李秀琳，韓沖，唐玲榮，于洋洋，黨軍，李楠，李光

（中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院放療科，沈陽 110001）

·論著·

非小細胞肺癌hMOF蛋白表達與放療預后的關(guān)系

李秀琳，韓沖，唐玲榮，于洋洋，黨軍，李楠，李光

（中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院放療科，沈陽 110001）

目的研究hMOF蛋白在非小細胞肺癌（NSCLC）中表達情況及其與NSCLC放療預后的相關(guān)關(guān)系。方法采用SP免疫組化方法分別檢測59例接受放療的NSCLC患者中hMOF蛋白表達情況，分析其與臨床病理特征及NSCLC放療預后的相關(guān)關(guān)系。結(jié)果59例NSCLC患者中hMOF蛋白高表達30例，高表達率50.85%。臨床分期、hMOF蛋白表達水平是NSCLC放療的獨立預后因素。結(jié)論hMOF蛋白表達水平與NSCLC放療預后相關(guān)，是影響NSCLC放療預后的指標。

非小細胞肺癌；放療預后；hMOF

放射治療是晚期非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）的主要治療手段，但其5年生存率不足17%［1］。臨床研究發(fā)現(xiàn)，多種因素影響NSCLC的放療療效和預后，深入了解NSCLC放療預后影響因素，準確預測放療療效，對實現(xiàn)NSCLC個體化放療及提高放療療效有極大幫助。研究［2～6］表明，人類MOF（human MOF，hMOF）蛋白在多種腫瘤組織中存在異常表達。本研究通過檢測NSCLC病理標本中hMOF蛋白表達水平，探討其與NSCLC放療預后的相關(guān)關(guān)系，為NSCLC放療預后提供預測指標。

1　材料與方法

1.1一般臨床資料

收集2008年3月至2010年10月本院收治的初次行根治性放療的NSCLC患者59例。其中男46例，女13例；年齡41～83歲（中位年齡61歲）；鱗癌23例，腺癌36例。參考2005年AJCC分期標準［7］：Ⅱ期17例，ⅢA期26例，ⅢB期16例。48例患者接受了依托泊苷聯(lián)合順鉑或多西他賽聯(lián)合順鉑方案同期化療，其中25例患者接受了2個周期的同期化療，23例患者接受了1個周期的同期化療。

1.2放射治療

所有患者均行根治性三維適形或調(diào)強放療，患者在真空墊上仰臥，抽氣真空定型，熱塑體膜固定。進行C4～L2椎體下緣范圍5 mm厚螺旋CT增強掃描，將掃描信息傳至ADAC Pinnacle 9.0治療計劃系統(tǒng)，由2名臨床醫(yī)師依據(jù)掃描圖像等資料確定大體腫瘤區(qū)（gross tumor volume，GTV），包括肺原發(fā)病灶、縱膈陽性淋巴結(jié)；GTV外擴0.5～0.7 cm為臨床靶區(qū)（clinical target volume，CTV），不做縱膈淋巴引流區(qū)預防性照射；通過4D-CT或X線模擬定位機確定呼吸動度內(nèi)靶區(qū)（internal target volume，ITV）為Z軸0.5～0.6 cm，其他方向0.2 cm；計劃靶區(qū)（planning target volume，PTV）為ITV外擴0.5 cm。需要保護敏感器官（organ at risk，OAR）包括雙肺、脊髓、食管、心臟等。計劃評估：95%等劑量曲線包繞PTV，雙肺V20≤30%、平均肺劑量（mean lung dose，MLD）≤15 Gy。直線加速器常規(guī)分割放療，照射劑量達到40 Gy時再次行CT定位掃描，將圖像與初治圖像融合，根據(jù)瘤體變化情況更改腫瘤靶區(qū)，追加照射劑量，總劑量60～66 Gy，5次/周。

