王軍武，夏 天，伍曉汀

ISG15蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義

王軍武，夏 天，伍曉汀

目的 研究ISG15蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性和臨床意義。方法 收集105例手術(shù)切除的乳腺癌組織標(biāo)本，采用Envision免疫組化法檢測ISG15蛋白的表達(dá)，并進(jìn)行組織評分，統(tǒng)計分析ISG15表達(dá)水平與患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。結(jié)果 ISG15蛋白在乳腺癌組織中呈高表達(dá)，免疫組化評分為5.17±1.07；其中Basal-like型“三陰性”乳腺癌在4種分子病理分型乳腺癌中評分最高6.20±1.13（P＜0.05）；ISG15的表達(dá)與TNM腫瘤分期呈正相關(guān)，與抑癌基因HER-2的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），而與患者年齡、是否絕經(jīng)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）的表達(dá)均無明顯相關(guān)（P＞0.05）。結(jié)論 ISG15蛋白表達(dá)與乳腺癌組織TNM分期及抑癌基因HER-2表達(dá)水平相關(guān)，ISG15蛋白水平對患者乳腺癌的病情評估和預(yù)后有一定的臨床價值。

乳腺癌；ISG15；免疫組化；預(yù)后

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，在過去的20年中，全球的乳腺癌發(fā)病率呈持續(xù)增長的趨勢，尤其是在50歲以上的女性中［1］。我國2008年乳腺癌的流行病學(xué)資料顯示，女性乳腺癌新發(fā)病例169 452例，位居女性惡性腫瘤的第2位，乳腺癌已成為造成我國癌癥疾病負(fù)擔(dān)的重要原因［2］。

干擾素刺激基因15（interferon-stimulated gene 15，ISG15）是第一個被鑒定的泛素樣蛋白（ubiquitinlike）家族成員，它由ISG15基因編碼，其蛋白分子量為15 kD，可經(jīng)過病毒感染和Ⅰ型干擾素誘導(dǎo)表達(dá)，在天然免疫應(yīng)答中起調(diào)節(jié)作用，在抗病毒和抗腫瘤的過程中發(fā)揮著重要作用［3-4］。本研究通過檢測ISG15蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)情況，進(jìn)一步研究ISG15蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性和臨床意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集我院2008年1月～2012年12月病理學(xué)檢查明確診斷為乳腺癌的105例患者的手術(shù)切除腫瘤標(biāo)本，患者均為女性，所有患者術(shù)前均未接受化療、放療、內(nèi)分泌或其他抗腫瘤治療。根據(jù)2002年國際抗癌聯(lián)盟第6版乳腺癌TNM分期進(jìn)行腫瘤分期；根據(jù)手術(shù)后病理免疫組化檢查結(jié)果進(jìn)行乳腺癌的分子病理分型，分為4個亞型［5］：Luminal A型、Luminal B型、ERBB2+型、Basal-like型。

1.2 免疫組織化學(xué)染色方法（IHC） 采用Envision免疫組化試劑盒（上?；蚬荆z測乳腺癌組織中ISG15蛋白的表達(dá)情況，按照試劑盒說明書操作：石蠟切片脫蠟、水化后，抗原修復(fù)采用檸檬酸鹽緩沖鹽（pH 6.0）高壓熱修復(fù)，室溫孵育，3%過氧化氫15 min去除內(nèi)源性過氧化物酶活性，4℃孵育一抗ISG15（美國SANTA CRUZ，克隆號SC-166755，稀釋度為1∶100）過夜。陰性對照采用PBS緩沖液代替一抗孵育。

1.3 免疫組化染色結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) ISG15蛋白表達(dá)于細(xì)胞漿或細(xì)胞核，陽性染色為棕黃色或者棕褐色。在未提前告知相關(guān)分組與臨床資料的前提下，由兩名有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師對免疫組化結(jié)果進(jìn)行閱片。按照Axiotis評分標(biāo)準(zhǔn)，染色程度分為4個等級：0分：無陽性著色；1分：淺黃色；2分：中等程度黃染；3分：強(qiáng)陽性，棕褐色。再根據(jù)陽性細(xì)胞比例進(jìn)行評分：0分：0～10%；1分：11%～25%；2分：26%～50%；3分：51%～75%；4分：76%～100%［6］。兩項(xiàng)評分的總和為每例標(biāo)本的最終得分。

