蘇　婭　吳　懇　張　勇　孫　悅　夏儒鴻　張耀忠　邱逸敏

(海南醫(yī)學(xué)院，海南　?？凇?71100)

?

CETP I405V多態(tài)性與海南漢族高血壓的相關(guān)性

蘇婭1吳懇1張勇1孫悅夏儒鴻張耀忠2邱逸敏

(海南醫(yī)學(xué)院，海南?？?71100)

目的探討膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白(CETP)I405V多態(tài)性位點遺傳多態(tài)性與海南漢族人群高血壓的相關(guān)性。方法對218例海南漢族高血壓患者(高血壓組)及301例健康對照(對照組)的基因組DNA進(jìn)行遺傳多態(tài)性檢測，利用SPASS19.0軟件分析I405V基因型分布頻率及等位基因I和V的組間差異。結(jié)果I405V多態(tài)性位點II、IV及VV三種基因型的檢出率分別為17例(7.8%)，197例(90.4%)，4例(1.8%)，基因型分布頻率與對照組相比存在顯著差異(P<0.01)，三種基因型分布頻率組間比較亦具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。等位基因I和V在高血壓組的分布頻率為52.9%和47.1%，與對照組相比存在顯著差異(P<0.01)。結(jié)論I405V多態(tài)性與海南漢族原發(fā)性高血壓密切相關(guān)，基因型Ⅳ可能是危險因素。

膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白；原發(fā)性高血壓；I405V；單核苷酸多態(tài)性

高血壓是遺傳因素與飲食、精神壓力等環(huán)境因素交互作用的結(jié)果，而遺傳因素的作用可以占到50%〔1〕。探尋高血壓易感基因,有助于從遺傳本質(zhì)入手對其治療、預(yù)后、預(yù)防及新藥物的研制找到依據(jù)。許多科研工作者針對高血壓相關(guān)的基因進(jìn)行了諸多研究，例如血管緊張素酶ACE、膽固醇酯逆向轉(zhuǎn)運相關(guān)基因〔2～4〕。膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白(CETP)是血漿高密度脂蛋白的重要成分，在脂類代謝尤其是膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運中起著關(guān)鍵作用。該蛋白的編碼基因定位于16號染色體，全長25 kb，存在超過2 000個單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點，其中I405V、TaqIB等多態(tài)性位點與腦卒中、動脈粥樣硬化、冠心病及長壽的關(guān)聯(lián)性研究已有諸多報道〔5～7〕。目前尚未見I405V與海南漢族高血壓的關(guān)聯(lián)研究。本文擬探討I405V與海南漢族高血壓的關(guān)聯(lián)性。

1　對象與方法

1.1對象高血壓組：2013年1月至2014年12月海南省干部療養(yǎng)院住院治療的高血壓患者218例，年齡55～70歲，診斷標(biāo)準(zhǔn)：在患者未服用抗高血壓藥物的情況下，3次不同日期的測量平均值收縮壓≥140 mmHg和(或)舒張壓≥90 mmHg；或者患者服用抗高血壓藥物，雖然血壓不在上述范圍內(nèi)，均診斷為高血壓患者。對照組：從海南省干部療養(yǎng)院體檢科采集無血緣關(guān)系的海南漢族健康個體301例，年齡55～65歲，納入標(biāo)準(zhǔn)：肝腎功能正常，排除心血管疾病、糖尿病及血液病病史。

1.2研究方法采取SDS裂解法提取血液基因組DNA，從GenBank中獲得人類CETP基因的DNA全序列，用Oligo7.0軟件輔助設(shè)計引物，并委托上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。每個多態(tài)位點均設(shè)立2個PCR檢測管，分別加入寡核苷酸正常和突變引物用于檢測每個多態(tài)位點正常和突變的等位基因。PCR循環(huán)參數(shù)：首先在94°C進(jìn)行2 min的熱變性，隨后進(jìn)行34個循環(huán)反應(yīng)(每個循環(huán)包括94℃30 s，58℃25 s，72℃30 s),最后是72℃ 10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠中電泳，經(jīng)核酸染色劑染色，在UVIband凝膠成像系統(tǒng)(英國UVItec公司產(chǎn)品)中觀察結(jié)果并照相，根據(jù)凝膠結(jié)果判斷基因型。利用測序法判定結(jié)構(gòu)是否準(zhǔn)確。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS19.0軟件行χ2檢驗。

