侯倩倩，荀其寧，劉志娟，許峰，張文申，劉霞，冀克儉

（中國(guó)兵器工業(yè)集團(tuán)第五三研究所，濟(jì)南 250031）

氣相色譜法測(cè)定黃芪飲片中有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥殘留

侯倩倩，荀其寧，劉志娟，許峰，張文申，劉霞，冀克儉

（中國(guó)兵器工業(yè)集團(tuán)第五三研究所，濟(jì)南 250031）

采用氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器（ECD）測(cè)定黃芪飲片中9種有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥殘留。黃芪飲片樣品以丙酮、二氯甲烷提取，濃硫酸磺化，采用HP-5（30 m×0.32 mm，0.25 μm）色譜柱，氣化室溫度為250℃，檢測(cè)器溫度為300℃。以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算農(nóng)藥含量，加標(biāo)回收率為94.5%～104.4%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7%～2.7%，檢出限為0.061～0.175 ng/mL。該方法簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定、可靠，可用于黃芪飲片中9種有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥殘留的測(cè)定。

氣相色譜法；ECD；有機(jī)氯農(nóng)藥；黃芪飲片

中藥的農(nóng)藥殘留問(wèn)題嚴(yán)重阻礙了我國(guó)中藥走向國(guó)際市場(chǎng)，建立有效的農(nóng)藥殘留量測(cè)定方法是規(guī)范中藥材種植和管理的重要舉措。有機(jī)氯農(nóng)藥使用歷史長(zhǎng)，用量大，殘效期長(zhǎng)，易積蓄，造成慢性中毒，對(duì)人體危害極大。盡管我國(guó)已在1983年禁止使用六六六、滴滴涕等有機(jī)氯農(nóng)藥，但由于藥材的種植期較長(zhǎng)，目前在中藥材中仍有檢出［1-6］。

黃芪為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，味甘而性微溫，具有健脾補(bǔ)中、清熱燥濕、補(bǔ)氣固表、利水消腫、脫毒排膿、斂瘡生肌等功效，臨床應(yīng)用廣泛［7-11］。2010年版《中國(guó)藥典》一部（附錄ⅨQ農(nóng)藥殘留量測(cè)定法）有機(jī)氯農(nóng)藥殘留采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干溶劑進(jìn)行處理。筆者比較了旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀和氮?dú)獯蹈煞▋煞N溶液蒸干的方法，結(jié)果顯示兩者的提取效果沒(méi)有明顯差別，而氮?dú)獯蹈煽焖?、?jiǎn)單，故選擇此法處理樣品，在優(yōu)化色譜條件后測(cè)定了黃芪中9種有機(jī)氯農(nóng)藥的殘留［12-15］。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：Agilent 7890A 型，配N(xiāo)i-ECD電子捕獲檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫科技有限公司；

電子天平：ABS135-S型，瑞士梅特勒-托利多公司；

超聲波清洗器：KQ5200型，昆山市超聲儀器有限公司；

離心沉淀機(jī)：80-2型，江蘇金壇市中大儀器廠；

二氯甲烷、丙酮：色譜純，美國(guó)賽默飛世爾科技公司；

石油醚、硫酸、氯化鈉、無(wú)水硫酸鈉：分析純，天津科密歐試劑公司；

高純氮?dú)猓杭兌葹?9.999%，濟(jì)南堯天儀器有限公司；

農(nóng)藥對(duì)照品溶液：質(zhì)量濃度均為100 μg/mL，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心，農(nóng)藥名稱(chēng)、代號(hào)和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)編號(hào)見(jiàn)表1；

黃芪飲片樣品：市售；

實(shí)驗(yàn)用水為高純水。

表1 農(nóng)藥對(duì)照品列表

1.2 色譜條件

色譜柱：HP-5柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；氣化室溫度：250℃；檢測(cè)器溫度：300℃；柱溫：100℃，保持1 min，以10℃/min升溫至250℃，保持6 min；載氣：N2，流量為1.8 mL/min；分流比：5∶1；進(jìn)樣體積：1 μL。

1.3 溶液的配制

1.3.1 農(nóng)藥對(duì)照品儲(chǔ)備液

精密移取農(nóng)藥對(duì)照品α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC，PP '-DDE，PP '-DDD，PP '-DDT，OP '-DDT及PCNB各2.5 mL至50 mL容量瓶中，用石油醚（沸程60～90℃，下同）定容至標(biāo)線，分別得到質(zhì)量濃度為5 μg/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液。

1.3.2 混合農(nóng)藥對(duì)照品儲(chǔ)備液

精密量取農(nóng)藥單標(biāo)儲(chǔ)備液0.5 mL，置于10 mL容量瓶中，用石油醚稀釋至標(biāo)線，搖勻，得質(zhì)量濃度為0.25 μg/mL的溶液，即為混合農(nóng)藥對(duì)照品儲(chǔ)備液。

1.3.3 黃芪飲片樣品溶液

（1）取黃芪飲片樣品適量于60℃干燥4 h，粉碎成細(xì)粉，精密稱(chēng)定，置于100 mL具塞錐形瓶中，加20 mL水浸泡過(guò)夜，精確加入40 mL丙酮，記錄質(zhì)量。超聲處理30 min，放冷，記錄質(zhì)量，用丙酮補(bǔ)足減失的質(zhì)量；

（2）加入氯化鈉6 g，精確加入二氯甲烷30 mL，記錄質(zhì)量。超聲處理15 min，再記錄質(zhì)量，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的質(zhì)量。靜置使其分層，將上層有機(jī)相迅速轉(zhuǎn)移至裝有適量無(wú)水硫酸鈉的100 mL具塞錐形瓶中，放置4 h；

