斯慶圖娜拉，李詠梅，劉　磊

(鄂爾多斯市中心醫(yī)院，內(nèi)蒙古 鄂爾多斯017000)

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蒙藥五味清濁散和十味黑冰片散抗幽門螺桿菌的實(shí)驗(yàn)研究

斯慶圖娜拉，李詠梅*，劉磊

(鄂爾多斯市中心醫(yī)院，內(nèi)蒙古 鄂爾多斯017000)

近年來(lái)人們已經(jīng)認(rèn)識(shí)到幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)感染與慢性胃炎、消化性潰瘍、胃MALT淋巴瘤、胃癌甚至還與多種胃腸外疾病的發(fā)生密切相關(guān)，所以根除Hp治療也就成為治療或預(yù)防上述疾病的重要手段。但隨著抗生素的廣泛使用，Hp對(duì)抗生素產(chǎn)生耐藥性，嚴(yán)重影響了根除效果[1]。因此希望能成功地推出既有治療、預(yù)防效能，又不增加人群耐藥性的治療方法，成為當(dāng)今國(guó)際范圍內(nèi)該研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)問(wèn)題。

蒙醫(yī)對(duì)于胃腸疾病的診治有豐富的經(jīng)驗(yàn)和很好的療效。臨床上使用蒙藥五味清濁散和十味黑冰片散治療各種胃腸道疾病，其適應(yīng)癥與Hp感染相關(guān)性疾病基本一致。筆者通過(guò)體外抑菌實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)五味清濁散和十味黑冰片具有明顯的抑制Hp作用，現(xiàn)就有關(guān)實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果報(bào)道如下。

1　材料和方法

1.1材料幽門螺桿菌菌株(采集自吉林大學(xué)第一醫(yī)院)，小牛血清(北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司)，電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司)，微需氧罐(Oxid)，幽門螺桿菌培養(yǎng)基(青島海博生物科技有限公司)，五味清濁散和十味黑冰片散(由鄂爾多斯蒙醫(yī)研究所提供)。

1.2Hp菌株的分離培養(yǎng)將消化性胃潰瘍患者的胃部組織置于布氏肉湯培養(yǎng)基中，勻漿處理，用槍頭吸取混液置于培養(yǎng)皿上，L型玻璃棒均勻涂布后，加入微需氧袋，37℃培養(yǎng)5-7天[2，3]，擴(kuò)增培養(yǎng)。

1.3菌株的鑒定經(jīng)革蘭氏染色、尿素酶檢測(cè)、觸酶試驗(yàn)等標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法鑒定Hp菌株[4]。

1.4蒙藥水煎劑的制備分別取五味清濁散和十味黑冰片散各10 g，按比重加10倍的蒸餾水，浸泡30 min后，用文火煎熬30 min過(guò)濾。濾渣照上法同樣處理2次。將3次濾液混合，蒸發(fā)濃縮至1 g/ml，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5蒙藥對(duì)Hp的抑制作用檢測(cè)布氏肉湯培養(yǎng)基將Hp配置成菌懸液，調(diào)整OD值至OD600=0.1-0.2，菌落數(shù)為108cfu/ml。藥物按照要求制成水煎劑，原始濃度為1 mg/ml,稀釋10倍后為篩藥的初始濃度。菌液稀釋到106cfu/ml后，將藥物原始濃度做2倍倍比稀釋，共9個(gè)濃度梯度，分別為10、5、2.5、1.25、0.75、0.38、0.19、0.09、0.05(mg/100 ml)，將藥液與培養(yǎng)基混勻，倒入平板，取菌液30 μl涂板。設(shè)置陰性對(duì)照組，細(xì)菌計(jì)數(shù)。

1.6測(cè)定蒙藥對(duì)Hp的最低抑菌濃度(MIC) 將平板置于暗色、無(wú)反光物體表面上判斷試驗(yàn)終點(diǎn)，以抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度為MIC。

2　結(jié)果

圖1　蒙藥單菌落計(jì)數(shù)

2.2測(cè)定藥物MIC五味清濁散MIC50為0.05-0.1 mg/100 ml,十味黑冰片散MIC50為0.05-0.1 mg/100 ml。兩種藥物的水煎劑對(duì)Hp均有一定的抑菌活性，詳見(jiàn)圖2和圖3。藥物濃度在1 mg/10 ml時(shí)，對(duì)Hp的抑制作用最強(qiáng)。

圖3十味黑冰片散MIC50

圖3十味黑冰片散MIC50

3　討論

目前臨床上使用含兩種抗生素的三聯(lián)療法或加鉍劑的四聯(lián)療法根除Hp治療。但是大劑量抗生素聯(lián)合應(yīng)用不僅對(duì)人體有毒副作用，擾亂胃腸道的生態(tài)平衡，而且還可誘導(dǎo)新的耐藥菌株的出現(xiàn)，引發(fā)人群耐藥性增加等社會(huì)問(wèn)題[5]。近幾年人們開(kāi)始研究天然藥物對(duì)Hp的抑制作用，并取得了較好的成績(jī)[6-8]。但是到目前為止國(guó)內(nèi)外關(guān)于抗Hp的天然藥物的研究只局限于中成藥。尚未有人關(guān)注蒙藥對(duì)Hp的抑制作用。蒙醫(yī)認(rèn)為胃病是因?yàn)楹找馈⑾＠鸬奈富鹚ネ嘶虬瓦_(dá)干黏液阻郁脈道而精華不能正常轉(zhuǎn)化引起。長(zhǎng)期以來(lái)使用五味清濁散和十味黑冰片散為主的蒙藥治療各種胃腸道疾病。五味清濁散由石榴、肉桂、豆蔻、蓽茇、紅花配合組成。具有溫胃益火、化滯除濕、溫通脈道、使精華得以正常轉(zhuǎn)化暢行、揭開(kāi)隱熱掩蔽功效，主治精華不消化、巴達(dá)干黏液阻郁脈道、食物不能轉(zhuǎn)化精華、寒熱合并、胃火衰退等癥狀[9]。有報(bào)道五味清濁散與辛伐他汀聯(lián)用可有協(xié)同降血脂作用[10]。還有實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)五味清濁散可改善脾虛瀉小鼠的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)中惰性炭粒的吞噬能力和綿羊紅細(xì)胞致小鼠溶血素抗體生成能力[11]。十味黑冰片散由黑冰片、肉桂、石榴、豆蔻、金柯子、止瀉子、木鱉子、蓽茇、光明鹽、熊膽等配合而成。具有抑赫依、希拉、助消化功效，主治消化不良、痞、口苦、噯氣、胃脹痛等。本研究選用蒙醫(yī)臨床上最常用的兩種蒙藥，通過(guò)體外試驗(yàn)觀察蒙藥對(duì)Hp抑制效應(yīng)，對(duì)臨床應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

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內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2013MS1177)

1007-4287(2016)09-1546-02

斯慶圖娜拉(1979-),女，蒙古族，副主任醫(yī)師，博士研究生，主要從事消化內(nèi)科疾病的研究。

2015-10-19)