張亞杰　張兵帥　韓曦英　王琪瑞　王萌　孫云婷

摘要：目的：研究藜蘆與丹參反藥配伍組合不同配比和劑量變化對急性血瘀模型大鼠血小板聚集率的影響。方法：采用均勻設計法，按2因素7水平以急性血瘀模型大鼠血小板聚集率為指標，觀察藜蘆與丹參2種合煎液灌胃給藥后對急性血瘀模型大鼠血小板聚集率的影響。結(jié)果：經(jīng)回歸分析可知，藜蘆與丹參存在拮抗作用，且當1∶5<藜蘆∶丹參<10∶1時拮抗作用最強。結(jié)論：藜蘆拮抗丹參降低急性血瘀模型大鼠血小板聚集率的作用，其作用強度隨配比和劑量的不同而改變。

關鍵詞：均勻設計；丹參；藜蘆；血小板聚集率

中圖分類號：G642.0 文獻標志碼：A 文章編號：1674-9324（2016）44-0090-03

“十八反”中“諸參辛芍叛藜蘆”，藜蘆與丹參是相反藥對中的一對，能否在臨床上合用，一直都存在爭議。丹參因其肯定的活血化瘀作用而被廣泛用于心血管疾病的治療，藜蘆也具有心血管方面的作用[1，2]，二者合用于心血管方面疾病會產(chǎn)生怎樣的效果有待于進一步研究。所以選擇丹參常用的活血化瘀功效作為研究基礎，通過均勻設計法考察藜蘆與丹參在不同劑量配比的條件下對急性血瘀模型大鼠血小板聚集率的影響，為藜蘆與丹參的臨床應用提供理論依據(jù)。

一、材料

（一）實驗動物

SPF級SD大鼠，體重200±20g，由吉林大學基礎醫(yī)學院實驗動物中心提供，動物合格證號為SCXK-（吉）2011-0021，喂食常規(guī)飼料，自由飲水。

（二）藥品與試劑

黎蘆的產(chǎn)地是長春華家，購于長春市吉深藥店；丹參的產(chǎn)地為山東鄒平縣，購自于長春市吉深藥店；經(jīng)長春中醫(yī)藥大學藥學院鑒定教研室翁麗麗教授鑒定，分別為百合科葵蘆屬植物葵蘆“Veratrumnigrum I，.”的干燥根及根莖，丹參為雙子葉植物唇形科Labiatae鼠尾草屬植物丹參“Salvia miltiorrhizaBge.”的干燥根及根莖。

復制模型的鹽酸腎上腺素注射液：丹東醫(yī)創(chuàng)藥業(yè)有限責任公司，批號：1502011。

（三）儀器與設備

SC-2000血小板聚集測試儀（北京賽科希德科技發(fā)展有限公司）。

二、方法

（一）藥品制備

稱取丹參與黎蘆飲片，浸泡、加熱回流提取、過濾、再煎、合并2次濾液保存于4℃冰箱中。

（二）分組與給藥

1.丹參與藜蘆配伍均勻設計方法。以前期探索的丹參對血小板聚集率影響的有效劑量，藜蘆參考的急性毒性劑量范圍和臨床用藥劑量范圍，確定丹參的劑量范圍是4.50～19.60g/kg；藜蘆的劑量范圍為0.03～0.87g/kg，將丹參和藜蘆作為兩個考察因素，每一個因素各設7個水平，按均勻設計表U7（72）及其使用表進行設計，共得到7種配比，具體見表1、2。

2.對急性血瘀模型大鼠血小板聚集率的影響。將大鼠按體重隨機分為空白組、模型組、藜蘆與丹參不同配比組共9組，每組各10只。其中空白組與模型組給予生理鹽水1ml/100g體重灌胃，其余各組給予相應藥液1ml/100g體重灌胃，連續(xù)給藥10天。除空白組外，其余各組均于末次給藥后皮下注射濃度為1mg/ml鹽酸腎上腺素注射液，即按體重為0.01mg/kg。半小時后，將所有大鼠放入冰水中刺激5分鐘，時至將其打撈出來并將身上的水擦干烤干。兩小時后，按體重（0.01mg/kg）再次通過皮下注射鹽酸腎上腺素。次日用10%的水合氯醛麻醉，從頸動脈插管放血，以構(gòu)椽酸鈉抗凝，離心，測量血小板聚集率。

3.數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)用±S表示，先用SPSS 13.0軟件的秩和檢驗或單因素方差分析，后采用matlab7.8軟件進行多元逐步回歸分析，以P<0.05為有統(tǒng)計學意義。

