漆 秦，方漢軍，李鋒華，許 成，劉富強，牟建軍，廉秋芳

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·論著·

內(nèi)皮祖細胞移植對鹽敏感性高血壓大鼠心肌重構(gòu)的影響研究

漆 秦，方漢軍，李鋒華，許 成，劉富強，牟建軍，廉秋芳

目的分析內(nèi)皮祖細胞(EPCs)移植對鹽敏感性高血壓大鼠心肌重構(gòu)的影響。方法2015年1月—2016年2月于陜西省醫(yī)學實驗動物中心實驗室進行實驗，選取Dahl鹽敏感大鼠66只，按隨機數(shù)字表法分為正鹽組、高鹽組及EPCs移植組，各22只。正鹽組大鼠每日予以0.3%氯化鈉飲食，高鹽組及EPCs移植組大鼠每日予以8%氯化鈉飲食，其中EPCs移植組大鼠尾靜脈注入CM-Dil標記的EPCs；3組大鼠均連續(xù)喂養(yǎng)6周。觀察第3代EPCs形態(tài)，比較3組大鼠心肌重構(gòu)指標〔前壁厚度、后壁厚度、左心室舒張末期內(nèi)徑(LVDd)、左心室收縮末期內(nèi)徑(LVDs)、短軸縮短率(FS)、左心室射血分數(shù)(LVEF)〕、新生毛細血管數(shù)、血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)和CXC趨化因子配體16(CXCL16)基因及蛋白表達情況，同時觀察3組大鼠CM-Dil標記陽性細胞及心肌纖維化情況。結(jié)果第3代EPCs生長迅速、純度高、形態(tài)單一。正鹽組、EPCs移植組大鼠前壁厚度、FS、LVEF高于高鹽組，LVDs、LVDd低于高鹽組(P<0.05)；EPCs移植組大鼠前壁厚度、FS、LVEF高于正鹽組，LVDs低于正鹽組(P<0.05)。正鹽組、EPCs移植組大鼠新生毛細血管數(shù)多于高鹽組(P<0.05)；EPCs移植組大鼠新生毛細血管數(shù)多于正鹽組(P<0.05)。正鹽組、EPCs移植組大鼠VEGF mRNA相對表達量高于高鹽組，CXCL16 mRNA相對表達量低于高鹽組(P<0.05)；EPCs移植組大鼠VEGF mRNA相對表達量高于正鹽組，CXCL16 mRNA相對表達量低于正鹽組(P<0.05)。正鹽組、EPCs移植組大鼠VEGF蛋白相對表達量高于高鹽組，CXCL16蛋白相對表達量低于高鹽組(P<0.05)；EPCs移植組大鼠VEGF蛋白相對表達量高于正鹽組，CXCL16蛋白相對表達量低于正鹽組(P<0.05)。EPCs組大鼠可見CM-Dil標記陽性細胞，正鹽組和高鹽組大鼠未見CM-Dil標記陽性細胞。正鹽組大鼠未發(fā)生心肌纖維化，高鹽組及EPCs移植組大鼠均出現(xiàn)不同程度的心肌纖維化；與高鹽組比較，EPCs移植組心肌纖維化程度較輕，巨噬細胞浸潤較少。結(jié)論EPCs移植可延緩鹽敏感性高血壓大鼠心肌重構(gòu)，增加大鼠心肌毛細血管數(shù)并上調(diào)VEGF基因及蛋白的表達，下調(diào)CXCL16基因及蛋白的表達，有利于減少心肌纖維化。

高血壓；大鼠，近交Dahl；干細胞；心室重構(gòu)

漆秦，方漢軍，李鋒華，等.內(nèi)皮祖細胞移植對鹽敏感性高血壓大鼠心肌重構(gòu)的影響研究[J].實用心腦肺血管病雜志，2016，24(8)：9-15.[www.syxnf.net]

QI Q，F(xiàn)ANG H J，LI F H，et al.Impact of endothelial progenitor cells transplantation on myocardial remodelling of salt-sensitive hypertensive rats[J].Practical Journal of Cardiac Cerebral Pneumal and Vascular Disease，2016，24(8)：9-15.

