謝紫薇，譚天林，王璦萍，陳玉瓊，傅昌吉，廖　芳

(四川省成都市新都區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，四川成都610500)

高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法測(cè)定健兒寶顆粒中黃芪甲苷含量

謝紫薇，譚天林，王璦萍，陳玉瓊，傅昌吉，廖芳

(四川省成都市新都區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，四川成都610500)

目的建立測(cè)定健兒寶顆粒中黃芪甲苷含量的高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（HPLC-ELSD）法。方法色譜柱為Inertsil ODS-2柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-水（32∶68），柱溫35℃，流速1.0 mL/min;ELSD參數(shù)，載氣流速2.5 L/min，漂移管溫度95℃。結(jié)果黃芪甲苷進(jìn)樣量在1.004 8～12.057 6 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系（r=0.999 8），平均回收率為101.67%，RSD為1.49%(n=6)。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可作為健兒寶顆粒的含量測(cè)定方法。

高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法;健兒寶顆粒;黃芪甲苷;含量測(cè)定

健兒寶顆粒由黃芪、桂枝、白芍、白術(shù)、大棗、山藥、山楂(焦)等15味中藥組方，是成都市新都區(qū)中醫(yī)醫(yī)院在傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)方基礎(chǔ)上研制開發(fā)的中藥制劑，具有益氣合營(yíng)、健脾開胃等功效，臨床使用多年，療效較好。該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅對(duì)黃芪甲苷進(jìn)行定性鑒別，無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)。黃芪功能甘溫益氣、扶正固表，用量是處方中其他藥味的2～4倍，為方中君藥，故控制黃芪的含量非常重要。黃芪甲苷是黃芪的主要活性成分［1-2］，具有良好的免疫調(diào)節(jié)［3］、抗炎［4-5］、抗病毒［6］、臟器保護(hù)［7-8］、神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用［9-10］，并具有一定的氧自由基清除作用［11］。目前，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)較多應(yīng)用于皂苷類成分分析［12］，多采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)（HPLC-ELSD）法檢測(cè)制劑中黃芪甲苷的含量［13-16］。為更好地控制該制劑的質(zhì)量提供參考，筆者對(duì)此進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　儀器和試藥

1.1儀器

Agilent-1200型高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技有限公司);Alltech ELSD 2000ES型蒸發(fā)光檢測(cè)器(美國(guó)奧泰科技有限公司);TGL-16G型離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);SY7200-D型超聲波清洗儀(上海聲源超聲儀器設(shè)備有限公司);BT125D型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器＜北京＞有限公司);AE 260-S型電子天平(瑞士梅特勒科學(xué)儀器有限公司)。

1.2試藥

健兒寶顆粒(批號(hào)為140901，150501，151101)，陰性樣品均為我院醫(yī)院制劑;黃芪甲苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為200613);乙腈(色譜純，F(xiàn)isher公司，批號(hào)為111760)，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱:Inertsil ODS-2柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);柱溫:35℃;流動(dòng)相:乙腈-水(32∶68);流速: 1.0 mL/min;漂移管溫度:95℃;載氣流速:2.5 L/min。理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計(jì)算不得低于4 000。

2.2溶液制備

稱取黃芪甲苷對(duì)照品25.12 mg，精密稱定，加甲醇溶解并定容至25 mL，即得對(duì)照品溶液(質(zhì)量濃度為1.004 8 g/L)。取供試品(批號(hào)151101)約2 g，磨成細(xì)粉，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，回流提取40 min，放冷，用甲醇補(bǔ)足質(zhì)量，搖勻過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液25 mL，水浴蒸干;殘?jiān)铀?0 mL微熱使溶解，用飽和的正丁醇振搖提取3次，每次30 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次30 mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。按處方取除黃芪外的其他藥材，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):分別吸取2.2項(xiàng)下3種溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，主峰分離度符合要求，且陰性對(duì)照品溶液色譜在黃芪甲苷出峰處無(wú)干擾。色譜圖見圖1。

