黃　浩，銀勝高，邱淑智，李紅菊，顧敬文（.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西南寧53000；.廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院，廣西南寧5300）

市售山銀花的質(zhì)量考察

黃浩1，銀勝高1，邱淑智1，李紅菊2，顧敬文1
（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西南寧530001；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院，廣西南寧530011）

［目的］檢測市售山銀花的質(zhì)量，為臨床安全用藥提供參考。［方法］采用高效液相色譜法對山銀花中綠原酸進(jìn)行含量測定；并按2015版《中華人民共和國藥典》方法對10批市售山銀花樣品中的水分、總灰分、酸不溶性灰分等進(jìn)行檢測。［結(jié)果］所測得的樣品中綠原酸的含量均超過2.0%；水分均小于12.0%；總灰分測定值均小于10.0%；酸不溶性灰分測定值均小于3.0%。［結(jié)論］10批市售山銀花樣品的各項(xiàng)指標(biāo)均符合2015版《中華人民共和國藥典》要求。

山銀花；綠原酸；水分；總灰分；酸不溶性灰分；HPLC；質(zhì)量控制

山銀花為忍冬科植物灰氈毛忍冬（Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.）、紅腺忍冬（Lonicera hypoglauca Miq.）、華南忍冬（Lonicera confuse DC.）或黃褐毛忍冬（Lonicera fulvotomentosa Hsu et S.C.Cheng）的干燥花蕾或帶初開的花，具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱的功效，臨床用于癰腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風(fēng)熱感冒、瘟病發(fā)熱［1］。山銀花為常用的中藥材之一，也是藥材市場銷售的重要品種。由于市場競爭激烈，中藥材以次充好、增加水分、藥材替換、人為加重等現(xiàn)象時有發(fā)生，為了考察市售山銀花的質(zhì)量情況，為臨床安全用藥提供參考，本實(shí)驗(yàn)以廣西玉林藥材市場上出售的山銀花為研究對象，按《中華人民共和國藥典》規(guī)定對其進(jìn)行質(zhì)量控制相關(guān)研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1試藥綠原酸對照品由中國生物制品檢定所提供（批號：110753-200413），10批山銀花樣品于2015年5月購自廣西玉林市藥材市場，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)廖月葵高級實(shí)驗(yàn)師鑒定，均為紅腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.的花或花蕾。

1.2試劑乙腈（色譜純，天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司）；甲醇（分析純，天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司）；超純水；其他試劑為分析純。

1.3儀器Agilent1200高效液相色譜儀（美國安捷倫），CG-16W高速微量離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠）；SB3200T超聲波清洗儀（上海能信超聲有限公司）；BP211D電子分析天平（德國塞多利斯）；101A-3E電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海實(shí)驗(yàn)儀器廠）；LSY電熱恒溫水浴鍋（北京市醫(yī)療設(shè)備廠）；SX2-4-10型箱式電阻爐（上海試驗(yàn)儀器廠有限公司）。

2　實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1水分測定取各樣品一式兩份，每份約5 g，精密稱定，將各稱定樣品平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5 mm，打開瓶蓋在100～105℃干燥5 h，將瓶蓋蓋好，移至干燥器中，冷卻30 min，再在上述溫度干燥1 h，冷卻，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5 mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品含水量（%）。結(jié)果如表1所示。

2.2總灰分測定將供試品粉碎，使能通過二號篩，混合均勻后，取供試品5 g，精密稱定，置熾灼至恒重的坩堝中，緩緩熾熱，注意避免燃燒，逐漸升高溫度至600℃，使完全灰化至恒重，根據(jù)殘?jiān)亓浚?jì)算供試品中灰分的含量（%）。結(jié)果如表1所示。

2.3酸不溶性灰分測定取上項(xiàng)所得的灰分，在坩堝中小心加入約10%鹽酸，用表面皿覆蓋坩堝，置水浴加熱10 min，表面皿用熱水5 ml沖洗，洗液并入坩堝中，用無灰濾紙濾過，坩堝內(nèi)的殘?jiān)盟从跒V紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止。濾渣連同濾紙移置同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重，根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品中酸不溶性灰分的含量（%）。結(jié)果如表1所示。

2.4綠原酸測定

2.4.1色譜條件色譜柱：Agilent液相C18色譜柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87）；柱溫：35℃；檢測波長：327 nm；流速：1 ml/min。

2.4.2試液的制備

2.4.2.1對照品溶液的制備取干燥至恒重的綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1 ml含88.4 μg的溶液，即得（10℃下避光保存）。

2.4.2.2供試品溶液的制備精密稱取各山銀花樣品粉末（過四號篩）0.5 g，精密稱定，分別置100 ml具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，稱定重量，超聲處理30 min，取出，放冷，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，精密吸取續(xù)濾液5 ml，置25 ml棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。