研究表明，鹽是高血壓發(fā)生的重要影響因素，而人們的鹽敏感性并不相同[1-4]。研究表明，我國高血壓患者約占總?cè)丝跀?shù)的20%，其中鹽敏感性高血壓約占50%[5-7]。鹽敏感性高血壓的發(fā)生與外界因素及患者自身功能改變等有關(guān)[8-13]。鹽敏感性可引起血壓大幅度波動，晝夜差值減小等，導(dǎo)致患者出現(xiàn)心、腦、腎等臟器功能損傷。研究表明，鹽敏感性可導(dǎo)致多種慢性病的發(fā)生[14-16]，其是引發(fā)心血管疾病的重要影響因素[17-18]。長期高血壓可導(dǎo)致患者心臟前后負荷增加，血流動力學改變，同時使機體的神經(jīng)-內(nèi)分泌調(diào)節(jié)系統(tǒng)發(fā)生改變，造成心肌重構(gòu)[19-21]。心肌重構(gòu)是由于部分有生理功能的心肌丟失或無功能的瘢痕形成造成的，其常見的病理改變?yōu)樾募±w維化；另外，心肌重構(gòu)是高血壓患者發(fā)生心血管事件的危險因素。最新研究發(fā)現(xiàn)，纖維化過程中常伴有炎性細胞浸潤，且其與趨化因子密切相關(guān)[22]。目前，趨化因子介導(dǎo)的炎性反應(yīng)與長期高血壓患者心肌細胞纖維化間的關(guān)系尚不明確，尤其是鹽敏感性高血壓。內(nèi)皮祖細胞(EPCs)在不同的環(huán)境中可向不同方向分化[23]，當予以某種特定刺激時，EPCs可以被動員，并向血管損傷部位進行定向遷移、分化及修復(fù)等。近年來有學者提出利用細胞重塑來改善患者心肌重構(gòu)的概念。研究發(fā)現(xiàn)，EPCs移植在血管性及缺血損傷性疾病治療等方面具有重要作用[24]。本研究旨在分析EPCs移植對鹽敏感性高血壓大鼠心肌重構(gòu)的影響，現(xiàn)報道如下。

1　材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1實驗動物選取SPF級健康成年雄性Dahl鹽敏感大鼠66只，體質(zhì)量(155±5)g，周齡6周，由陜西省醫(yī)學實驗動物中心實驗室提供，動物編號：41003100000664；于該中心實驗室清潔級屏蔽環(huán)境中喂養(yǎng)，實驗前采用正常飼料(含鹽0.5%)喂養(yǎng)，自由飲水；健康指標均符合要求，實驗時對動物的處置方式符合動物倫理學要求。

1.1.2實驗試劑兔單克隆抗CXCL16抗體(貨號ab119350)購自美國Abcam公司；Masson trichrome staining試劑(貨號HT15-1KKT)購自美國Sigma公司；DAB試劑盒購自中國邁新生物技術(shù)公司。

1.1.3實驗儀器Vev0770TM高分辨小動物超聲成像系統(tǒng)及RMV707B型高頻超聲探頭購自加拿大visualsonies公司，全自動無創(chuàng)血壓測量儀購自成都泰盟科技有限公司，液氮容器購自樂山市東亞機電工貿(mào)有限公司，電泳儀、電泳槽、凝膠玻璃板、固定夾購自北京六一儀器廠，UVP凝膠圖像掃描儀購自BIO-RAD 公司，水合氯醛購自中天實驗儀器有限公司，Masson trichrome staining試劑購自美國Sigma公司。

1.2分組與建立模型2015年1月—2016年2月于陜西省醫(yī)學實驗動物中心實驗室進行實驗。將Dahl鹽敏感大鼠按隨機數(shù)字表法分為正鹽組、高鹽組及EPCs移植組，各22只。正鹽組大鼠每日予以0.3%氯化鈉飲食，高鹽組及EPCs移植組大鼠每日予以8%氯化鈉飲食。3組大鼠均按國際動物飼養(yǎng)中心的標準連續(xù)喂養(yǎng)6周。采用尾套法，應(yīng)用大鼠血壓儀測量收縮壓，當收縮壓>160 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)時表示建模成功，EPCs移植組大鼠尾靜脈注入CM-Dil標記的EPCs 3×106/L，連續(xù)3 d。

1.3觀察指標觀察第3代EPCs的形態(tài)，比較3組大鼠心肌重構(gòu)指標〔前壁厚度、后壁厚度、左心室舒張末期內(nèi)徑(LVDd)、左心室收縮末期內(nèi)徑(LVDs)、短軸縮短率(FS)、左心室射血分數(shù)(LVEF)〕、新生毛細血管數(shù)、血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)和CXC趨化因子配體16(CXCL16)基因及蛋白表達情況，觀察3組大鼠CM-Dil標記陽性細胞及心肌纖維化情況。

1.3.1第3代EPCs將冷凍保存的EPCs復(fù)蘇后重懸于新鮮的EPCs細胞培養(yǎng)液中，多數(shù)細胞生長良好；選取第3代EPCs細胞培養(yǎng)約10 d可見條索樣結(jié)構(gòu)形成，移植后2周，細胞長滿培養(yǎng)瓶底壁，形成典型“鵝卵石樣”外觀；細胞按1∶2傳代培養(yǎng)4～5 d長滿瓶底。采用倒置相差顯微鏡(BX51型，Olympus公司，日本)動態(tài)觀察單個核細胞形態(tài)及生長狀態(tài)并拍照。

