王　楠，陳潤(rùn)發(fā)，劉　妍

高效液相色譜法檢測(cè)水產(chǎn)品中抗生素藥物殘留的研究

王楠，陳潤(rùn)發(fā)，劉妍

（廣東省工程技術(shù)研究所，廣東廣州 510000）

研究能夠檢測(cè)出水產(chǎn)品中含有抗生素藥物殘留的方法，建立檢測(cè)方法。在水產(chǎn)品殘留物中，加入Mellvmince-EDTA緩沖提取液，借助高效液相色譜法，對(duì)殘留溶液進(jìn)行凈化處理，取350nm的檢測(cè)波長(zhǎng)，將溶液流速控制在0.85mL/min。然后對(duì)水產(chǎn)品中含有的抗生素藥物殘留進(jìn)行梯度式的洗脫。該種方法在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中操作，比較簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象反映靈敏，實(shí)現(xiàn)結(jié)果精準(zhǔn)度高，實(shí)驗(yàn)殘留液對(duì)于環(huán)境的污染較小。

高效液相色譜法；水產(chǎn)品；抗生素；藥物殘留；檢測(cè)；研究

在水產(chǎn)品養(yǎng)殖中，為了提升產(chǎn)量，在水產(chǎn)品養(yǎng)殖飼料中添加大量的抗生素?？股卦陴B(yǎng)殖飼料中的長(zhǎng)期應(yīng)用，將會(huì)產(chǎn)生很多藥物殘留。當(dāng)被投入大量抗生素的水產(chǎn)品走進(jìn)人們的飲食當(dāng)中時(shí)，藥物殘留將會(huì)嚴(yán)重的危害人們的健康。為此，通過(guò)高效液相色譜法實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)水產(chǎn)品中抗生素的藥物殘留。

1　實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1儀器

主要儀器為10A-VP高效液相色譜儀，該實(shí)驗(yàn)儀器中附帶有紫外線檢測(cè)器。輔助儀器為中型均質(zhì)器、中速離心機(jī)。關(guān)鍵儀器為色譜柱：SHIMADZM VP-ODS C18，為了實(shí)現(xiàn)精確的結(jié)果測(cè)定，該色譜柱的尺寸為150mm×4.6mm，粒徑保持在5μm。

1.2試劑

標(biāo)準(zhǔn)的土霉素、四環(huán)素、氯霉素、金霉素樣品，EDTA-2Na、檸檬酸、Mellvmince-EDTA緩沖液。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

（1）選取樣品溶液稀釋定容；取磷酸氫二鈉30g、檸檬酸13.0g，乙二胺四乙酸二鈉鹽40.0g。將以上藥品混合溶液稀釋并且靜置定容1000mL。

（2）選取水產(chǎn)品樣品10g，將實(shí)驗(yàn)樣品放置在離心管中，應(yīng)用Mellvmince-EDTA緩沖進(jìn)行提取。該溶液提取環(huán)節(jié)中，分為3個(gè)濃度梯度、3個(gè)離心梯度進(jìn)行。緩沖溶液提取梯度為：30mL、20mL、10mL，濃度為1mol/L；離心梯度為：3 000r/ min離心5min，5 000r/min離心5min；7 000r/min離心5min。將緩沖、離心過(guò)后的溶液靜置。

（3）樣品凈化；將2）步驟中得到的樣品溶液加到固相萃取柱上，采用5mL甲醇、5mL去離子水活化。將被洗脫的混合溶液進(jìn)行定容在1.0mL，在濾膜過(guò)濾下取樣。

（4）配置標(biāo)準(zhǔn)溶液；取土霉素、四環(huán)素、氯霉素、金霉素等標(biāo)準(zhǔn)品各0.01g，測(cè)定溶液時(shí)，借助甲醇溶液將以上藥物稀釋?zhuān)♂尩臐舛纫来螢椋?.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/ mL。

2　結(jié)果與討論

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

在以上溶液中選取1～3號(hào)混合溶液進(jìn)行測(cè)定，求出如下回歸方程。水產(chǎn)品抗生素的主要成分在0.1～2.0μg/mL之間存在著線性關(guān)系。根據(jù)其線性關(guān)系，將相關(guān)系數(shù)確定在0.999 1～0.999 6之間。溶液的檢出限范圍為18～30μg/kg。具體參數(shù)見(jiàn)表1。

