胡珊蓮

(上海市靜安區(qū)江場(chǎng)西路上海光明荷斯坦牧業(yè)有限公司，上海靜安 200436)

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便捷式液相阻斷ELISA試劑盒檢測(cè)牛O型口蹄疫抗體水平的效果試驗(yàn)

胡珊蓮

(上海市靜安區(qū)江場(chǎng)西路上海光明荷斯坦牧業(yè)有限公司，上海靜安 200436)

采用便捷式液相阻斷ELISA試劑盒和傳統(tǒng)液相阻斷試劑盒，同時(shí)對(duì)117份牛血清樣品進(jìn)行口蹄疫O型抗體水平檢測(cè)，以探討其相關(guān)性和特點(diǎn)。結(jié)果表明：便捷式液相阻斷ELISA試劑盒與傳統(tǒng)液相阻斷試劑盒的檢測(cè)結(jié)果相比，kappa值為0.84，具有高度一致性；檢測(cè)時(shí)間，便捷式液相阻斷ELISA試劑盒檢測(cè)為2 h，傳統(tǒng)式檢測(cè)則需時(shí)5.25 h。應(yīng)用便捷式液相阻斷ELISA試劑盒對(duì)上海光明荷斯坦牧業(yè)有限公司下屬牧場(chǎng)檢測(cè)牛血清樣品8729份，O型口蹄疫免疫抗體合格率為96.9%。

O型口蹄疫；液相阻斷ELISA試劑盒；免疫抗體；荷斯坦牛

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，主要侵害偶蹄動(dòng)物?？谔阋卟《?FMDV)屬小RNA病 毒科，口蹄疫病毒屬。完整的FMDV，無(wú)囊膜，僅由衣殼包裹。我國(guó)將口蹄疫與牛瘟、牛傳染性胸膜肺炎、牛海綿狀腦病等動(dòng)物疫病列為一類(lèi)動(dòng)物疫病。

口蹄疫在世界多個(gè)地區(qū)廣泛流行，發(fā)病率高，給養(yǎng)殖業(yè)造成了重大經(jīng)濟(jì)損失(特別是養(yǎng)牛業(yè)和養(yǎng)豬業(yè))，我國(guó)每年投入大量人力、物力用于疫苗免疫。因此，采用科學(xué)合理的檢測(cè)方法對(duì)疫苗抗體水平進(jìn)行檢測(cè)顯得十分重要。傳統(tǒng)液相阻斷ELISA試劑盒因其靈敏、準(zhǔn)確、可以半定量等優(yōu)點(diǎn)，在口蹄疫免疫抗體檢測(cè)中應(yīng)用廣泛，但步驟繁瑣、反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)等弊端給檢測(cè)工作帶來(lái)了不少麻煩。為進(jìn)一步了解和評(píng)價(jià)便捷式液相阻斷ELISA試劑盒的應(yīng)用效果，試驗(yàn)通過(guò)便捷式液相阻斷ELISA試劑盒和傳統(tǒng)式液相阻斷試劑盒對(duì)117份牛血清樣品進(jìn)行牛O型口蹄疫抗體水平檢測(cè)，并結(jié)合便捷式液相阻斷試劑盒對(duì)上海光明荷斯坦牧業(yè)有限公司牧場(chǎng)8729份牛血清樣品進(jìn)行牛O型口蹄疫抗體水平檢測(cè)，以考察其應(yīng)用效果。

1　材料與方法

1.1血清采樣隨機(jī)采集上海光明荷斯坦牧業(yè)有限公司下屬牧場(chǎng)荷斯坦牛血清樣品117份；另于2015年11月至2016年4月期間采集荷斯坦牛送檢血清樣品8729份，檢測(cè)牛O型口蹄疫抗體水平及免疫抗體合格率。所有樣品均為口蹄疫疫苗普免后21-23 d采集的新鮮血清樣品。

1.2檢測(cè)試劑盒便捷式液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒由河南洛陽(yáng)某信息科技有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：E151027。傳統(tǒng)式液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒由中國(guó)農(nóng)科院某獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：20150624101-2。

