孫麗霞，楊雷亮，，吳穎兒，李華平，管 維，邱德義，陳定虎，王章根（.中山出入境檢驗檢疫局，廣東 中山 58400；.華南農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院，廣東 廣州 5064）

廣東省煙草主栽品種病毒病抗性評價

孫麗霞1，楊雷亮1，2，吳穎兒1，李華平2，管 維1，邱德義1，陳定虎1，王章根1
（1.中山出入境檢驗檢疫局，廣東 中山 528400；
2.華南農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院，廣東 廣州 510642）

為測定廣東省7個煙草主栽品種對TMV和CMV的抗性情況，采用TMV侵染的普通煙葉系列稀釋液（CK、1∶10、1∶100、1∶1 000、1∶10 000、1∶100 000）作濃度梯度，選用K326作中感品種對照，機械摩擦接種法接種7個煙草品種（K326、云煙87、RG17、9601、9032、MSK326、MS96-7）。同時，對不同煙草品種選用評價濃度1∶40稀釋度進行CMV接種，對接種后20 d的病情指數(shù)和9 d的發(fā)病率進行分析。結果表明：從各項自然及接種TMV后的農(nóng)藝產(chǎn)量性狀來看，云煙87、RG17和9601表現(xiàn)相對較好。其中以1∶10 000稀釋度作為評價濃度進行攻毒接種，接種70 d后的病情指數(shù)： MS96-7最低為81.06，9032最高為95.46；接種30 d后統(tǒng)計發(fā)病率： MS96-7最低為71.21%，RG17最高為100.00%。其中MS96-7表現(xiàn)為中抗，云煙87 、RG17、9601、9032、K326和MSK326表現(xiàn)為中感；云煙87抗CMV擴展特性最強，9601 抗CMV擴展特性最弱；RG17為CMV高感品種，其余5 個（含新育成的品種MS96-7、MSK326）為CMV中感至高感間的品種?？傮w上，沒有一個品種表現(xiàn)對TMV免疫或高抗水平，同時，也沒有一個品種表現(xiàn)對CMV免疫、高抗或中抗水平。

廣東??；煙草；品種；病毒病；抗性；評價

孫麗霞，楊雷亮，吳穎兒，等 . 廣東省煙草主栽品種病毒病抗性評價［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學，2016，43（7）：18-24.

由煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）和黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）引起的煙草病毒病是廣東省煙區(qū)主要病害之一［1］。幼年期或大田初期感染，植株矮小，不能開片，損失達5%～70%；旺長期感染，損失達30%～50%［2-7］。廣東省現(xiàn)有的煙草主栽品種中，K326品質最好，烤制的煙葉香味濃郁，田間抗性表現(xiàn)相對較好，是對TMV中感、對CMV中感的品種；云煙87抗青枯病，煙葉葉梗細，易于烤制，高等級煙葉比例高，深受大埔和蕉嶺等地煙農(nóng)喜愛；RG17對TMV、CMV為高感或中感品種，抗青枯病，但品質差，葉梗粗大，不易烤制，在部分青枯病發(fā)生嚴重的地區(qū)多有種植；9601和9032不抗青枯病，但植株高大，產(chǎn)量高，在始興及南雄、五華的部分地區(qū)有種植。MS96-7、 MSK326為剛推廣不久的品種。

王鳳龍等［8］鑒定了922 份煙草種質資源對CMV的室內苗期抗病性，篩選出16 份高抗種質、165 份中抗種質、416 份中感種質和325份高感種質，未發(fā)現(xiàn)免疫種質，并建議K326或RG17作為室內鑒定的CMV中感對照。陳學平等［9］進行了包含K326在內的7 個煙草品種對TMV 抗性差異比較研究。許美玲［10］以K326為對照，從田間鑒定評價初步篩選出的10 種質中又篩選出抗TMV品種2 個、中抗TMV品種3 個。蔣乾坤等［11］通過大田抗性鑒定中煙90、黃筋蔸、OX2028、RG8、V2、云煙201、云煙87煙草品種對普通煙草花葉病的感病性，得到OX2028和云煙201病情指數(shù)較低，可進行示范性推廣。楊華兵等［12］通過塑料大棚內摩擦接種，分析了21個煙草品種的癥狀特征和對辣椒葉脈斑駁病毒的抗性，MD609、巴斯瑪1號和云煙97為感病，MSK326、MS云煙87、MS云煙85、紅花大金元等18個供試品種為高感。

目前廣東省烤煙種植面積約為2萬hm2，主要分布在粵北韶關的南雄、始興以及粵東梅州的梅縣、五華、大埔等市縣。廣東省煙葉產(chǎn)區(qū)主要分布在粵北韶關市，按煙田面積由多到少依次為南雄、始興、樂昌、乳源等縣（縣級市）；其次在粵東梅州市，按煙田面積由多到少依次為五華、梅縣、大埔、蕉嶺等縣?，F(xiàn)有田間主栽普通煙草面積從多到少依次為K326、云煙87、9601、9032、RG17、MS96-7等品種。隨著國際市場和煙草工業(yè)對煙葉品質要求的提高以及氣候變化、作物布局和栽培制度等的改變，我國煙草病蟲害的發(fā)生呈上升趨勢，有必要針對廣東省煙草主栽品種病毒病抗性進行評價，但目前尚未有人對廣東省現(xiàn)有的7 個煙草主栽品種進行過全面的TMV和CMV抗性評價工作。本研究旨在明確現(xiàn)有主栽品種對煙草花葉病的抗性情況及接種后農(nóng)藝產(chǎn)量性狀的差異，指導生產(chǎn)。