表1　標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

2.2水產(chǎn)品樣品加標(biāo)

為了保證實(shí)驗(yàn)的真實(shí)性、準(zhǔn)確性，選取魚(yú)肉的加標(biāo)回收試驗(yàn)。同一份的魚(yú)肉取4份的平行樣。第一份做為基本樣品，另外三份樣品中分別加入0.4μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液，測(cè)定加標(biāo)回收率。在實(shí)際的樣品測(cè)定環(huán)節(jié)中，土霉素、金霉素、氯霉素、四環(huán)素中最為容易檢測(cè)出來(lái)的抗生素就是土霉素，其含量最大為308ng/mL［1］。

2.3實(shí)驗(yàn)討論

2.3.1如何優(yōu)化4種抗生素的分離

在對(duì)水產(chǎn)品中4種抗生素的分離環(huán)節(jié)中，有機(jī)相與水相的比例不同，對(duì)于4種抗生素的分離效果產(chǎn)生一定的影響。那么在等梯度洗脫形式下，所能夠?qū)崿F(xiàn)的分離的效果不好。在圖像上所顯示的峰值也不理想。在優(yōu)化下分離下，采用科學(xué)的分離梯度，將以上4中抗生素有效分離。

2.3.2如何降低流速對(duì)于抗生素的影響

洗脫液的實(shí)際流速對(duì)于4種抗生素的保留時(shí)間、分離度等都產(chǎn)生著一定的影響。流動(dòng)相大于0.9mL/min的洗脫情況下，土霉素和四環(huán)素峰型疊加，抗生素不能實(shí)現(xiàn)分離。那么在此基礎(chǔ)上，減低流速，可以延長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)間。經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)，得出流速在0.85mL/min的情況下，4種抗生素的分離效果最好［2］。

2.3.3緩沖提取液的選擇

不同類(lèi)型、不同濃度下的緩沖提取液所能夠?qū)崿F(xiàn)的抗生素提取效果不同，與檸檬酸、高氯酸提取液相比，Mellvmince-EDTA緩沖提取液的提取效果較好。

3　結(jié)束語(yǔ)

水產(chǎn)品抗生素的主要成分在0.1～2.0μg/mL之間存在著線性關(guān)系。根據(jù)其線性關(guān)系，將相關(guān)系數(shù)確定在0.999 1～0.999 6之間。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)討論，確定了抗生素分離、提取的溶液濃度。采用科學(xué)的分離梯度，將以上4種抗生素有效分離、流速在

0.85m L/min的情況下，4種抗生素的分離效果較好。Mellvmince-EDTA緩沖提取液最佳。

［1］ 高福凱.親和提取技術(shù)在檢測(cè)水產(chǎn)品中抗生素殘留的研究與應(yīng)用［D］.煙臺(tái)大學(xué)，2013.

［2］ 朱世超.水產(chǎn)品中大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素殘留量檢測(cè)方法的研究［D］.集美大學(xué)，2012.

Antibiotic Drug Residues in Aquatic Products By High Performance Liquid Chromatography

Wang Nan，Chen Run-fa，Liu Yan

Objective：To study the mode capable of detecting drug residues in aquatic products containing antibiotics，the establishment of detection methods.Methods：Aquatic residue was added Mellvmince-EDTA buffer extract，by means of high performance liquid chromatography，the residual solution was subjected to purification，detection wavelength of 350nm is taken，the solution flow rate control at 0.85ml/min.Then the fish containing antibiotics contained residues in the gradient elution.The operating method in actual experiment，relatively simple experimental phenomena reflecting the sensitivity.Achieve high accuracy results，test the residual liquid is less for the environment.

high performance liquid chromatography；aquatic products；antibiotics；drug residues；detection；research

TS254.7

B

1003-6490（2016）06-0168-02

2016-05-31

王楠（1987—），男，廣東興寧人，助理工程師，主要從事檢測(cè)方面工作。

收稿日期：2016-06-11

吉林省教育廳“十二五”科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（吉教科合字［2015］第199號(hào)）；吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目-青年科研基金項(xiàng)目（20150520118JH）。

作者簡(jiǎn)介： 曲楠（1980—），女 吉林長(zhǎng)春人，副教授，主要從事化學(xué)研究工作。