1.4 ISG15蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)相關(guān)性分析

按免疫組化ISG15蛋白表達(dá)水平評分，將乳腺癌患者分成2組：ISG15低表達(dá)組（IHC評分≤3分）和ISG15高表達(dá)組（IHC評分＞3分）。采集患者的年齡、是否絕經(jīng)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小及雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、抑癌基因HER-2表達(dá)等臨床病理參數(shù)，分析ISG15蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)的相關(guān)關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPPSS20.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用方差分析，相關(guān)性分析采用Pearson χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同分子病理分型乳腺癌組織中ISG15蛋白的表達(dá)水平 ISG15蛋白在乳腺癌細(xì)胞中主要表達(dá)于細(xì)胞漿，呈黃棕色或黃褐色，偶見細(xì)胞核陽性表達(dá)（圖1）。ISG15蛋白在4種分子分型的乳腺癌中均呈陽性表達(dá)，總體表達(dá)水平較高，Axiotis評分為5.17±1.07，其中在Basal-like型即“三陰性”乳腺癌中表達(dá)水平最高，免疫組化評分為6.20±1.13，顯著高于Luminal A型、Luminal B型、ERBB2+型（P＜0.05）。

圖1 ISG15蛋白在乳腺癌組織的表達(dá)（免疫組化染色×400）

2.2 ISG15蛋白表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，在腫瘤TNM分期上，pT3和pT2期的ISG15蛋白表達(dá)明顯高于pT1期 （P＜0.05）；ISG15蛋白表達(dá)與腫瘤TNM分期呈正相關(guān)，腫瘤分期越高，ISG15蛋白的表達(dá)越強(qiáng)。ISG15蛋白表達(dá)與患者HER-2的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)系（P＜0.01），而與患者的年齡、是否絕經(jīng)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小、ER、PR的表達(dá)情況均無明顯的相關(guān)關(guān)系（P＞0.05，表1）。

表1 ISG15蛋白表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析

3 討論

ISG15蛋白是一種由干擾素刺激基因15編碼產(chǎn)生的類泛素化蛋白，其初級結(jié)構(gòu)和高級結(jié)構(gòu)均與泛素相似，它的氨基端和羧基端各有1個與泛素類似的高度同源功能域［7-8］。然而ISG15蛋白不如泛素蛋白保守，其編碼基因的結(jié)構(gòu)在不同生物體內(nèi)差異較大，如在哺乳動物與魚類細(xì)胞中的差異高達(dá)24%～53%［7，9］。ISG15蛋白可表達(dá)于淋巴細(xì)胞、平滑肌與橫紋肌細(xì)胞、神經(jīng)元以及特定上皮細(xì)胞等［10］。ISG15蛋白以單體或者復(fù)合形式存在于體內(nèi)，可通過酶級聯(lián)反應(yīng)與蛋白質(zhì)共價結(jié)合，稱為ISG化現(xiàn)象（ISGylation），它可以對細(xì)胞內(nèi)的多種蛋白質(zhì)進(jìn)行共價修飾，調(diào)節(jié)蛋白在細(xì)胞內(nèi)的活性，參與細(xì)胞內(nèi)RNA剪接、染色體修復(fù)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、應(yīng)激反應(yīng)、蛋白質(zhì)翻譯等多個生理過程［3］。

此外，ISG15蛋白在抗病毒天然免疫反應(yīng)中有重要的調(diào)節(jié)功能，可以抑制多種DNA病毒和RNA病毒的復(fù)制與增殖，ISG15蛋白在抗呼吸道合胞病毒、HIV病毒、乙型肝炎病毒，皰疹病毒、日本腦炎病毒、埃博拉病毒等多種病毒的免疫反應(yīng)中起重要作用［3］。ISG15蛋白可以調(diào)節(jié)宿主的干擾素信號通路及泛素化信號通路，產(chǎn)生抗病毒作用，另一方面也可通過與病毒蛋白直接作用，抑制病毒的生物活性，從而起到抑制病毒［8，11］。