1　材料和方法

1.1試驗材料

心葉煙（Nicotiana glutinosa）由華南農(nóng)業(yè)大學植物病毒實驗室保存。哈瓦娜38號煙草（Nicotiana tabacum var. havana 38）種子由廈門華僑亞熱帶植物引種園明艷林老師贈。普通煙草品種K326、云煙87、RG17、9601、9032、MSK326、MS96-7在2013年由廣東省煙草南雄科學研究所贈，并于當年開始育苗和接種試驗。

TMV普通株系、CMV-37番茄株系由華南農(nóng)業(yè)大學植物病毒研究室保存。

1.2試驗方法

1.2.1TMV抗性評價接種試驗 以枯斑法接種心葉煙作濃度參照，采用TMV侵染的普通煙哈瓦娜38號嫩葉進行1∶10系列稀釋，分別為1∶10、1∶100、1∶1 000、1∶10 000、1∶100 000，采用空白接種緩沖液為對照，以K326作中感品種對照。選用生長期一致的3～4葉期各煙草品種進行摩擦接種，每個品種每個濃度梯度接種6 棵。這7個品種包括K326、云煙87、RG17、9601、9032、MSK326和MS96-7，其中后兩種為新育成品種。除濃度梯度對照外的處理統(tǒng)一用評價濃度1∶10 000進行接種，6次重復，每個重復11 棵煙草，每隔3 d重復接種1次，共3次，接種后30 d和70 d，按調查分類標準觀測嚴重度，并拍攝記錄癥狀，最后測量每棵供試煙草的株高、三片腰葉的縱橫徑、總葉數(shù)和鮮葉總重。

綜合對比接種與否（即1∶10 000接種濃度與CK之間）的農(nóng)藝產(chǎn)量性狀各指標差別（受損量及受損率等），以確定各品種自然農(nóng)藝產(chǎn)量性狀差異、接種發(fā)病后農(nóng)藝產(chǎn)量性狀差異和農(nóng)藝產(chǎn)量性狀耐病性差異，再以K326為對照種，最終得出各品種的病理抗性劃分。

受損量=接種后農(nóng)藝產(chǎn)量性狀指標值-未接種CK農(nóng)藝產(chǎn)量性

1.2.2CMV抗性評價接種試驗 采用空白接種緩沖液為空白對照，選用K326作中感品種對照。選用生長期一致的3～4 葉期各煙草品種，進行評價濃度（1∶40稀釋度）常規(guī)摩擦接種，共設4 個重復，每個重復5 棵各煙草品種，每隔3 d重復接種1次，共3次，接種后9、20 d按調查分類標準觀測嚴重度，并拍攝記錄癥狀。

1.2.3分類調查方法標準和品種抗性等級劃分 嚴重度分級標準（以整株為單位）：0級：全株無??；1級：心葉脈明或輕微花葉，或上部1/3（含1/3）葉片花葉，但不變形；2級：1/3～1/2（含1/2）葉片花葉、或少數(shù)葉片變形，或主脈變黑，病株矮化為正常株的1/3左右；3級：1/2以上但未全株葉片花葉、變形或主側脈壞死，或病株矮化為正常煙株的1/2左右；4級：全株葉片花葉、嚴重變形或壞死，病株矮化為正常株高的1/4～3/4。

病情指數(shù)（DI）計算公式：

品種抗性等級劃分為免疫、高抗、中抗、中感和高感5級。各品種抗性分級以K326作為中感對照差異性比較得出。

用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，采用鄧肯氏新復極差檢驗法進行多重比較。

2　結果與分析

2.1TMV抗性評價

2.1.1各煙草品種的病情指數(shù) 從病情指數(shù)分析發(fā)現(xiàn)，各品種對TMV并未表現(xiàn)特別高的抗性。從接種后70 d的病情指數(shù)比較結果（圖1）發(fā)現(xiàn)，這7個品種的病情指數(shù)由高到低依次為9032、RG17、9601、K326、MSK326、云煙87、MS96-7。其中，MS96-7這一新育成的品種對TMV抗性最強，與其他6 個品種具有顯著差異；9032與MS96-7、MSK326、云煙87相比，具有顯著差異，抗性最差；其余5 種品種，除MSK326和云煙87兩個品種和MS96-7、9032都存在顯著差異之外，5 個品種之間抗性差異不顯著，總體介于中間水平。

圖1 TMV接種后70 d各煙草品種病情指數(shù)

