肖爽+徐非

摘 要：法醫(yī)DNA檢驗技術(shù)依靠其高靈敏度、結(jié)果客觀易讀、檢驗的物證種類繁多、適用的案件類型寬泛等優(yōu)勢，已成為當(dāng)今公安機關(guān)偵破案件和法庭證據(jù)提供的主要手段和途徑。然而，在現(xiàn)實的司法實踐中，隨著DNA檢驗技術(shù)的作用被大肆報道和廣泛宣傳，犯罪嫌疑人的反偵察意識越來越強，現(xiàn)場生物物證特別是接觸性生物物證的發(fā)現(xiàn)、提取和DNA檢出越來越困難。本文僅就影響現(xiàn)場接觸性生物物證DNA檢出的多種因素做一討論，提出接觸性DNA檢驗應(yīng)注意的事項，僅供參考。

關(guān)鍵詞：法醫(yī)DNA檢驗；接觸性DNA；DNA提??；影響因素

在法醫(yī)學(xué)上，近年來短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）位點是第二代DNA分析技術(shù)的核心[1]，目前STR是法醫(yī)DNA鑒定中應(yīng)用最廣的遺傳標(biāo)記，熒光標(biāo)記多基因座STR復(fù)合擴增檢測技術(shù)在法醫(yī)DNA檢驗中保持技術(shù)主導(dǎo)地位。由于該技術(shù)靈敏度高，所需檢材量少，使得可被檢驗的現(xiàn)場生物物證不僅局限于血痕、精斑等常量DNA，表皮脫落細胞等微量接觸性DNA已成為目前偵破各類刑事案件的重要證據(jù)。但是，不同的DNA提取方法、DNA自身的降解、接觸性DNA所處的環(huán)境、載體及污染等均可對DNA的檢出造成較大影響，在日常的現(xiàn)場勘查、送檢及DNA檢驗時應(yīng)格外注意。

1 接觸性DNA常用的提取方法

磁珠純化法

磁珠純化法，是在細胞裂解液裂解細胞釋放DNA后，加入磁性顆粒，使細胞中游離出來的DNA分子被吸附到磁性顆粒表面，蛋白質(zhì)等雜質(zhì)不被吸附而留在溶液中，在磁場作用下，磁性顆粒與液體分開，回收顆粒后再用純水或TE，洗脫并收集吸附的DNA的一種方法[2]。此法操作簡單，DNA回收率高，模板純凈度好，操作便于程序化，可用于自動化提取，目前市場上已有多家公司制成商品化的提取試劑盒。但此方法提取耗費時間較長，磁性顆粒成本較高，手工操作較復(fù)雜，自動化提取儀器、耗材均較貴。

過濾柱法

過濾柱法原理與磁珠純化法原理相同，但將磁性顆粒替換為硅膠旋轉(zhuǎn)柱，以超濾膜截取大分子DNA，而使雜質(zhì)濾出[3]，目前市場上也有公司制成商品化的提取試劑盒。過濾柱法操作較磁珠法簡便，DNA回收率較高，但無法去除大分子污染物， STR檢測得到的DNA檢出率較磁珠法低，且過濾柱成本較磁珠法更高。

2提取時間對接觸性DNA檢出的影響

表皮細胞離體后失去生活功能，溶酶體急劇釋出，溶酶體酶包括水解酶和蛋白酶等，可使組織蛋白和核酸等重要的高分子物質(zhì)以及核蛋白、糖脂等復(fù)合物逐步降解[4]，這種現(xiàn)象稱為自溶。發(fā)生自溶時，作為遺傳物質(zhì)DNA的載體——核染色質(zhì)固縮、碎裂，最終完全溶解，導(dǎo)致DNA的降解。DNA自溶與降解的發(fā)生與發(fā)展有一定的規(guī)律性，一般3天內(nèi)受環(huán)境溫度的影響較小[2]，之后會加速溶解。

3接觸性DNA所處環(huán)境的影響

外界環(huán)境對接觸性DNA的影響

接觸性DNA在無選擇的自然環(huán)境中，會受到光（日光和紫外光）、潮濕、高溫及洗滌劑、細菌、灰塵、昆蟲等的影響，可能對DNA檢驗產(chǎn)生以下影響[2]：（1）干擾DNA提取過程，降低DNA產(chǎn)量，限制DNA分析；（2）存在的抑制劑在提取過程中被一起提取出來，抑制酶反應(yīng)[5]；（3）暴露于上述環(huán)境，可能損害DNA，引起DNA降解[6-7]，影響DNA提取的質(zhì)量或產(chǎn)量。

接觸性DNA所在載體的影響

密度較小的或表面粗糙的載體基質(zhì)，如針織品、木塊、石塊載體上的表皮脫落細胞，STR檢驗成功率較高；表面光滑的載體基質(zhì)，如金屬、橡膠等，STR 檢驗成功率則較低；其主要原因是此類載體上的脫落細胞較易從載體上脫落，從而大大減少了能提取到的DNA的模板量。

另外，載體所受污染情況的不同，對于DNA降解的影響也不同。如地毯、織物上若沾有食物殘渣，吸濕性又較好，潮濕的脫落細胞不易干燥，也易導(dǎo)致DNA的降解[2]，尤其食物中還含有多種蛋白質(zhì)物質(zhì)，可作為細菌繁殖的培養(yǎng)基，更易使DNA發(fā)生降解。

其他人源性DNA對接觸性DNA的污染

接觸性DNA往往含量很少，若遇到其他常量DNA如血跡、唾液等覆蓋時，根據(jù)STR檢驗?zāi)０鍞U增時的優(yōu)勢擴增原則[2]，很可能會抑制接觸性DNA的擴增和檢出；同樣，若現(xiàn)場接觸性DNA檢材較多，可能造成交叉污染，檢出混合型DNA分型。

綜上所述，對于接觸性DNA的法醫(yī)DNA檢驗時，為提高DNA檢出率，應(yīng)注意以下幾個方面：（1）現(xiàn)場發(fā)現(xiàn)接觸性DNA時應(yīng)及時提取，盡快送檢；（2）提取接觸性DNA時應(yīng)盡可能多的將脫落的細胞轉(zhuǎn)移至棉簽載體上；（3）提取接觸性DNA時應(yīng)做好個人防護，檢材必須單獨提取單獨包裝，避免污染（4）應(yīng)根據(jù)接觸性DNA所處的載體潔凈程度，合理選擇DNA提取方法。

參考文獻

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[3]裴黎，趙興春編著.法醫(yī)物證實驗手冊[M].北京，中國公安大學(xué)出版社，2007， 267-270.

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[7] Bar W，Kratzer A，Machler M，et al.Postmortem stability of DNA[J]. Forensic Sci Int，1988，39（1）：59- 70.

作者簡介：肖爽，女，法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)病理及法醫(yī)物證檢驗鑒定工作。

徐非，男，法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)病理及法醫(yī)物證檢驗鑒定工作。