1.3.2心肌重構(gòu)指標采用超聲心動圖檢測大鼠心肌重構(gòu)指標，移植2周后采用2%異氟烷麻醉大鼠，調(diào)節(jié)夾鼠板溫度，保持在36～38 ℃，心率為200～300次/min；固定大鼠，行檢查前準備，待大鼠呼吸和心率穩(wěn)定后進行檢查；準確定位并移動探頭，使圖像清楚顯示。

1.3.3新生毛細血管數(shù)移植2周后處死大鼠并迅速取出心肌組織，石蠟包埋，切片，厚度為4 μm，并進行免疫組化染色，抗體為小鼠抗兔vWF因子；每只大鼠取5個較好的切片，隨機選5個視野進行觀察并計數(shù)，后取平均值為最終結(jié)果。由病理學專家進行監(jiān)督且全過程在雙盲下完成。

1.3.4VEGF和CXCL16基因及蛋白表達采用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測轉(zhuǎn)染后基因的表達情況。按Trizol說明書進行操作，取細胞總RNA。VEGF上游引物：5′-CTGCTCTCTTGGGTCCACTGG-3′，下游引物：5′-CACCGCCTTGGCTTGTCACAT-3′；CXCL16上游引物：5′-AAAGAGCTCACTCGTCCCAA-3′，下游引物：5′-CAAGCTTCATTCTTGGCTC-3′；內(nèi)參照β-actin上游引物：5′-CTGGAACGGCGAAGGTGACAG-3′，下游引物：5′-GGTGGCTTTTAGGATGGCAAG-3′。配置25 μl反應(yīng)體系，其中模板cDNA 100 ng，Taq酶0.125 μl；反應(yīng)條件：94 ℃變性2 min，重復(fù)33個循環(huán)后于94 ℃變性30 s，58 ℃/55 ℃(β-actin)退火30 s，72 ℃延伸30 s，最后一次反應(yīng)時延伸時間設(shè)置為10 min；采用1.5%瓊脂糖凝膠電泳擴增產(chǎn)物，后應(yīng)用UVP凝膠成像，檢測灰度值并進行統(tǒng)計學分析。

采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測VEGF和CXCL16蛋白的表達，依據(jù)試劑盒的操作步驟稀釋標準品，制作標準曲線，并按照說明書中的上樣量對各孔進行上樣，置于室溫下溫育，共2 h，后應(yīng)用緩沖液徹底洗板，共5次；向各孔中添加一抗工作液，置于室溫下1 h，后重復(fù)上述洗板步驟；添加酶標抗體，再次重復(fù)上述步驟；向各孔添加底物，將其置于黑暗環(huán)境中10 min，添加顯色液，后添加終止液并迅速放入儀器中判讀結(jié)果。

1.3.5CM-Dil標記陽性細胞將取出的心肌組織迅速冷凍處理，應(yīng)用切片機將其切成5 μm的薄片，緩慢移至載玻片上并完全貼敷，添加丙酮固定并進行觀察；采用熒光顯微鏡觀察CM-Dil標記陽性細胞，CM-Dil標記陽性細胞呈紅色熒光。

1.3.6心肌纖維化采用7HE及Masson三色法檢測心肌纖維化情況。THE法：移植EPCs后繼續(xù)喂養(yǎng)2周，從3組大鼠中分別隨機取出5只，處死后收集整個心臟組織，行浸蠟包埋處理，后應(yīng)用切片機切片，貼敷于載玻片上，行脫蠟及浸水處理；將標本置于蘇木精染液中15 min，后應(yīng)用乙醇分化5 s，應(yīng)用氨水進行反藍，共10 min；行伊紅染色，共5 min，應(yīng)用系列濃度乙醇脫水，并采用二甲苯進行透明，共10 min，封片后置于光鏡下觀察。

Masson三色法：移植2周后，3組大鼠中分別隨機取出5只，處死后收集整個心臟、浸蠟包埋及浸水等，置于Boutins液中過夜，次日取出并用流水持續(xù)沖洗，共3 h，后應(yīng)用鐵蘇木精染色15～20 min，再次洗滌，共30 s，應(yīng)用0.5%乙醇進行分化，并用氨水進行反藍處理；應(yīng)用Biebrich Sclarlet-Acid染色，共10～15 min，流水沖洗30 s，置于磷酸溶液中2～3 min，苯胺藍中12～13 min，再次流水沖洗；脫水、透明、封片等處理后進行觀察。

