謝玉惠，龍興浩

(重慶市沙坪壩區(qū)陳家橋醫(yī)院藥劑科,重慶　401331)

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離子色譜法同時(shí)測(cè)定附子理中丸中9種無(wú)機(jī)陰離子含量

謝玉惠，龍興浩

(重慶市沙坪壩區(qū)陳家橋醫(yī)院藥劑科,重慶401331)

目的建立同時(shí)測(cè)定附子理中丸中9種無(wú)機(jī)陰離子(氟離子、甲酸根離子、氯離子、亞硝酸根離子、溴離子、硝酸根離子、硫酸根離子、草酸根離子和磷酸根離子)含量的離子色譜法。方法采用Ion Pac AS11-HC陰離子交換分析色譜柱，ASRS 300 (250 mm×4 mm)陰離子抑制型電導(dǎo)檢測(cè)器檢測(cè)，7～40 mmol·L-1氫氧化鉀溶液梯度淋洗20 min，平衡5 min，流速為1.0 mL·min-1，柱溫為35 ℃，進(jìn)樣量為20 μL。結(jié)果9種無(wú)機(jī)陰離子達(dá)到良好分離，0.1～10 mg·L-1的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 0～0.999 8，精密度的RSD為0.5%～1.7%，重復(fù)性的RSD為0.8%～2.7%，穩(wěn)定性的RSD為1.1%～2.9%，平均加樣回收率為89.18%～106.81%間，RSD為0.51%～2.73%(n=6)，檢測(cè)限為0.004～0.023 mg·L-1，定量限為0.015～0.018 mg·L-1。結(jié)論該方法快速簡(jiǎn)單，選擇性好，靈敏度高，適用于附子理中丸中9種無(wú)機(jī)陰離子的含量測(cè)定。

附子理中湯;陰離子;硝酸鹽類;亞硝酸鹽類;氯化物;溴化物;氟化物;色譜法,離子交換

附子理中丸是中醫(yī)臨床治療脾陽(yáng)虛證患者的常用復(fù)方[1]，主要由附子(制)、黨參、白術(shù)(炒)、干姜、甘草等組成的常用中成藥[2]。該藥具有溫中健脾等功效，用于治療脾胃虛寒、烷腹冷痛、嘔吐腹瀉、手足不溫等癥狀[3]。該方來(lái)源于宋代《太平惠民和劑局方》，并收載于《中國(guó)藥典》(2010年)[4-5]。目前，該藥質(zhì)量控制的研究主要有高效液相色譜法或高效液相串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定烏頭類生物堿等有效成分[3,6]、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定附子理中丸中的化學(xué)成分[7]，薄層掃描法鑒定附子理中丸的單味藥材[8]、火焰原子吸收法或石墨爐原子吸收法測(cè)定無(wú)機(jī)元素的含量[9]和附子理中丸指紋圖譜[10]等。但是對(duì)于附子理中丸中陰陽(yáng)離子含量的測(cè)定尚未報(bào)道。根據(jù)現(xiàn)代藥理研究表明，復(fù)方中藥功效的發(fā)揮是多種活性成分共同作用的結(jié)果，中成藥的有效成分不僅包括有機(jī)成分也包括無(wú)機(jī)成分[11]，而無(wú)機(jī)成分中包括無(wú)機(jī)元素和陰陽(yáng)離子。為了全面控制附子理中丸的質(zhì)量和療效，本文研究附子理中丸的陰離子含量。

離子色譜法是目前認(rèn)為分析無(wú)機(jī)陰離子有效的色譜方法。該方法具有分析速度快、檢測(cè)靈敏度高和穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)[12]，廣泛應(yīng)用于環(huán)境、醫(yī)藥、食品等各個(gè)領(lǐng)域[13-14]，是測(cè)定多種無(wú)機(jī)陰離子重要分析方法，因此本文應(yīng)用離子色譜法測(cè)定附子理中丸中的無(wú)機(jī)陰離子含量。

1　儀器與材料

1.1儀器ICS-2100型離子色譜儀，AS40自動(dòng)進(jìn)樣器，ASRS 300(4 mm)抑制器(美國(guó)Dionex公司)；Sartorius-BT25S電子天平(德國(guó)賽多利斯儀器有限公司)；KQ-300DE超聲儀(昆山市儀器有限公司)；TGL-16高速離心機(jī)(江蘇省金壇正基儀器有限公司)；Milli-Q純水系統(tǒng)(美國(guó)Millipore公司)。