2　結(jié)　果

測序結(jié)果與利用瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果判定的基因型結(jié)果一致，說明我們設(shè)定的實驗體系可靠。如表1所示，高血壓組I405V多態(tài)性位點II、IV及VV三種基因型的檢出例率分別為17例(7.8%)、197例(90.4%)、4例(1.8%)，在對照組中的檢出頻率分別為48例(15.9%)、146例(48.5%)及107例(35.5%)，統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果顯示，基因型分布頻率存在組間差異(P<0.01)。三種基因型分布頻率兩兩比較組間差異亦具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。等位基因I和V在高血壓組的分布頻率為52.9%和47.1%，對照組中為40.1%和59.9%，組間存在顯著差異(P<0.01)。

表1　海南高血壓人群與健康對照的I405V基因型及等位基因分布頻率(n)

3　討　論

CETP是體內(nèi)膽固醇由組織及血液中轉(zhuǎn)運回肝臟的關(guān)鍵蛋白質(zhì)，其結(jié)構(gòu)及功能的改變與膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運密切相關(guān)，該蛋白功能的下降是動脈粥樣硬化形成的重要影響因素，該基因的SNP位點可影響蛋白質(zhì)的表達(dá)及結(jié)構(gòu)。I405V是該蛋白質(zhì)第405位氨基酸的密碼子的第一位堿基存在A和G兩種形式，導(dǎo)致該氨基酸可能存在異亮氨酸或者纈氨酸兩種形式。我們在過去的研究中已經(jīng)證明該位點與動脈粥樣硬化及冠心病的發(fā)生密切相關(guān)〔5〕，而且與海南人群的長壽也關(guān)系密切〔8〕，等位基因I可能對動脈粥樣硬化具有抵抗作用，而對壽命的延長可能具有促進(jìn)作用。

本次研究表明，CETP基因I405V的SNP與高血壓具有密切關(guān)聯(lián)。然而，我們發(fā)現(xiàn)V基因在高血壓組的出現(xiàn)頻率遠(yuǎn)低于對照組，這與我們之前對冠狀動脈粥樣硬化人群及長壽人群的研究結(jié)果是相悖的。根據(jù)我們之前研究的結(jié)果，認(rèn)為等位基因I的存在可能增加膽固醇逆向轉(zhuǎn)運的效率，進(jìn)而起到降低血脂的作用。而高血壓的發(fā)生往往伴隨著高血脂的出現(xiàn)，或者說高血脂亦可導(dǎo)致高血壓，由此推斷等位基因I可能對高血壓的發(fā)生具有抵抗作用。遺憾的是，目前較少有關(guān)于CETP I405V位點與高血壓的關(guān)聯(lián)研究，使得我們沒有參考數(shù)據(jù)。對于該矛盾的進(jìn)一步的確認(rèn)依賴于建立在更大樣本量及更加深入的研究。

1Oguri M，Kato K，Yokoi K，etal.Assessment of a polymorphism of SDK1 with hypertension in Japanese individuals〔J〕.Am J Hypertens，2010;23(1)：70-7.

2李雪峰,蘇秀蘭.原發(fā)性高血壓易感基因多態(tài)性研究進(jìn)展〔J〕.疾病監(jiān)測與控制雜志,2013;7(11);669-71.

3陶曉明，李國江，侯淑琴，等.膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白基因TaqⅠB多態(tài)性與蒙古族原發(fā)性高血壓的相關(guān)性〔J〕.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2010;30(7)：677-82.

4張清，鄧兵，李培龍，等.高血壓患者圍術(shù)期胰島素抵抗與膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白TaqIB多態(tài)性〔J〕.臨床麻醉學(xué)雜志,2007;23(12)：973-6.

5丘洪，張清，鄧兵，等.膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白TaqIB基因多態(tài)性與高血壓病患者心腦血管病事件發(fā)生率的影響〔J〕.中國臨床醫(yī)學(xué)雜志,2009;16(3)：341-3.

6周代鋒，張勇，蔡苗，等.CETP基因I405V突變位點多態(tài)性與冠心病關(guān)系的再探討〔J〕.海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2011;17(10)：1297-9.

7張云霞，周代鋒，王穎，等.CETP基因1405V多態(tài)性與海南百歲人群長壽的相關(guān)性〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2011;31(16):1-3.

8張云霞，周代鋒，焦解歌，等.海南省百歲人群中CETP基因多態(tài)性研究〔J〕.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2011;38(16)：3273-4，3277.

〔2015-11-19修回〕

(編輯徐杰)

海南省自然科學(xué)基金(814364)；海南醫(yī)學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新實驗項目(HYCX2014040)

邱逸敏(1986-)，女，碩士，講師，主要從事生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究。

張耀忠(1968-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事麻醉對血壓影響的相關(guān)研究。

蘇婭(1976-)，女，副主任護(hù)師，主要從事臨床護(hù)理研究。

R54

A

1005-9202(2016)18-4458-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.18.024

1海南省干部療養(yǎng)院2吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院