2　結(jié)果

2.1第3代EPCs的形態(tài)第3代EPCs生長迅速、純度高、形態(tài)單一，詳見圖1。

圖1　第3代EPCs的形態(tài)(免疫熒光染色，×200)

2.2心肌重構(gòu)指標3組大鼠前壁厚度、后壁厚度、LVDd、LVDs、FS、LVEF比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；正鹽組、EPCs移植組大鼠前壁厚度、FS、LVEF高于高鹽組，LVDs、LVDd低于高鹽組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；EPCs移植組大鼠前壁厚度、FS、LVEF高于正鹽組，LVDs低于正鹽組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表1)。

2.3新生毛細血管數(shù)正鹽組大鼠新生毛細血管數(shù)為(782.5±36.3)條，高鹽組大鼠新生毛細血管數(shù)為(411.3±30.4)條，EPCs移植組新生毛細血管數(shù)為(824.7±48.2)條。3組大鼠新生毛細血管數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學意義(F=748.11，P<0.05)；正鹽組、EPCs移植組大鼠新生毛細血管數(shù)多于高鹽組，差異有統(tǒng)計學意義(q值分別為44.633、49.701，P<0.05)；EPCs移植組大鼠新生毛細血管數(shù)多于正鹽組，差異有統(tǒng)計學意義(q=5.074，P<0.05)。

2.4VEGFmRNA、CXCL16mRNA表達情況3組大鼠VEGFmRNA、CXCL16mRNA相對表達量比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；正鹽組、EPCs移植組大鼠VEGFmRNA相對表達量高于高鹽組，CXCL16mRNA相對表達量低于高鹽組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；EPCs移植組大鼠VEGFmRNA相對表達量高于正鹽組，CXCL16mRNA相對表達量低于正鹽組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表2，圖2)。

Table2ComparisonofrelativeexpressionquantityofVEGFmRNAandCXCL16mRNAamongthethreegroups

組別只數(shù)VEGFmRNACXCL16mRNA正鹽組221.19±0.11a1.25±0.10a高鹽組220.72±0.082.01±0.11EPCs移植組221.82±0.12ab0.80±0.09abF值611.12817.42P值0.0000.001

注：與高鹽組比較，aP<0.05，與正鹽組比較，bP<0.05；VEGF=血管內(nèi)皮細胞生長因子，CXCL16=CXC趨化因子配體16

注：β-actin=β-肌動蛋白；VEGF=血管內(nèi)皮細胞生長因子，CXCL16=CXC趨化因子配體16

圖23組大鼠VEGF mRNA、CXCL16 mRNA的電泳結(jié)果

Figure 2Electrophoretic results of VEGF mRNA and CXCL16 mRNA of the three groups

2.5VEGF、CXCL16蛋白表達情況3組大鼠VEGF、CXCL16蛋白相對表達量比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；正鹽組、EPCs移植組大鼠VEGF蛋白相對表達量高于高鹽組，CXCL16蛋白相對表達量低于高鹽組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；EPCs移植組大鼠VEGF蛋白相對表達量高于正鹽組，CXCL16蛋白相對表達量低于正鹽組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表3，圖3)。

Table3ComparisonofrelativeexpressionquantityofVEGFproteinandCXCL16proteininthethreegroups

組別只數(shù)VEGFCXCL16正鹽組221.90±0.12a2.01±0.11a高鹽組221.23±0.092.42±0.12EPCs移植組222.38±0.13ab1.46±0.10abF值558.88419.57P值0.0020.000

注：與高鹽組比較，aP<0.05，與正鹽組比較，bP<0.05

圖3　3組大鼠VEGF、CXCL16蛋白的電泳結(jié)果

Figure 3Electrophoretic results of VEGF protein and CXCL16 protein of the three groups

2.6CM-Dil標記陽性細胞EPCs組大鼠可見CM-Dil標記陽性細胞，正鹽組和高鹽組大鼠未見CM-Dil標記陽性細胞，詳見圖4。

2.7心肌纖維化正鹽組大鼠未發(fā)生心肌纖維化，高鹽組及EPCs移植組大鼠均出現(xiàn)不同程度的心肌纖維化；與高鹽組比較，EPCs移植組心肌纖維化程度較輕，且巨噬細胞浸潤較少，詳見圖5。

