郭項(xiàng)雨，馬 強(qiáng),孟憲雙，李 燾，李文雅，白 樺

(中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院，北京 100176)

近年來(lái)，隨著化妝品行業(yè)的不斷發(fā)展，防曬化妝品因具有保護(hù)人體免受紫外線輻射損傷的功效而廣受消費(fèi)者的青睞，市場(chǎng)對(duì)防曬化妝品的需求也與日俱增。紫外線吸收劑是防曬類化妝品配方中的一種功效添加成分，可以起到防曬功效[1 - 3]。帕地馬酯是一種典型紫外線吸收劑，可分為帕地馬酯A和帕地馬酯O。其中，帕地馬酯A由于其對(duì)眼睛、呼吸道和皮膚有刺激作用，我國(guó)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)中明確規(guī)定化妝品中不得添加帕地馬酯A[4]；而帕地馬酯O作為一種常見的紫外線吸收劑，廣泛應(yīng)用于化妝品及其它透光防日曬工業(yè)品中。

目前，針對(duì)防曬化妝品中紫外線吸收劑的檢測(cè)方法主要有薄層色譜法(TLC)[5]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)[6,7]、高效液相色譜法(HPLC)[8,9]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)[10,11]、微乳液電動(dòng)色譜法(MEKC)[12]、實(shí)時(shí)直接分析質(zhì)譜法(DART-MS)[13]等。雖然上述檢測(cè)方法涉及了一些種類的紫外線吸收劑，但防曬化妝品中帕地馬酯A和帕地馬酯O的測(cè)定方法尚未見報(bào)道。本文研究并建立了防曬類化妝品中帕地馬酯的測(cè)定方法，對(duì)于確保化妝品質(zhì)量安全和消費(fèi)者健康安全具有積極意義。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國(guó)，Agilent公司)；ACQUITY超高效液相色譜儀，Xevo TQ MS三重四極桿質(zhì)譜儀，MassLynx數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(美國(guó)，Waters公司)；Milli-Q超純水器(美國(guó)，Millipore公司)；KQ-600B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；CR 21G型高速冷凍離心機(jī)(日本，日立公司)。

帕地馬酯A(CAS：14779-78-3，純度≥97%)購(gòu)自上海劉氏醫(yī)藥科技有限公司，帕地馬酯O(CAS：21245-02-3，純度≥97%)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。準(zhǔn)確稱取帕地馬酯A和帕地馬酯O各10 mg，分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。根據(jù)需要用甲醇稀釋成適用濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。甲醇、乙腈為色譜純?cè)噭?美國(guó)Fisher公司)；其他試劑均為分析純。

1.2 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取0.2 g樣品(膏霜類樣品需加入0.4 g NaCl)于30 mL具塞離心管中，加入20 mL甲醇，超聲輔助提取20 min，以5 000 r/min離心10 min，上清液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后，供高效液相色譜測(cè)定。

1.3 高效液相色譜條件

色譜柱：XTerra MS C18柱(250×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(90∶10，V/V)，流速：1.0 mL/min；等度洗脫；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：310 nm。帕地馬酯A和帕地馬酯O混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖見圖1。

1.4 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜確證條件

色譜條件：XBridge C18柱(150× 2.1 mm,3.5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%甲酸溶液(90∶10，V/V)，等度洗脫；流速：0.3 mL/min；進(jìn)樣量：5 μL；柱溫：30 ℃。質(zhì)譜條件：電噴霧離子源；正離子模式；毛細(xì)管電壓：3.5 kV；萃取錐孔電壓：3.0 V；離子源溫度：150 ℃；脫溶劑氣溫度：500 ℃；脫溶劑氣流量：1 000 L/h；錐孔氣流量：50 L/h；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM)檢測(cè)，質(zhì)譜分析參數(shù)見表1，帕地馬酯A和帕地馬酯O混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流圖見圖2。

表1 帕地馬酯A和帕地馬酯O的質(zhì)譜分析參數(shù)

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

根據(jù)帕地馬酯A和帕地馬酯O的化學(xué)結(jié)構(gòu)式，選擇在190～400 nm范圍內(nèi)分別對(duì)2種帕地馬酯標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描以確定其最大吸收波長(zhǎng)。結(jié)果表明，帕地馬酯A和帕地馬酯O均在波長(zhǎng)310 nm處有最大吸收，因此將檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定為310 nm。