（3）取35 mL上述經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥的有機(jī)相于100 mL錐形瓶中，置于40℃水浴上濃縮至近干，加少量石油醚如前反復(fù)操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL具塞刻度離心管中，加入石油醚精密稀釋至5 mL，小心加入硫酸1 mL，振搖1 min，以3 000 r/min離心10 min。精密量取上清液2 mL，置于具刻度的濃縮瓶中，用氮?dú)鈱⑷芤簼饪s至適量，用石油醚精密稀釋至1 mL，即得。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品處理方法

與2010 年版《中國(guó)藥典》一部中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留測(cè)定法相比，本實(shí)驗(yàn)對(duì)樣品處理方法進(jìn)行了改進(jìn)。黃芪飲片樣品溶液的制備過(guò)程中，比較了旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀和氮?dú)獯蹈蓛煞N溶液蒸干方法，結(jié)果顯示兩者提取效果沒(méi)有明顯差別。由于氮?dú)獯蹈煽焖?、?jiǎn)單，故本實(shí)驗(yàn)采用氮?dú)獯蹈煞ā?/p>

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)該注意所用溶液均應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，并于低溫（4℃左右）保存，避免溶劑揮發(fā)導(dǎo)致測(cè)量結(jié)果不穩(wěn)定。

2.2 色譜條件的選擇

2.2.1 色譜柱

實(shí)驗(yàn)比較了HP-5色譜柱、DB-1色譜柱和DB-624色譜柱，3種色譜柱的規(guī)格相同（30 m×0.32 mm，0.25 μm），結(jié)果表明使用HP-5色譜柱時(shí)各組分分離度良好，峰形尖銳對(duì)稱(chēng)，可以實(shí)現(xiàn)各有機(jī)氯農(nóng)藥的分離，故選擇使用HP-5色譜柱。

2.2.2 柱溫

探討了不同的柱溫升溫程序?qū)Ω鹘M分分離效果的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，恒定柱溫會(huì)導(dǎo)致色譜峰拖尾且分析時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；而升溫速率太快則導(dǎo)致相近組分無(wú)法完全分離。最終確定的條件為柱溫100℃，保持1 min，再以10℃/min至250℃，保持6 min，在該條件下實(shí)現(xiàn)了各有機(jī)氯農(nóng)藥的分離測(cè)定。

在1.2色譜條件下，黃芪飲片空白加標(biāo)樣品色譜圖如圖1所示。

圖1 黃芪飲片空白加標(biāo)樣品色譜圖

2.3 線性方程

精確量取混合農(nóng)藥對(duì)照品溶液，用石油醚稀釋成質(zhì)量濃度分別為0，1，5，10，50 μg/mL的溶液，得系列濃度的農(nóng)藥對(duì)照品溶液。分別進(jìn)樣1 μL測(cè)定，記錄色譜圖。以色譜峰面積y為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度x（μg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，各農(nóng)藥成分線性方程和相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表2。由表2可知，各農(nóng)藥組分線性相關(guān)系數(shù)均大于0.998，表明線性關(guān)系良好。

表2 9種有機(jī)氯農(nóng)藥回歸方程與相關(guān)系數(shù)

2.4 檢出限和定量限

在本方法所確定的實(shí)驗(yàn)條件下，逐步稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，以被測(cè)組分在氣相色譜上響應(yīng)值與噪聲的比值（S/N）為3確定方法檢出限，以S/N=10計(jì)算定量限，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 方法檢出限及定量限 ng/mL

2.5 精密度試驗(yàn)

將混合農(nóng)藥對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算被測(cè)組分各自峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 精密度試驗(yàn)結(jié)果

由表4可知，9種農(nóng)藥成分色譜峰面積測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7%～2.7%，表明方法的精密度良好。

2.6 加標(biāo)回收試驗(yàn)

精密稱(chēng)定黃芪飲片樣品9份，按照1.3.3方法配制樣品溶液，按實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定。然后按照2.50，7.50，10.00 ng 3個(gè)水平添加農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)，再次測(cè)定，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算各被測(cè)組分含量，計(jì)算平均加標(biāo)回收率，結(jié)果見(jiàn)表5。由表5可知，9種農(nóng)藥的加標(biāo)回收率為94.5%～104.4%，表明本法測(cè)量準(zhǔn)確度較高。

表5 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)語(yǔ)

采用氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器測(cè)定黃芪飲片中9種有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥殘留，方法準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性良好，可作為黃芪中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的監(jiān)測(cè)手段。

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Determination of Organochlorine Pesticides in Astraglus Decoction Pieces by GC

Hou Qianqian， Xun Qining， Liu Zhijuan， Xu Feng， Zhang Wenshen， Liu Xia， Ji Kejian
（CNGC Institute 53， Jinan 250031， China）

GC-ECD method was used to determine 9 organochlorine pesticides in Astraglus Decoction Pieces. Samples were extracted with acetone and dichloromethane， and purified with sulfuric acid. HP-5 column（30 m×0.32 mm，0.25 μm） was used to separate different components， the temperature of inlet was 250℃ and the temperature of detector was 300℃. The average recoveries were 94.5%-104.4%， the RSD of determination results were 1.7%-2.7%， and the detection limits of the method were 0.061-0.175 ng/mL. This method is simple and rapid， reliable and with good reproducibility， it can be used for the determination of nine organochlorine pesticides in Astraglus Decoction Pieces.

gas chormatography； electron capture detector； organochlorine pesticides； Astraglus Decoction Pieces

O657.7

A

1008-6145（2016）05-0057-04

10.3969/j.issn.1008-6145.2016.05.015

聯(lián)系人：侯倩倩；E-mail： houqianqian53@163.com

2016-01-12