圖1　高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:分別精密量取對(duì)照品溶液適量，加甲醇稀釋成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液(質(zhì)量濃度分別為0.050 24，0.100 48，0.200 96，0.301 44，0.401 92，0.502 40，0.602 88 g/L)，按擬訂色譜條件，分別進(jìn)樣20 μL。以黃芪甲苷進(jìn)樣量對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)(X)、其峰面積對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=1.618 9X+ 2.769 6，r=0.999 8(n=7)。結(jié)果表明，黃芪甲苷進(jìn)樣量在1.004 8～12.057 6 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一對(duì)照品溶液20 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果見表1。結(jié)果的RSD為1.00%(n=6)，表明該儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品，精密稱取6份，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，按擬訂色譜條件依次測(cè)定。結(jié)果見表1，平均含量為1.221 4 mg/g，RSD為1.66%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10，12 h時(shí)分別進(jìn)樣20 μL，測(cè)定峰面積。結(jié)果見表2，黃芪甲苷含量的RSD為1.02%(n=7)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

表1　精密度及重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

表2　穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的供試品(批號(hào)為150501，含量為1.091 4 mg/g)細(xì)粉6份，每份2 g，分別精密加入質(zhì)量濃度為1.008 g/L的黃芪甲苷對(duì)照品溶液2 mL，再分別精密加入甲醇50 mL，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表3。

表3　黃芪甲苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4樣品含量測(cè)定

取供試品(批號(hào)為140901，150501，151101)3批，按2.2項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，測(cè)定并計(jì)算黃芪甲苷的含量。結(jié)果見表4。

表4　樣品含量測(cè)定結(jié)果

3　討論

3.1指標(biāo)成分選擇

處方中黃芪屬君藥，用量大，測(cè)定黃芪甲苷的含量對(duì)于控制制劑質(zhì)量有較大意義，故選用黃芪甲苷作指標(biāo)成分進(jìn)行含量測(cè)定。

3.2檢測(cè)方法確定

黃芪甲苷為皂苷類成分，在紫外末端有吸收，干擾大，基線不穩(wěn)定。ELSD為質(zhì)量通用型檢測(cè)器，重復(fù)性和穩(wěn)定性均較好，且方法簡(jiǎn)便，易測(cè)定。

提取方式選擇:對(duì)供試品的提取方式(超聲和回流)和提取時(shí)間(30，40，60 min)進(jìn)行考察，采用回流提取比超聲提取的黃芪甲苷含量更高，從時(shí)間和成本的角度考慮，選擇回流提取40 min。

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Content Determination of Astragaloside Ⅳin Jianerbao Granules by HPLC-ELSD

Xie Ziwei，Tan Tianlin，Wang Aiping，Chen Yuqiong，F(xiàn)u Changji，Liao Fang
（Xindu Hospital of Traditional Chinese Medicine，Chengdu，Sichuan，China610500）

ObjectiveTo establish the content determination method of astragalosideⅣin Jianerbao Granules by HPLC-ELSD. MethodsThe Inertsil ODS-2 column（150 mm×4.6 mm，5 μm）was adopted，the mobile phase was acetonitrile-water（32∶68），the column temperature was 35℃，the flow rate was 1.0 mL/min，the gas flow rate was 2.5 L/min，the drift tube temperature was 95℃. ResultsThe injection volume of astragalosideⅣshowed good linear relationship with the peak area in the range of 1.004 8-12.057 6 μg（r=0.999 8），the average recovery rate was 101.67%，RSD=1.49%（n=6）.ConclusionThis method is simple to operate，it is rapid and accurate，and can be used as the quality control method of Jianerbao Granules.

HPLC-ELSD；Jianerbao Granules；astragalosideⅣ；content determination

R284.1;R286.0

A

1006-4931（2016）13-0077-03

謝紫薇(1981-)，女，漢族，碩士研究生，高級(jí)工程師，主要從事中藥制劑質(zhì)量評(píng)價(jià)工作，(電子信箱)657064681@qq.com。

2016-02-06;

2016-03-20）