孫 謙

（泰州市動物疫病預防控制中心，江蘇泰州　225300）

2013～2015年泰州地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體監(jiān)測與分析

孫 謙

（泰州市動物疫病預防控制中心，江蘇泰州225300）

對2013～2015年泰州地區(qū)不同監(jiān)測地點進行了豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）的免疫抗體水平監(jiān)測，應用ELISA方法檢測2343個群體的22219份豬血清學樣品，結果顯示，PRRS免疫抗體合格率均達到80%以上。通過對泰州地區(qū)不同監(jiān)測地點的豬血清免疫抗體監(jiān)測，分析預測豬群中暴發(fā)PRRS的風險，為科學有效防控PRRS提供技術支撐。

豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體監(jiān)測與分析

豬繁殖與呼吸綜合征（又名豬藍耳病，PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的豬的一種高度接觸性傳染病，以母豬流產、死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔豬呼吸困難、敗血癥、高死亡率等為主要特征[1］。2006年，我國爆發(fā)了豬“無名高熱病”的疫情，其死亡率高并且呈多發(fā)態(tài)勢，造成了一定程度的恐慌，嚴重影響畜牧業(yè)生產安全，最終確定了豬藍耳病病毒變異株是豬“無高熱病”主要病原，并定名為高致病性藍耳病[2］。

本試驗應用ELISA方法對2013～2015年泰州地區(qū)2343個群體的豬進行了PRRS免疫抗體水平監(jiān)測，以了解泰州地區(qū)高致病性豬藍耳病疫苗免疫效力，分析豬群中暴發(fā)PRRS的風險。

1　材料和方法

1.1材料

1.1.1檢測樣品 豬繁殖與呼吸綜合征病毒活疫苗免疫28d后，采集2343個不同群體的豬血清樣品22219份，置于冰箱4 ℃保存，備檢。

1.1.2主要儀器與試劑 豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體檢測試劑盒，購置于法國LSI公司；酶標儀購置于Bio-Rad公司；微量移液器；一次性移液器吸頭；96孔U型稀釋板。

1.2方法

1.2.1操作步驟 按試劑盒說明書，采集的待檢豬血清用兩步法進行200倍稀釋，先將待檢血清5μL樣品加入到稀釋板95μl樣品稀釋液中，混勻；取5μl已稀釋好的樣品加入到酶標板45μl樣品稀釋液中，混勻；同時做2份陽性對照和2份陰性對照，每孔50μl添加到酶標板上；封板，37 ℃作用1 h；棄去酶標板中的溶液，酶標板每孔加300 μl洗滌液洗滌3次；用吸水紙拍干；向洗滌好的酶標板每孔加50 μl酶標記物HRPO抗豬的單克隆抗體；封板，37 ℃作用1 h；棄去酶標板中的溶液，酶標板每孔加300 μl洗滌液再洗滌3次；用吸水紙拍干；向洗滌好的酶標板每孔加50 μl底物TMB溶液，室溫20℃～25℃避光作用10 min；最后再向酶標板每孔加終止液 50 μl終止反應，用酶標儀測定OD450值。

1.2.2實驗成立條件 陽性對照OD450值＞0.6，而且陽性對照平均值/陰性對照平均值 ＞4.0。

1.2.3結果判定 按試劑盒給定計算公式進行判定，PRRS免疫抗體IRPC =（樣品OD450值-陰性對照OD450平均值）/（陽性對照OD450平均值-陰性對照OD450平均值）×100，IRPC大于20為陽性，IRPC小于或者等于20為陰性。

2　結果

2.1不同監(jiān)測地點個體檢測結果

對來自種豬場、規(guī)模養(yǎng)殖場、散養(yǎng)戶、屠宰場的22219份血清樣品進行PRRS免疫抗體檢測，結果表明，不同類別的豬場PRRS免疫抗體平均個體合格率為95.7%，種豬場的個體合格率最高，屠宰場的個體合格率最低。詳見表1。

表1　不同監(jiān)測地點PRRS個體免疫抗體檢測結果

2.2不同監(jiān)測地點群體檢測結果

對2343個不同群體的豬血清樣品進行PRRS免疫抗體檢測，結果表明，不同群體的豬場PRRS免疫抗體平均群體合格率為96.2%，種豬場的群體合格率最高，屠宰場的群體合格率最低。詳見表2。

表2　不同監(jiān)測地點PRRS群體免疫抗體檢測結果

2.3不同年份樣品免疫抗體檢測結果

對2013～2015年的豬血清樣品進行PRRS免疫抗體檢測，結果表明，三年間PRRS免疫抗體平均合格率均在95%以上。詳見表3。

表3　不同年份PRRS免疫抗體檢測結果

3　小結

豬繁殖與呼吸綜合征曾在我國多地出現區(qū)域性流行態(tài)勢，豬群中PRRS免疫狀態(tài)水平對于本病的防治具有重要意義，因此PRRS免疫抗體水平是反映豬群免疫狀態(tài)的重要指標[3］。目前，國內外診斷PRRS常用的血清學方法較多，大致分為兩類，一類以N抗原為包被抗原，另一類以膜抗原為包被抗原，最有代表性的為IDEXX公司生產的ELISA抗體檢測試劑盒和LSI公司生產的ELISA抗體檢測試劑盒[4］。本實驗選用LSI公司生產的PRRS抗體檢測試劑盒，用于檢測疫苗免疫后產生抗體水平。LSI公司的PRRS抗體檢測試劑盒操作簡單快速，降低了試驗誤差，穩(wěn)定性好，準確度高，重復性好，適用于大規(guī)模PRRS的抗體檢測。

本研究對不同類別、不同群體、不同年份的豬場PRRS免疫抗體進行監(jiān)測，結果顯示，PRRS免疫抗體合格率均達到80%以上，超過了國家規(guī)定的70%的標準，這說明泰州地區(qū)豬群PRRS疫苗免疫保護情況較好，免疫效果達到較高水平，PRRS防控工作措施開展有效。

泰州地區(qū)種豬場、規(guī)模養(yǎng)殖場、散養(yǎng)戶的PRRS免疫抗體個體合格率和群體合格率均達到了95%以上，而屠宰場的PRRS免疫抗體個體合格率和群體合格率分別為83.0%和82.8%。屠宰場的PRRS免疫抗體合格率降低可能是由于存在免疫失敗、生豬跨區(qū)域調運等方面原因，建議加大屠宰場的生物安全措施，落實消毒滅源，防止疫病發(fā)生傳播，堅持常規(guī)免疫抗體監(jiān)測，加強疫情監(jiān)測，采取綜合措施有效控制PRRS。

[1]殷震，劉景華.動物病毒學[M］.北京：科學出版社，1997： 619-625.

[2]Zhou Y J，Hao X F，Tian Z J，et al.Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome virus emerged in China[J］. Transbound Emerg Dis，2008，55（3-4）：52-64.

[3]彭曉鈴，邵劍挺，盛卓君.2011年新疆地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體分析[J］.中國動物檢疫，2012，29（8）：54-55.

[4]王宏燕.兩種不同ELISA法在檢測豬繁殖與呼吸綜合征抗體中的選擇與應用[J］.現代畜牧獸醫(yī)，2012，（4）：60-62.