3　討論

近年來，隨著人們生活水平的提高及生活方式的改變，高血壓發(fā)病率呈逐年上升趨勢，嚴重時可損傷患者心、腦、腎或其他器官功能[25-27]。據(jù)調(diào)查顯示，機體鹽攝入量與高血壓的發(fā)生密切相關(guān)，若連續(xù)30年鹽日攝入量>6 g，則收縮壓升高約8 mm Hg，且心血管事件發(fā)生率明顯升高[28]。研究表明，鹽敏感性高血壓發(fā)生率較高，且易出現(xiàn)其他器官損傷[29-34]；同時，鹽敏感性高血壓患者心血管事件發(fā)生率較高[35-40]。隨著患者發(fā)生高血壓時間的延長及心臟負荷的加重，易引發(fā)心肌肥厚及心功能障礙，嚴重時可導(dǎo)致心力衰竭[41-43]。采用干細胞移植修復(fù)受損心肌細胞為心肌重構(gòu)患者帶來了曙光。EPCs來源于外周血、骨髓及臍血等多種組織，來源廣泛。

表1　3組大鼠心肌重構(gòu)指標比較±s)

注：與高鹽組比較，aP<0.05，與正鹽組比較，bP<0.05；LVDd=左心室舒張末期內(nèi)徑，LVDs=左心室收縮末期內(nèi)徑，F(xiàn)S=短軸縮短率，LVEF=左心室射血分數(shù)

注：A為正鹽組，B為高鹽組，C為EPCs移植組

圖43組大鼠CM-Dil標記陽性細胞(×200)

Figure 4CM-Dil marked positive cells of the three groups

注：A為正鹽組，B為高鹽組，C為EPCs移植組

圖53組大鼠心肌纖維化情況(Masson三色法，×200)

Figure 5Myocardial fibrosis of the three groups

本研究采用性別、周齡相同的大鼠制造鹽敏感性高血壓模型，且各組大鼠體質(zhì)量間無差異，故排除了一般因素的影響。本研究結(jié)果顯示，正鹽組、EPCs移植組大鼠前壁厚度、FS、LVEF高于高鹽組，LVDs、LVDd低于高鹽組；EPCs移植組大鼠前壁厚度、FS、LVEF高于正鹽組，LVDs低于正鹽組，提示EPCs可改善鹽敏感性高血壓大鼠心肌重構(gòu)。正鹽組、EPCs移植組大鼠新生毛細血管數(shù)多于高鹽組；EPCs移植組大鼠新生毛細血管數(shù)多于正鹽組，提示EPCs可增加鹽敏感性高血壓大鼠毛細血管數(shù)。正鹽組、EPCs移植組大鼠VEGF mRNA表達高于高鹽組，CXCL16 mRNA表達低于高鹽組，EPCs移植組大鼠VEGF mRNA表達高于正鹽組，CXCL16 mRNA表達低于正鹽組；正鹽組、EPCs移植組大鼠VEGF蛋白表達高于高鹽組，CXCL16蛋白表達低于高鹽組，EPCs移植組大鼠VEGF蛋白表達高于正鹽組，CXCL16蛋白表達低于正鹽組，提示EPCs可提高鹽敏感性高血壓大鼠VEGF基因及蛋白的表達，降低CXCL16基因及蛋白的表達。炎性因子浸潤可能引發(fā)心肌重構(gòu)，且趨化因子作為一種小分子蛋白，參與了各種類型的炎性反應(yīng)及免疫應(yīng)答。CXCL16屬于趨化因子家族，其在平滑肌中可誘導(dǎo)炎癥，在Dhal鹽敏感性高血壓大鼠心肌重構(gòu)中發(fā)揮著重要作用。

綜上所述，EPCs移植可改善鹽敏感性高血壓大鼠的心肌重構(gòu)，增加大鼠心肌毛細血管數(shù)，提高VEGF基因及蛋白的表達，降低CXCL16基因及蛋白的表達，減少心肌纖維化的發(fā)生，有一定的臨床參考價值。但本研究未說明心肌重構(gòu)的發(fā)病機制，需進一步研究探討。

作者貢獻：漆秦參與實驗設(shè)計，并進行實驗實施、撰寫論文初稿；方漢軍、李鋒華、許成進行具體實驗及資料收集；劉富強進行資料整理、分析數(shù)據(jù)；牟建軍進行實驗指導(dǎo)；廉秋芳進行實驗設(shè)計、質(zhì)量控制及審校。

本文無利益沖突。

[1]牟建軍.鹽與高血壓研究進展[J].中國醫(yī)學前沿雜志(電子版)，2011，39(2)：70-73.

[2]HUA Q，REN H R.High salt and hypertension[J].Journal of Capital Medical University，2011，32(5)：617-625.

[3]夏鵬程，何振仿，丁宏.社區(qū)老年高血壓患者高血壓相關(guān)知識及行為方式分析[J].安徽醫(yī)學，2012，33(4)：489-491.