表1　山銀花水分、總灰分及酸不溶性灰分測定結(jié)果

2.4.2.3陰性溶液以上述實(shí)驗(yàn)同一50%甲醇溶液為陰性溶液，作為陰性對照。

2.4.3系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)分別精密吸取陰性溶液、對照品溶液、供試品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，如圖1所示。表明陰性對照在綠原酸出峰處無干擾。

2.4.4線性關(guān)系考察分別精密吸取綠原酸對照品溶液（0.0884 μg/μl）1 μl、2 μl、4 μl、8 μl、10 μl、12 μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，每樣品平行測定2次，以峰面積A對進(jìn)樣量C（μg）進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A= 1 434.2 C，r=0.9999，表明綠原酸在0.0884～1.3260 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4.5精密度試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液（1號樣品）10 μl，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測定綠原酸峰面積RSD為0.23%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.4.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取新鮮配制的本品供試品溶液（1號樣品），室溫下放置，分別在0 h、2 h、6 h、12 h、20 h、25 h、48 h精密進(jìn)樣10 μl，結(jié)果峰面積RSD為0.34%（n=7），表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

圖1　山銀花高效液相色譜圖

2.4.7重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號樣品（1號樣品），按供試品溶液的制備方法，制得6份供試品溶液，分別精密進(jìn)樣10 μl，每樣品平行測定2次，將測定所得的峰面積代入上述線性回歸方程中計(jì)算，得到該樣品中綠原酸的平均百分含量為3.62%，RSD為1.28%（n=6），表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.4.8加樣回收試驗(yàn)取已知含量（綠原酸的百分含量為3.58%）的山銀花樣品粉末（1號樣品），（過四號篩）約0.25 g、 0.50 g、0.75 g，每式重量3份，精密稱定，分別加入綠原酸對照品溶液10 ml、20 ml、30 ml，按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，并按上述方法進(jìn)行測定，測得平均回收率為98.59%，RSD=1.01%（n=9），表明本法具有良好的回收率。結(jié)果如表2所示。

表2　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.4.9綠原酸含量測定分別精密稱取各藥材粉末一式兩份，按2.4.2.2項(xiàng)制備成供試品溶液，進(jìn)樣10 μl按2.4.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果見表3。

表3　樣品含量測定結(jié)果表（n=2）

3　小結(jié)與討論

3.1本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對山銀花中綠原酸進(jìn)行含量測定，方法學(xué)考察結(jié)果良好，操作簡便，重復(fù)性好，表明該法可作為山銀花中綠原酸的質(zhì)量控制手段。

3.2本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，10批市售山銀花的水分含量為8.12%～9.02%；總灰分含量為5.28%～5.68%；酸不溶性灰分含量為0.16%～0.36%；綠原酸指標(biāo)性成分含量為2.58%～3.99%，含量最高的是湖南產(chǎn)的樣品，其次是廣西馬山產(chǎn)的樣品，最低的是欽州產(chǎn)的樣品。各項(xiàng)檢測指標(biāo)均符合藥典要求。

3.3本次檢測的10批市售山銀花有5批為熏硫貨品，檢測結(jié)果表明，熏硫山銀花中綠原酸含量明顯比同一產(chǎn)地未熏硫的山銀花中綠原酸含量低。中藥材熏硫是傳統(tǒng)中藥材的加工與儲藏技術(shù)，主要在流通貯藏階段起到干燥、防霉和殺蟲的作用。由于熏硫的藥材較容易保存，因此市場上流通的熏硫中藥材較為常見，但過度的熏硫會使藥材中二氧化硫殘留量超標(biāo)，對人體健康有一定影響［2］。因此，筆者建議加強(qiáng)科學(xué)監(jiān)管，避免濫用和過度使用硫熏法加工山銀花，大規(guī)模生產(chǎn)或具備條件的可采用脫水干燥法或烘烤法對山銀花進(jìn)行加工，這些方法加工得到的山銀花成色好，且藥效成分較高［3-5］。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015:28.

［2］程明，馮學(xué)鋒，楊連菊，等.硫磺熏制在中藥材加工和貯藏中的應(yīng)用探討［J］.中國中醫(yī)藥信息，2010，17（S）:18-19.

［3］王柳萍，辛寧，張守平，等.廣西不同產(chǎn)地與加工方法山銀花中綠原酸的含量比較［J］.時珍國醫(yī)國藥，2008，19（6）: 1370-1371.

［4］張玲容，周日寶.產(chǎn)地加工方法對山銀花藥材品質(zhì)的影響［J］.湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，31（3）:41-43.

［5］王芳，王小平，黎丹，等.不同加工方法對山銀花中主要成分含量的影響［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，31（4）:466-469.

（編輯陳明偉）

R284.1

A

2095-4441（2016）01－0075－03

2016-01-20

廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（編號：桂科重1298001-1-7）

銀勝高，碩士，副教授，從事中藥質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)研究，E-mail:51262905@qq.com