近年研究提示，ISG15蛋白還參與腫瘤形成與致病的病理生理過程。ISG15蛋白在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)增高，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移。ISG15蛋白在人肝癌組織中高表達(dá)，且其表達(dá)水平與腫瘤的分化程度呈負(fù)相關(guān)，即高表達(dá)ISG15蛋白預(yù)示肝癌患者的轉(zhuǎn)移風(fēng)險更高、預(yù)后更差［12］?？鼓[瘤藥物維甲酸、喜樹堿等能刺激ISG15蛋白的表達(dá)，可增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性［13］。

ISG15蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)高于正常乳腺組織，且可以提示乳腺癌患者預(yù)后不良［14］，與本研究結(jié)果較為一致。本研究發(fā)現(xiàn)ISG15蛋白在乳腺癌組織中呈高水平表達(dá)，免疫組化評分為5.17±1.07。進(jìn)一步對ISG15蛋白在不同分子病理分型的乳腺癌中的分布進(jìn)行分析，結(jié)果顯示在Basal-like型的“三陰性”乳腺癌中表達(dá)最高6.20±1.13，高于其他三型（P＜0.05），這也與我們臨床上“三陰性”乳腺癌治療效果不佳、預(yù)后更差的情況相符合。進(jìn)一步對ISG15蛋白的表達(dá)與臨床病理參數(shù)進(jìn)行分析提示，ISG15蛋白表達(dá)與腫瘤的分期和HER-2表達(dá)情況相關(guān)，而與患者的年齡、是否絕經(jīng)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小ER、PR的表達(dá)情況均無明顯的相關(guān)關(guān)系（P＞0.05）。提示ISG15蛋白在腫瘤致病與轉(zhuǎn)移的過程中可能起一定的關(guān)鍵作用。

綜上所述，ISG15蛋白表達(dá)與腫瘤TNM分期及抑癌基因HER-2表達(dá)水平相關(guān)，ISG15蛋白水平對患者乳腺癌的病情評估和預(yù)后有一定的臨床價值，但I(xiàn)SG15蛋白在乳腺癌發(fā)病及轉(zhuǎn)移的相關(guān)具體作用機(jī)制尚需進(jìn)一步的研究。

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Expression level of ISG15 in breast cancer and its clinical significance

Wang Junwu1，Xia Tian2，Wu Xiaoting11.Gastrointestinal Surgery Center，West China Hospital of Sichuan University，Chengdu，Sichuan，610041，China；2.Department of Pathology，Hospital 452 of PLA，Chengdu，Sichuan，610021，China

Objective To study the expression level of ISG15 in breast cancer，its correlation with clinical pathology and its clinical significance.Methods A total of 105 breast cancer tissue samples from excision were collected to detect the expression level of ISG15 through Envision IHC and conduct tissue scoring to analyze the correlation between the expression level of ISG15 and the clinical pathological parameters in patients.Results The expression levels of ISG15 in breast cancer tissues were high，and the IHC scores were 5.17±1.07；the scores in the Basal-like"triple negative"breast cancer among the four subtypes of pathology genetics breast cancer were the highest 6.20±1.13（P＜0.05）；the expression levels of ISG15 were positively correlated with TNM neoplasm staging and negatively correlative with the expression levels of the cancer suppressor gene HER-2（P＜0.05）.The expression levels of ISG15 were not significantly related to the ages of patients，menopause or not，lymphatic metastasis，tumor size，and the expression levels of ER and PR （P＞0.05）.Conclusion The expression levels of ISG15 are related to the TNM staging of breast cancer tissues and the cancer suppressor gene HER-2，and have certain clinical value in the severity evaluation and prognosis of breast cancer.

breast cancer；ISG15；IHC；prognosis

R 737.9

A

1004-0188（2016）09-0988-04

10.3969/j.issn.1004-0188.2016.09.011

2016-05-06）

610041成都，四川大學(xué)華西醫(yī)院胃腸外科中心（王軍武，伍曉?。唤夥跑?52醫(yī)院病理科（夏 天）

伍曉汀，E-mail：wxt1@medmail.com.cn