2　方法與結(jié)果

2.2樣品溶液將附子理中丸磨成粉末混合均勻，準(zhǔn)確稱取50 mg樣品于50 mL離心管中，加去離子水30 mL，超聲提取(500 W，40 kHz)10 min，每隔3 min振蕩一次，使固相樣品完全分散或溶解，取出樣品放置室溫后，再加20 mL去離子水稀釋并充分搖勻后離心(6 000 r·min-1)5 min，吸取上清液至另一個(gè)50 mL離心管中，加入20 mg 石墨碳烯吸附雜質(zhì)，渦旋5 min后用離心(6 000 r·min-1)5 min，提取上清液后用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾即得樣品溶液。

2.3色譜條件ICS-2100型離子色譜儀，戴安ASRS 300 4 mm陰離子抑制器，戴安公司Ion Pac AS11-HC陰離子交換分析柱(250 mm×4 mm，5 μm)和Ion Pac AG11-HC保護(hù)柱(50 mm×4 mm)；柱溫：35 ℃；抑制電流為75 mA，自循環(huán)抑制模式；檢測(cè)器：電導(dǎo)檢測(cè)器；檢測(cè)池溫度為30 ℃；流動(dòng)相：氫氧化鉀溶液梯度洗脫(0～20 min，7～40 mmol·L-1；梯度淋洗，平衡5 min)；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣體積：20 μL；混合標(biāo)準(zhǔn)品和樣品離子色譜圖如圖1所示。

A.標(biāo)準(zhǔn)品溶液

B.樣品溶液

圖1離子色譜圖

2.4方法學(xué)考察

2.4.1線性關(guān)系及其相關(guān)系數(shù)將線性范圍為0.1～10 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)工作液在“2.3”色譜條件下依次進(jìn)樣分析，以各離子的質(zhì)量濃度X(mg·L-1)為橫坐標(biāo)，峰面積Y(US)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示各離子的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 0～0.999 8，滿足檢測(cè)需要，具體結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　回歸方程及相關(guān)系數(shù)

2.4.3加標(biāo)回收率與精密度選擇某一批次的附子理中丸用于加標(biāo)回收率試驗(yàn)，將若干附子理中丸研磨成均勻的粉末，分別準(zhǔn)確稱取18份于50 mL離心管中，每份約為50 mg，分別加入0.1、0.5、2.5 mL的100 mg·L-1混合對(duì)照品溶液各6份，混合均勻后加去離子水30 mL，超聲(500 W，40 kHz)提取10 min，每隔3 min振蕩一次，使固相樣品完全分散或溶解。取出樣品放置室溫后，再加20 mL去離子水稀釋并充分搖勻后離心(6 000 r·min-1)5 min，吸取上清液至另一個(gè)50 mL離心管中，加入20 mg 石墨碳烯凈化，渦旋5 min后用離心(6 000 r·min-1)5 min，提取上清液后用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾即得樣品溶液，具體結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明各離子的回收率89.18%～106.81%，精密度0.51%～2.73%，滿足檢測(cè)分析的需要。

2.5樣品含量測(cè)定購(gòu)買(mǎi)6個(gè)批次的樣品，按照“2.2”項(xiàng)的樣品溶液制備方法處理，在“2.3”項(xiàng)的色譜條件分析測(cè)定，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。結(jié)果顯示，附子理中丸中各離子的質(zhì)量分?jǐn)?shù)在1.59～4.28 mg·g-1，具體結(jié)果見(jiàn)表3。

表2　加標(biāo)回收率與精密度試驗(yàn)

表3　附子理中丸分析結(jié)果/mg·g-1

注：“-”未檢測(cè)出。

3　討論

[1]唐漢慶,張文通,盧阿娜,等．附子理中丸對(duì)脾陽(yáng)虛證大鼠骨骼肌能荷影響的實(shí)驗(yàn)研究[J]．中國(guó)藥師,2010,13(12):1691-1694．