[4]花學美，陳宏平.兩種健康教育方式對社區(qū)高血壓患者血壓和認知行為的影響[J].中華全科醫(yī)學，2012，10(2)：248.

[5]尤洪帥，魏萬林，張靈，等.膳食中鈉鉀含量對血壓及靶器官的影響[J].中國老年學雜志，2013，33(22)：5764-5766.

[6]和秀娟.高血壓患者低鹽飲食認知行為調(diào)查及影響因素探討[J].心血管病防治知識：學術(shù)版，2016，6(2)：10-12.

[7]勇琴歌，于建輝，杜彩霞.老年高血壓患者鹽敏感性認知的調(diào)查[J].解放軍護理雜志，2010，27(7)：508-509.

[8]DOAEI S，GHOLAMALIZADEH M.The association of genetic variations with sensitivity of blood pressure to dietary salt： A narrative literature review[J].ARYA Atheroscler，2014，10(3)：169-174.

[9]HAN Y L，LI Y L，JIA L X，et al.Reciprocal interaction between macrophages and T cells stimulates IFN-γ and MCP-1 production in Ang II-induced cardiac inflammation and fibrosis[J].Plos One，2012，7(5)：e35506.

[10]殷麗天，李媛，李莉，等.感覺神經(jīng)損傷性鹽敏感性高血壓大鼠心、腎AT1R的表達[J].中國比較醫(yī)學雜志，2011，21(8)：10-14.

[11]牟建軍，任珂宇.鹽敏感性高血壓的診斷和機制[J].診斷學理論與實踐，2012，11(6)：543-546.

[12]田亞平.氫氯噻嗪治療鹽敏感性高血壓臨床體會[J].基層醫(yī)學論壇，2013，15(20)：2711-2712.

[13]聞加升，張嫻，顏新林，等.吲達帕胺治療鹽敏感性高血壓效果的研究[J].心血管病防治知識：學術(shù)版，2014，4(10)：26-28.

[14]MA L，WANG W，ZHAO Y，et al.Combination of amlodipine plus angiotensin receptor blocker or diuretics in high-risk hypertensive patients： a 96-week efficacy and safety study[J].Am J Cardiovasc Drugs，2012，12(2)：137-142.

[15]高峰，周靜，萬招飛，等.調(diào)節(jié)血糖代謝對鹽敏感性高血壓患者鹽敏感性的影響[J].心血管康復(fù)醫(yī)學雜志，2012，21(3)：270-272.

[16]ARONOW W S.Current approaches to the treatment of hypertension in older persons[J].Postgrad Med，2012，124(1)：50-59.

[17]奧唐奈，何斌斌.鈉攝入與心血管疾病相關(guān)性數(shù)據(jù)為何不一致[J].糖尿病臨床，2013，7(7)：322-329.

[18]郭曉雷，馬吉祥，顏流霞，等.山東省居民食鹽攝入量與血壓的關(guān)系[J].中華預(yù)防醫(yī)學雜志，2014，48(2)：119-123.

[19]胡詠梅，劉小蓉，趙思勤，等.原發(fā)性高血壓患者鹽敏感性與血管重構(gòu)的探討[J].中華老年心腦血管病雜志，2010，12(7)：590-592.

[20]郝麗娜.高齡高血壓患者的鹽敏感性及血管重構(gòu)相關(guān)性分析[J].安徽醫(yī)學，2013，34(12)：1821-1822.

[21]曲紅培，胡楊，黃秀萍.高血壓患者中不同左心室構(gòu)型的結(jié)構(gòu)和功能變化與血漿BNP的相關(guān)因素分析[J].中國社區(qū)醫(yī)師：醫(yī)學專業(yè)，2014，30(36)：152-153.

[22]ZHAO Q，GU D，HIXSON J E，et al.Common variants in epithelial sodium channel genes contribute to salt sensitivity of blood pressure： The GenSalt study[J].Circ Cardiovasc Genet，2011，4(4)：375-380.

[23]LEI Y，POH K K.Enhancing endothelial progenitor cell for clinical use[J].世界干細胞雜志：英文版(電子版)，2015，7(6)：894-898.

[24]SAMBATARO M，SEGANFREDDO E，CANAL F，et al.Prognostic significance of circulating and endothelial progenitor cell markers in type 2 diabetic foot[J].Int J Vasc Med，2014(2014)：589412.

[25]徐中山.鹽敏感性高血壓患者血壓波動情況與晝夜尿鈉排泄量的臨床觀察[J].心腦血管病防治，2015，15(4)：281-283.

[26]孫榮，易東，談世進，等.性激素對卵巢切除自發(fā)性高血壓大鼠心臟組織結(jié)構(gòu)的影響[J].山東醫(yī)藥，2016，56(17)：31-33.