1.3檢測(cè)方法嚴(yán)格按兩種檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。便捷式ELISA檢測(cè)試劑盒以病毒抗原阻斷50%反應(yīng)的450 nm處OD值為臨界值，待檢樣品OD值>臨界值,判為陰性；待檢樣品OD值≤臨界值，判為陽(yáng)性。每份待檢樣品系列梯度稀釋中，陽(yáng)性孔的最高稀釋倍數(shù)即為該待檢樣品的抗體效價(jià)。牛、羊：抗體效價(jià)≥1∶128，99%以上保護(hù)。傳統(tǒng)式ELISA檢測(cè)試劑盒以病毒抗原對(duì)照D492nm值的50%為臨界值，被檢血清稀釋孔D492nm值>臨界值，判為陰性；D492nm值≤臨界值，判為陽(yáng)性，陽(yáng)性孔的D492值等于臨界值時(shí)所對(duì)應(yīng)的稀釋度為該份血清樣品的抗體滴度。牛、羊抗體滴度≥1∶128，為保護(hù)。

2　結(jié)果與分析

2.1檢測(cè)步驟與時(shí)間詳見(jiàn)表1。

表1　兩種試劑盒檢測(cè)步驟與時(shí)間比較

由表1可見(jiàn)，便捷式液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)總試時(shí)間較短，僅為傳統(tǒng)式液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒操作時(shí)間的1/3左右。且便捷式檢測(cè)試劑盒顯色液不需要現(xiàn)用現(xiàn)配，避免了工作人員接觸OPD底物的隱患(有報(bào)道稱(chēng)OPD具有致異變性)。

2.2檢測(cè)結(jié)果比對(duì)詳見(jiàn)表2。

由表2可見(jiàn)，兩種模式檢測(cè)血清樣品117份的合格率分別為76.92%和74.36%，兩者合格樣品的符合率為97.70%，不合格樣品符合率為83.33%。經(jīng)kappa值比較，兩種試劑盒檢測(cè)結(jié)果的kappa值大于0.8(Kappa判定： 大于0.8為高度一致， 0.6-

表2　兩種檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)結(jié)果比對(duì)

0.8為一致，0.4-0.6為一般，小于0.4為差)。檢測(cè)結(jié)果表明，便捷式和傳統(tǒng)式液相阻斷ELISA試劑盒檢測(cè)牛血清O型口蹄疫抗體水平的符合率為高度一致。

2.3便捷式液相阻斷ELISA試劑盒檢測(cè)牛O型口蹄疫免疫抗體水平結(jié)果2015年11月至2016年4月，經(jīng)對(duì)上海光明荷斯坦牧業(yè)有限公司所屬牧場(chǎng)牛群于口蹄疫疫苗普免后21～23 d采集血樣，采用便捷式液相阻斷ELISA試劑盒檢測(cè)血樣8729份。經(jīng)檢測(cè)，免疫合格樣品8462份，合格率為96.9%，檢測(cè)方法簡(jiǎn)便、快速，并未發(fā)現(xiàn)便捷式液相阻斷ELISA試劑盒有何不穩(wěn)定現(xiàn)象。

3　小結(jié)與討論

根據(jù)本次檢測(cè)結(jié)果，便捷式液相阻斷ELISA試劑盒在加樣步驟和反應(yīng)時(shí)間方面進(jìn)行了適當(dāng)改進(jìn)，實(shí)驗(yàn)原理仍為液相阻斷ELISA：血清中特異性抗體阻斷病毒抗原與包被抗體酶結(jié)合物結(jié)合。

檢測(cè)結(jié)果表明，便捷式液相阻斷ELISA試劑盒與傳統(tǒng)液相阻斷ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果具有高度一致性，采用便捷式液相阻斷ELISA試劑盒檢測(cè)牛O型口蹄疫抗體水平，可提高工作效率，降低人工成本，未見(jiàn)任何不穩(wěn)定現(xiàn)象，值得推廣應(yīng)用。

2016-07-01

S858.23

A

1005-7307(2016)05-0004-003