2.2 色譜柱的優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)分別考察了Eclipse XDB C18柱(250×4.6 mm,5 μm)、XTerra MS C18柱(250×4.6 mm,5 μm)、Promosil C18柱(250×4.6 mm,5 μm)、Symmetry C18柱(250×4.6 mm,5 μm)和Kromasil C18柱(250×4.6 mm,5 μm)對(duì)帕地馬酯A和帕地馬酯O的分離效果。結(jié)果表明，不同C18色譜柱對(duì)帕地馬酯A和帕地馬酯O的分離及色譜峰形影響不大，但采用XTerra MS C18柱(250×4.6 mm,5 μm)時(shí)，帕地馬酯A和帕地馬酯O的色譜峰形最佳。

2.3 流動(dòng)相的優(yōu)化

分別選擇甲醇∶水(50∶50、80∶20、90∶10)、乙腈∶水(80∶20、90∶10)作為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫，考察其對(duì)帕地馬酯A和帕地馬酯O色譜行為的影響。結(jié)果表明，選擇乙腈∶水(90∶10)作為流動(dòng)相時(shí)，帕地馬酯A和帕地馬酯O的色譜峰形最好，保留時(shí)間較為合理，因此流動(dòng)相最終選擇為乙腈∶水(90∶10,V/V)。

2.4 柱溫的優(yōu)化

在溫度25 ℃、30 ℃、35 ℃、40 ℃條件下，考察了色譜柱柱溫對(duì)分離效果的影響。結(jié)果表明，在不同柱溫下，帕地馬酯峰形無(wú)顯著差異，保留時(shí)間隨溫度增加逐漸變短。柱溫大于30 ℃時(shí)，帕地馬酯A保留時(shí)間過短，基質(zhì)成分易對(duì)其造成干擾；而在柱溫30 ℃條件下，帕地馬酯保留時(shí)間最為合理，因此柱溫選擇為30 ℃。

2.5 提取溶劑的選擇

以不含帕地馬酯A和帕地馬酯O的化妝品作為空白樣品，向其中加入一定量帕地馬酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，充分混勻后，靜置過夜。然后按1.3樣品前處理步驟分別進(jìn)行提取。結(jié)果表明，以甲醇和乙腈作為提取溶劑，對(duì)帕地馬酯的提取效率無(wú)明顯差異?？紤]到乙腈的毒性較大及成本較高，最終確定甲醇為樣品提取溶劑。

2.6 質(zhì)譜確證

由于化妝品配方中成分較多，基質(zhì)復(fù)雜，而液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有更好的特異性和抗干擾能力，因此進(jìn)一步開發(fā)了帕地馬酯A和帕地馬酯O的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜確證方法，對(duì)疑似陽(yáng)性樣品加以確證。

2.7 方法的線性范圍、檢出限和定量限

將一系列不同質(zhì)量濃度的帕地馬酯A和帕地馬酯O混合標(biāo)準(zhǔn)溶液依次進(jìn)樣，以峰面積對(duì)質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。結(jié)果見表2。

表2 帕地馬酯A和帕地馬酯O的檢出限、定量限、線性范圍和相關(guān)系數(shù)

2.8 方法的回收率與精密度

分別稱取經(jīng)測(cè)定不含帕地馬酯A和帕地馬酯O的防曬化妝品作為空白樣品，分別添加低、中、高三個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，同時(shí)帕地馬酯O增加一個(gè)限量濃度。回收率和精密度結(jié)果見表3。空白化妝品樣品加標(biāo)后提取，典型色譜圖如圖3所示。

表3 帕地馬酯A和帕地馬酯O的平均回收率及精密度結(jié)果(n=6)

2.9 實(shí)際樣品的測(cè)定

按照本研究建立的方法對(duì)市售、網(wǎng)購(gòu)等多種途徑獲取的24件防曬化妝品樣品進(jìn)行了測(cè)定，其中膏霜類樣品8件、水劑類樣品8件和散粉類樣品8件。結(jié)果表明，所測(cè)化妝品樣品中均未檢出帕地馬酯A和帕地馬酯O。

3 結(jié)論

本研究建立了同時(shí)測(cè)定化妝品中帕地馬酯A和帕地馬酯O的高效液相色譜檢測(cè)方法及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜確證方法。該方法準(zhǔn)確、快速、靈敏度高，適用于化妝品中帕地馬酯A和帕地馬酯O的測(cè)定。