[27]田孝東.血府逐瘀湯聯(lián)合西藥對老年高血壓45例患者心室重構(gòu)狀態(tài)的影響觀察[J].中國醫(yī)藥指南，2015，13(20)：224-225.

[28]賈芳芳.鹽敏感性高血壓[J].人人健康，2013，32(21)：39.

[29]韓玨，李祖勝，范敏華.社區(qū)成年人鹽敏感性高血壓的影響因素研究[J].中國全科醫(yī)學，2015，18(34)：4196-4201.

[30]申風娟，王騰飛，王越淇，等.鹽敏感性高血壓及其易感基因相關(guān)性的研究進展[J].中國老年學雜志，2015，35(16)：4730-4731.

[31]牟建軍，張濤，方媛，等.血壓鹽敏感者早期血管內(nèi)皮功能改變研究[J].中華心血管病雜志，2011，39(1)：61-64.

[32]MU J J，ZHANG T，F(xiàn)ANG Y，et al.Vascular endothelial function in salt sensitive and non-salt sensitive subjects[J].Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi，2011，39(1)：61-64.

[33]沈玉婧，曾偉芳，李華，等.血醛固酮水平與高血壓患者靶器官損害的關(guān)系[J].診斷學理論與實踐，2012，11(6)：576-579.

[34]劉葉舟，武晶晶，張玲，等.原發(fā)性高血壓患者鹽敏感性的影響因素和急性鹽負荷后血壓及鈉鉀代謝的變化[J].中華心血管病雜志，2013，41(12)：1015-1019.

[35]JBS3 Board.Joint British Societies′ consensus recommendations for the prevention of cardiovascular disease (JBS3)[J].Heart，2014(2)：ii1-67.

[36]KHALESI S，SUN J，BUYS N，et al.Effect of probiotics on blood pressure：a systematic review and meta-analysis of randomized，controlled trials[J].Hypertension，2014，64(4)：897-903.

[37]LYNCH A I，TANG W，SHI G，et al.Epistatic effects of ACE I/D and AGT gene variants on left ventricular mass in hypertensive patients： the HyperGEN study[J].J Hum Hypertens，2012，26(2)：133-140.

[38]GU D，KELLY T N，HIXSON J E，et al.Genetic variants in the renin-angiotensin-aldosterone system and salt sensitivity of blood pressure[J].J Hypertens，2010，28(6)：1210-1220.

[39]YOSHINAGA M，TODA N，TAMURA Y，et al.Japanese traditional miso soup attenuates salt-induced hypertension and its organ damage in Dahl salt-sensitive rats[J].Nutrition，2012，28(9)：924-931.

[40]GILDEA J J，LAHIFF D T，SCIVER R E V，et al.A linear relationship between the ex-vivo sodium mediated expression of two sodium regulatory pathways as a surrogate marker of salt sensitivity of blood pressure in exfoliated human renal proximal tubule cells：the virtual renal biopsy[J].Clin Chim Acta，2013(421)：236-242.

[41]WADEI H M，TEXTOR S C.The role of the kidney in regulating arterial blood pressure[J].Nat Rev Nephrol，2012，8(10)：602-609.

[42]朱桂平，王卓，林忠偉，等.MMP-9/TIMP-1在自發(fā)性高血壓大鼠左室重構(gòu)中的表達及血脂康膠囊的調(diào)控作用[J].中國老年學雜志，2015，35(11)：2946-2949.

[43]KAMEZAKI F，TSUTSUI M，TAKAHASHI M，et al.Plasma levels of nitric oxide metabolites are markedly reduced in normotensive men with electrocardiographically determined left ventricular hypertrophy[J].Hypertension，2014，64(3)：516-522.

(本文編輯：李潔晨)

Impact of Endothelial Progenitor Cells Transplantation on Myocardial Remodelling of Salt-sensitive Hypertensive Rats

QIQin，F(xiàn)ANGHan-jun，LIFeng-hua，XUCheng，LIUFu-qiang，MVJian-jun，LIANQiu-fang.