[2]張盼盼,魏文躍,李岑,等．附子理中丸中烏頭堿類毒性成分的富集及檢測(cè)[J]．華西藥學(xué)雜志，2012,27(5):563-566．

[3]索志榮,徐敏,秦海燕,等.LC-MS測(cè)定附子理中丸中 3種雙酯型生物堿含量[J]．藥物分析雜志,2010,30(12):2279-2281．

[4]徐新華,李能,鄭俠,等.附子理中丸對(duì)正常及脾虛型潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠長(zhǎng)期毒性研究[J].中國(guó)藥理與臨床,2012,28(2):15-17．

[5]國(guó)家藥典委員會(huì)．中國(guó)藥典(一部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:792．

[6]鐘碧華,陸帥.HPLC 法測(cè)定附子理中丸中烏頭堿的含量[J].海峽藥學(xué)，2014,26(11):115-117．

[7]劉慧,蘇娟,楊茜,等.采用GC-MS及RRLC-Q-TOFMS法分析中藥復(fù)方附子理中丸的化學(xué)成分[J].中國(guó)天然藥物,2011,9(4):267-273．

[8]彭飛城,丁野,鄭金鳳,等．附子理中丸(濃縮丸)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立[J]．中國(guó)藥師，2013，16(2)：256-258．

[9]張奇鳳，彭姍姍,倪敏,等．原子吸收法測(cè)定江西十種中成藥[J]．光譜學(xué)與光譜分析,1999，19(2):203．

[10] 任培培,孫國(guó)祥,孫麗娜.附子理中丸多波長(zhǎng)融合 HPLC指紋圖譜研究[J]．藥物分析雜志,2009,29(3):411-414．

[11] 周偉娥，楊立佼,謝巍,等.離子色譜法同時(shí)測(cè)定感冒清熱顆粒中9種無(wú)機(jī)陰離子[J]．中國(guó)藥房,2015,26(18)：2546-2549．

[12] Pappoe MK,Naeeni MH,Lucy CA.Bromate peak distortion in ion chromatography in samples containing high chloride concentrations[J].Journal of Chromatography A，2016,1444:57-63.

[13] 魏益華,張金艷,戴廷燦,等.離子色譜法測(cè)定地溝油和食用油中氯離子含量[J]．食品科學(xué)，2011,32(12):213-215．

[14] Liu J,He Q,Yang L,et al.Determination of trace and ultra-trace level bromate in water by large volume sample injection with enrichment column for on-line preconcentration coupled with ion chromatography[J].Chinese Journal of Chromatography,2015,33(10):1110-1114.

Determination of 9 inorganic anions in Fuzi Lizhong Pills by ion chromatography

XIE Yuhui,LONG Xinghao

(DepartmentofPharmacy,ChenjiaqiaoHospitalofShapingbaDistrict,Chongqing401331,China)

ObjectiveTo establish the method for simultaneous determination of nine inorganic anions (fluoride,formate,chloride,nitrite,bromide,nitrate,sulfate,radical,oxalate and phosphate) in Fuzi Lizhong Pills by ion chromatography．MethodsNine inorganic anions were determined by anion exchange column Ion Pac AS11-HC (250 mm×4 mm),and eluted by gradient hydroxide potassium in 7～40 mmol·L-1.The test took 20 min to determine targets and took 5 min to balance column.And the test was identified by suppressed conductivity detector ASRS 300 (4 mm) in the rate of 1.0 mL·min-1,and determined at the column temperature of 35 ℃ and the sampling volume of 20 μL.ResultsGood resolution can be achieved among the above mentioned nine inorganic anions．The nine inorganic anions showed a good linear relationship in the range of 0.1～10 mg·L-1,and their linear correlations over the investigated concentration were in the range of 0.999 0～0.999 8,while RSDs of precision were 0.5%～1.7%,RSDs of repeatability 0.8%～2.7%,and RSDs of stability 1.1%～2.9%.The average recoveries were 89.18%～106.81% with relative standard deviation between 0.51% and 2.73%,respectively.ConclusionsThe ion chromatography method is fast,simple,well selective,and well sensitive for the assay and quality control of nine inorganic anions in Fuzi Lizhong Pills.

Fuzi lizhong decoction;Anions;Nitrates;Nitrites;Chlorides;Bromides s;Fluorides;Chromatography,ion exchange

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.08.019

2016-05-20，

2016-07-05)