1.3免疫組織化學染色

病理組織標本均以10%甲醛固定，石蠟包埋封存，并經(jīng)HE染色確診。采用SP免疫組化方法分別檢測59例NSCLC組織中hMOF表達情況。計數(shù)單位視野陽性細胞占總細胞的百分比，輔以計算機圖像分析儀分析結(jié)果。染色判定標準：高倍鏡下（× 400）隨機選擇5個視野，以腫瘤細胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞。染色強度：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；染色數(shù)量：無陽性細胞為0分，陽性細胞簇＜10%為1分，10%～30%為2分，＞30%～50%為3分，＞50%～75%為4分。染色強度積分與數(shù)量積分相乘，得分0分定為陰性（-），1～4分為弱陽性（+），5～8分為陽性（++），9～12分為強陽性（+++）［8］。本研究中采用免疫組化評分≤4分（低表達）和＞4分（高表達）2組進行比較。

1.4統(tǒng)計學分析

采用統(tǒng)計學SPSS 19.0軟件包進行數(shù)據(jù)處理。根據(jù)數(shù)據(jù)特征，免疫組化結(jié)果采用χ2檢驗進行計數(shù)資料差異性比較，生存率分析采用Kaplan-Meier法分析，不同變量的生存差異采用Log-rank檢驗，預后因素檢驗采用COX模型。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1NSCLC組織中hMOF蛋白表達情況（表1）

在59例接受根治性放療的NSCLC組織中，hMOF蛋白高表達30例，高表達率為50.85%。hMOF蛋白高表達組與低表達組總體臨床特征和治療方案較均衡。

2.2hMOF蛋白表達水平與NSCLC放療預后的相關(guān)關(guān)系

隨訪截止至2015年10月，59例中失訪1例，隨訪率98.31%，失訪病例自失訪之日起按死亡計算。NSCLC患者放療后1年、3年、5年總生存率分別為59.32%（35/59）、23.73%（14/59）、15.25%（9/59）。全組患者放療后中位生存時間為15.0個月，hMOF蛋白高表達組中位生存時間為13.0個月，低于hMOF蛋白低表達組中位生存時間32.0個月，HR=8.056 （1.77～4.08），P=0.005。

NSCLC放療預后單因素分析顯示：臨床分期、hMOF蛋白表達水平與NSCLC放療預后相關(guān)；性別、年齡、吸煙情況、病理類型、放療劑量、同期化療與預后無相關(guān)關(guān)系，見表2。

表2　59例NSCLC Log-rank單因素預后分析Tab.2　The Log-rank univariate analysis of factors in 59 cases of non-small cell lung cancer

將單因素預后相關(guān)因素代入COX模型進行多因素分析顯示：臨床分期、hMOF蛋白表達水平是NSCLC放療的獨立預后因素。見表3，圖1、2。

3　討論

放射治療在Ⅱ期、Ⅲ期NSCLC的綜合治療中占有非常重要的地位。近年來隨著放療技術(shù)的不斷

提高和發(fā)展，接受放療的腫瘤患者局部控制率明顯提高，使部分患者生存獲益，但局部晚期NSCLC患者的5年生存率仍不足17%［9］。臨床研究［10，11］發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織內(nèi)某些蛋白表達水平影響NSCLC的放療療效和預后，深入了解NSCLC放療預后影響因素，在放療前對NSCLC患者的預后做出準確預測，對于實現(xiàn)NSCLC個體化、高效治療具有重要意義。

表3　NSCLC患者放療預后因素的相關(guān)性分析Tab.3　Analysis of re lationship of p rognostic factors in patients w ith non-sm all cell lung cancer afte r rad iotherapy

圖1　不同臨床分期患者放療生存曲線Fig.1　Survival curves o f patients w ith different c linical stage after radiotherapy

圖2　不同hMOF表達患者放療生存曲線Fig.2　Survival curves of patients w ith different expression of hMOF after radiotherapy

hMOF蛋白是乙酰化酶（histoneacetyl-transferases，HATs）中MYST（Moz-Ybf2/Sas3-Sas2-Tip60）家族成員之一。hMOF蛋白可通過調(diào)節(jié)H4K16乙?；絹砭S持染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和核結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定，或通過ATM作用影響細胞對輻射所致的DNA損傷的修復能力［12］；也有研究［13］認為hMOF蛋白通過P53乙?；瘏⑴cDNA損傷修復及細胞凋亡的調(diào)控，來影響腫瘤細胞的放射敏感性。