DepartmentofCardiacVascularSurgery，XianyangHospitalofYan′anUniversity，Xianyang712000，China

LIANQiu-fang，DepartmentofCardiology，XianyangHospitalofYan′anUniversity，Xianyang712000，China；E-mail：314126474@qq.com

ObjectiveTo investigate the impact of endothelial progenitor cells(EPCs)transplantation on myocardial remodelling of salt-sensitive hypertensive rats.MethodsFrom January 2015 to February 2016，this experiment was carried out in the laboratory of Shaanxi Medical Laboratory Animal Center.A total of 66 salt-sensitive Dahl rats were selected and divided into A group，B group and C group according to random number table，each of 22 rats.Rats of A group were fed with 0.3% sodium chloride diet，rats of B group and C group were fed with 0.9% sodium chloride diet，meanwhile rats of C group received caudal vein injection of CM-Dil marked EPCs；rats of the three groups were continuously fed for 6 weeks.Cellular forms of the third generation of EPCs were observed，index of myocardial remodelling (anterior wall thickness，posterior wall thickness，LVDd，LVDs，F(xiàn)S and LVEF)，number of new blood capillary，gene expression and protein expression of VEGF and CXCL16 were compared among the three groups，CM-Dil marked cells and incidence of myocardial fibrosis were observed.ResultsThe third generation of EPCs growed quickly with high-purity and single-form.Anterior wall thickness，F(xiàn)S and LVEF of A group and C group were statistically significantly higher than those of B group，while LVDs and LVDd of A group and C group were statistically significantly lower than those of B group(P<0.05)；anterior wall thickness，F(xiàn)S and LVEF of C group were statistically significantly higher than those of A group，while LVDs of C group was statistically significantly lower than that of A gruop(P<0.05).Number of new blood capillary of A group and C group was statistically significantly more than that of B group，respectively(P<0.05)，meanwhile number of new blood capillary of C group was statistically significantly more than that of A group(P<0.05).Relative expression quantity of VEGF mRNA of A group and C group was statistically significantly higher than that of B group，respectively，while relative expression quantity of CXCL16 mRNA of A group and C group was statistically significantly lower than that of B group，respectively(P<0.05)；relative expression quantity of VEGF mRNA of C group was statistically significantly higher than that of A group，while relative expression quantity of CXCL16 mRNA of C group was statistically significantly lower than that of A group(P<0.05).Relative expression quantity of VEGF protein of A group and C group was statistically significantly higher than that of B group，respectively，while relative expression quantity of CXCL16 protein of A group and C group was statistically significantly lower than that of B group，respectively(P<0.05)；relative expression quantity of VEGF protein of C group was statistically significantly higher than that of A group，while relative expression quantity of CXCL16 protein of C group was statistically significantly lower than that of A group(P<0.05).CM-Dil marked positive cells were detected in C group，but not in A group or B group.No rat of A group found myocardial fibrosis，while rats of B group and C group found varying degrees of myocardial fibrosis，and the degree of myocardial fibrosis of C group was statistically significantly milder than that of B group，with less macrophages infiltration.ConclusionEPCs transplantation can delay the myocardial remodelling of salt-sensitive hypertensive rats，increase the myocardial blood capillary，up-regulate the gene expression and protein expression of VEGF，down-regulate the gene expression and protein expression of CXCL16，is helpful to reduce the incidence of myocardial fibrosis.

Hypertension；Rats，inbred Dahl；Stem cells；Ventricular remodeling

國家自然科學基金(81070218)；陜西省自然科學基礎(chǔ)研究計劃(2016JM8123)

712000陜西省咸陽市，延安大學咸陽醫(yī)院心臟大血管外科(漆秦，方漢軍，李鋒華，許成)，心內(nèi)科(廉秋芳)；陜西省人民醫(yī)院心內(nèi)科(劉富強)；西安交通大學第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科(牟建軍)

廉秋芳，712000陜西省咸陽市，延安大學咸陽醫(yī)院心內(nèi)科；E-mail：314126474@qq.com

R 544.1

A

10.3969/j.issn.1008-5971.2016.08.003

2016-06-07；

2016-08-10)

【編者按】亞洲人群為鹽敏感性高血壓高發(fā)人群，中國北方地區(qū)較南方地區(qū)多見；據(jù)統(tǒng)計，我國高血壓患者約占總?cè)丝跀?shù)的20%，其中鹽敏感性高血壓約占50%。鹽敏感性高血壓患者血壓波動較大，易導(dǎo)致心、腦、腎等臟器功能損傷，且長時間血壓升高會增加心臟前后負荷，造成血流動力學及神經(jīng)-內(nèi)分泌調(diào)節(jié)異常，進而引發(fā)心肌重構(gòu)，嚴重影響患者身體健康，甚至會威脅患者生命安全。近年來，隨著對干細胞研究的深入，干細胞移植修復(fù)受損心肌細胞為心肌重構(gòu)的治療提供了新方法。漆秦等所在課題組在既往研究基礎(chǔ)上通過建立鹽敏感性高血壓大鼠模型而探討內(nèi)皮祖細胞(EPCs)移植對其心肌重構(gòu)的影響，結(jié)果表明移植EPCs可改善鹽敏感性高血壓大鼠心肌重構(gòu)，減少心肌纖維化的發(fā)生，具有一定臨床參考價值，敬請關(guān)注！