三、結(jié)果

各組大鼠血小板聚集率結(jié)果見表3，采用秩和檢驗分析結(jié)果顯示，各組與模型組比較，大部分給藥組大鼠的血小板聚集率均降低（P<0.05、P<0.01），提示藜蘆與丹參合用具有降低大鼠血小板聚集率的作用。

藥物交互作用分析：將藜蘆與丹參均勻設計7組實驗數(shù)據(jù)采用matlab統(tǒng)計軟件進行多元逐步回歸，以藜蘆、丹參為自變量x1、x2，血小板聚集率因變量y，得擬合方程y=29.0861+46.0206X1+1.8186X2-28.6143X12-

1.8965X1X2-0.0662X22三維效果圖，見圖1。結(jié)果顯示，藜蘆和丹參的共同用藥顯著降低了血小板聚集率。

血小板聚集率與藥物配伍比例和用藥劑量相關性分析：由方程y進行外延推論，分別以藥物總劑量（藜蘆+丹參）、不同比例（丹參：藜蘆）作為自變量D、K，血小板聚集率為相應的因變量y1'，得理論擬合方程y1'=29.0861+（46.0206D）/（K+1）+（1.8186DK）/（K+1）-（28.6143D2）/（K+1）2-（1.8965D2K）/（K+1）2-（0.0662D2K2）/（K+1）2，結(jié)果見圖1?？倓┝吭谝欢l件下，丹參所占比例越大，血小板聚集率越小，說明丹參在起主要作用，在圖1中從拋物線的下降階段、曲線斜率上看，丹參所占比例越大，血小板聚集率下降速率越快，說明藜蘆對其藥效降低的強度越大。當藜蘆和丹參的比例小于1∶10時，y值即血小板聚集率值趨于接近，此時藜蘆對丹參藥效降低強度最大；二者比例大于5∶1時，曲線趨于接近，此時藜蘆對川貝藥效降低強度趨于最小。藜蘆與丹參配伍比例為1∶10<藜蘆∶丹參<5∶1時，二者合用明顯降低了丹參的減小血小板聚集率的作用。

大鼠血小板聚集率與藥組配伍比例和用藥劑量相關性分析：總劑量0～19.69g·kg，合煎液對血小板聚集率的影響呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢，如拋物線：小于5g·kg時呈上升趨勢，大于10g·kg時呈下降趨勢，大于5g·kg小于10g·kg時不同配比下上升或下降趨勢不同，丹參比例越高，拋物線上升或下降速率越慢，而藜蘆的比例越高，上升或下降的速率越快。

四、討論

“十八反”有的醫(yī)家認為反藥合用會導致毒性增加，強調(diào)此為絕對禁忌；也有認為反藥在一定條件下是可以同用，確實也可以取得良好的療效。所以本課題選擇了藜蘆與丹參這一相反藥對作為研究對象，評價二者是否具有相反性。從收集的文獻中可以看出，對藜蘆和丹參的合用研究多為體外研究，以相應毒性成分的變化為基礎[3，4]，但是藥物在進入機體后在代謝功能的作用下可能發(fā)生新的成分變化，所以并不能依據(jù)于體外的數(shù)據(jù)就確定了藜蘆和丹參的相反關系，還要從動物的體內(nèi)研究進行確認，所以本研究選擇丹參和藜蘆的主要藥理作用作為觀察指標，通過均勻設計方法評價這一相反藥配伍組合在不同比例和劑量條件下對急性血瘀大鼠的血小板聚集率影響。

急性血瘀大鼠的血小板聚集率影響實驗結(jié)果顯示，丹參和藜蘆都具有降低血小板聚集率的作用，與文獻的研究結(jié)果相符。回歸分析得知，在藜蘆0.03～0.87g/kg和丹參4.50～19.60g/kg的合煎液中，藜蘆與丹參對降低急性血瘀大鼠的血小板聚集率存在一定的拮抗作用，藜蘆能減弱丹參對血小板聚集率的降低作用，且比例為1∶10<藜蘆∶丹參<5∶1時，此種拮抗作用最強。

參考文獻：

[1]韓國柱，李欣燕，呂莉.烏蘇里藜蘆堿對大鼠血小板聚集以及小鼠全血凝血時間及尾出血時間的影響[J].中國藥理學會通訊，2002，19（2）：8-10.

[2]李欣燕，任洪燦，韓國柱.烏蘇里藜蘆堿在大鼠的血液流變學作用[J].大連醫(yī)科大學學報，2004，26（3）：165-167.

[3]王福霞，劉磊.高效液相色譜法測定藜蘆-丹參配伍化學成分變化[J].醫(yī)藥導報，2009，28（5）：656-657.

[4]敖書華，劉磊.HPLC研究藜蘆-丹參配伍后藜蘆定的含量[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2009，5（1）：17-18.