄不留雌或留雌不留雄,以盡可能避免近親繁殖。留種數(shù)量和頻率自由掌握,但必須做到能夠種子自給、種群自救。

        4 結(jié)語(yǔ)

        SPF級(jí)NIH小鼠設(shè)施環(huán)境控制、飼養(yǎng)管理運(yùn)營(yíng)的標(biāo)準(zhǔn)高、要求嚴(yán),不論哪一個(gè)環(huán)節(jié)不規(guī)范都有可能對(duì)整個(gè)設(shè)施造成污染,進(jìn)而影響NIH小鼠的產(chǎn)量與質(zhì)量。因此,在SPF級(jí)NIH小鼠的飼育管理中,要嚴(yán)格控制飼育、管理、操作等各環(huán)節(jié)的質(zhì)量,使生產(chǎn)條件和動(dòng)物質(zhì)量更加標(biāo)準(zhǔn)化、動(dòng)物管理更加規(guī)范化,從而提高科研質(zhì)量和水平。

        [1]齊長(zhǎng)永.SPF級(jí)大、小鼠生產(chǎn)規(guī)范化管理要素及實(shí)踐[D].南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2012:6.

        [2]秦芝蕾,張新創(chuàng),左謙益.SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物屏障系統(tǒng)的建立及運(yùn)營(yíng)分析[J].當(dāng)代畜牧,2012(3):54-58.

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        [11]全國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì).GB 14924.3-2010實(shí)驗(yàn)動(dòng)物配合飼料營(yíng)養(yǎng)成分[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2011.

        Feeding and Operation Management of SPF NIH Mice in Barrier System

        TIAN Pan
        (Lanzhou Institute of Biological Products Co.,Ltd.,Lanzhou 730046,China)

        The aim of the present study was to provide theoretical foundation and reference for the standardized production and operations of laboratory animals.Taking SPF NIH mice producing barrier facility established in Lanzhou institute of biological products as example,the mode of feeding,management and operation of SPF NIF mice in barrier system were elaborated in this paper.We established a standardized and large-scale production system of SPF NIH mice in a barrier system by scientific management and strict operation.

        barrier system;SPF NIH mice;feeding and management;production and operation

        Q95-331;S865.13

        A文章順序編號(hào):1672-5190(2016)01-0018-04

        2015-12-28

        田攀(1986—),女,助理工程師,碩士研究生,主要從事SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)和管理工作。

        (責(zé)任編輯:趙俊利)

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