文獻報道［14］hMOF蛋白在新鮮冰凍NSCLC組織中陽性表達率為50.0%，而在石蠟切片中陽性表達率為37.6%，肺癌組織中hMOF mRNA水平較正常肺組織高8倍；另一項研究［2］發(fā)現(xiàn)，hMOF蛋白在NSCLC組織中陽性表達率32.6%，在正常組織中的陽性表達率2.3%。多篇文獻［2，3，14］證實，在基因和蛋白水平上NSCLC腫瘤組織中hMOF表達明顯高于癌旁正常組織。

本研究發(fā)現(xiàn)，在接受放療的Ⅱ、Ⅲ期NSCLC中hMOF蛋白高表達組中位生存時間明顯低于hMOF蛋白低表達組，hMOF蛋白高表達的NSCLC放療后死亡風險是低表達的10.389倍，hMOF蛋白表達水平是NSCLC放療的獨立預后因素。Chen等［3］研究也發(fā)現(xiàn)NSCLC組織中hMOF蛋白表達升高，且hMOF蛋白高表達者手術(shù)后生存率低的結(jié)果。研究［15］發(fā)現(xiàn)經(jīng)15 Gy照射后，hMOF蛋白表達上調(diào)的細胞中未修復的DNA斷裂數(shù)目，較hMOF表達下調(diào)的細胞少，其放射敏感性低。但也有文獻［16，17］報道，包括乳腺癌、結(jié)腸癌在內(nèi)的多種腫瘤組織內(nèi)hMOF蛋白表達水平均較正常組織顯著降低，且在隨訪中發(fā)現(xiàn)hMOF蛋白低表達者手術(shù)后的生存率較高表達者低，與NSCLC迥然不同。由此可見，hMOF蛋白在不同腫瘤中表達情況不完全一致，與不同腫瘤的預后相關(guān)性也存在差異。本研究結(jié)果因例數(shù)相對較小，存在臨床特征有差異或存在選擇偏倚等，還需要進一步擴大樣本量研究證實。

同類腫瘤不同個體之間對相同的治療方案反應不同，其內(nèi)在機制尚不清楚。hMOF蛋白表達有可能成為預測NSCLC放療療效的分子標記物，并通過調(diào)控hMOF蛋白表達水平，進而提高腫瘤細胞的放射敏感性，使hMOF成為提高放療敏感性的作用靶點，為NSCLC治療策略提供依據(jù)。

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（編輯于溪）

Correlation Study between hMOFExpression and Prognosisin Patientswith Non-smallCell Lung Cancer after Radiotherapy

LIXiu-lin，HANChong，TANGLing-rong，YUYang-yang，DANGJun，LINan，LIGuang
（DepartmentofRadiation Therapy，TheFirstHospital，ChinaMedicalUniversity，Shenyang 110001，China）

ObjectiveTo investigate the hMOF protein expression in non-small cell lung cancer and explore the relationship between its expression and radiotherapy prognosis.MethodsImmunohistochemical staining was used to detect the hMOF expression in 59 cases of non-small cell lung cancer after radiotherapy.The relationship between hMOF expression with clinicopathological and radiation prognosis was analyzed.Results Among the59 casesofnon-smallcelllungcancer tissues，therewere30 cases found tobehighexpressionwithhMOF.The rateofpositiveexpression of hMOF in non-small cell lung cancer were 50.85%.Clinical stage and hMOF expression were independent predictors for non-small cell lung cancer.ConclusionThe expression of hMOF had a positive correlation with the radiation prognosis in non-small cell lung cancer，which could be used asaprognostic indicatorofradiotherapy.

non-small cell lung cancer；radiotherapy prognosis；hMOF

R734.2

A

0258-4646（2016）04-0340-05

10.12007/j.issn.0258-4646.2016.04.013

沈陽市科技計劃（F14-158-9-33）

李秀琳（1985-），女，醫(yī)師，本科.

李光，E-mail：13804058616@163.com

2015-12-21

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