從發(fā)病率情況分析可知，各煙草品種對TMV的抗擴展性都表現(xiàn)不佳，接種后30 d發(fā)病率都高達85%以上。雖然各品種在接種后的前30 d無明顯差異，但在接種30 d后，MS96-7發(fā)病率明顯低于其他品種。接種后30 d的發(fā)病率顯著性比較結果（圖2）顯示，發(fā)病率由高到低依次為RG17、云煙87、9601、K326、MSK326、9032和MS96-7。其中，MS96-7這一新品種抗TMV擴展特性最強，與其他6 個品種具有顯著差異；其他6 個品種間則不存在顯著差異。

圖2 TMV接種后30 d各煙草品種發(fā)病率

可見，云煙87、RG17、9601、K326這4個品種和新育成的MSK326都屬于中感品種，另一新育成的品種MS96-7則屬于中抗水平。在抗和高抗品種缺乏的前提下，在TMV危害較重的煙區(qū)，推薦種植MS96-7這一較為中抗的品種。

2.1.2各煙草品種接種后的腰葉縱徑 從表1可以看出，接種后70 d，各品種腰葉縱徑由小到大依次為K326、9601、MSK326、MS96-7、9032、RG17和云煙87，且RG17、云煙87與其他品種具有顯著差異；而未接種病毒的對照各品種差異顯著性比較縱徑由小到大依次為K326、MSK326、MS96-7、9601、云煙87、9032、RG17，且K326、MSK326與其他品種具有顯著差異。從這個變化比較受損率可知：云煙87是顯著抗TMV所造成的縱徑變短的品種，K326是比較不抗TMV所造成的縱徑變短的品種。

2.1.3各煙草品種接種后的腰葉橫徑 從表2可以看出，由同一評價濃度不同品種間各品種比較可知接種后70 d，橫徑由小到大依次為K326、9601、MSK326、MS96-7、9032、RG17和云煙87，且RG17、云煙87與其他品種具有顯著差異；而未接種病毒的對照各品種差異顯著性比較橫徑由小到大依次為K326、MSK326、MS96-7、9601、云煙87、9032和RG17，且RG17與其他品種具有顯著差異?？梢?，云煙87是顯著抗TMV所造成的橫徑變短的品種。

表1 TMV對各煙草品種腰葉縱徑（cm）的影響（接種后70 d）

表2 TMV對各煙草品種腰葉橫徑（cm）的影響（接種后70 d）

2.1.4各煙草品種接毒后的鮮葉總重 從表3可以看出，接毒后70 d，鮮葉總重由少到多依次為K326、9032、MSK326、云煙87、MS96-7、RG17和9601，且9032與其他品種都具有顯著性差異；而未接種病毒的對照各品種差異性比較鮮葉總重由少到多依次為云煙87、MSK326、 RG17、MS96-7、K326、9032和9601，且9601 和MS96-7、云煙87具有顯著性差異。故從這個變化比較受損率可知：云煙87是顯著抗TMV所造成的鮮葉總重變少的品種，K326和9032是比較不抗TMV所造成的鮮葉總重變少的品種。

2.1.5各煙草品種接毒后的單葉鮮重 從表4可以看出，接毒后70 d，單葉鮮重由少到多依次排序為K326、MSK326、MS96-7、9032、RG17、9601和云煙87，且RG17、9601、云煙87三者之間無顯著性差異，但與其他品種具有顯著性差異；而未接種病毒的對照各品種差異性比較單葉鮮重由少到多排列依次為：云煙87、MSK326、K326、RG17、9601、9032和MS96-7，且9032和云煙87具有顯著性差異，其余未見顯著性差異。故從這個變化比較受損率可知：云煙87是顯著抗TMV所造成的單葉鮮重變少的品種，而K326是比較不抗TMV所造成的單葉鮮重變少的品種。

表3 TMV對各煙草品種鮮葉總重（g）的影響（接種后70 d）

表4 TMV對各煙草品種單葉鮮重的影響（接種后70 d）

2.1.6發(fā)病對各煙草品種農(nóng)藝產(chǎn)量性狀的影響 比較不發(fā)病的各品種對照農(nóng)藝產(chǎn)量性狀指標可知：株高云煙87顯著較大；RG17、云煙87的腰葉縱徑顯著較大；RG17的腰葉橫徑顯著較大；9601鮮葉總重顯著較大；9032、RG17和云煙87腰葉縱橫徑比顯著較大；9032單葉鮮重顯著較大；總葉數(shù)9601顯著較多；綜上，從不發(fā)病時的各項農(nóng)藝產(chǎn)量性狀來看，云煙87、RG17、9601和9032表現(xiàn)較好，推薦作為花葉病發(fā)生較少的地區(qū)參考用種。

比較接種發(fā)病后的各品種主要農(nóng)藝產(chǎn)量性狀可知：RG17、云煙87的腰葉縱徑顯著較大；RG17、云煙87、9601和MS96-7的腰葉橫徑顯著較大；9601和MS96-7鮮葉總重顯著較大；RG17 、9601和云煙87單葉鮮重顯著較大。綜上，從接種發(fā)病后的各項農(nóng)藝產(chǎn)量性狀來看，云煙87、RG17、9601和MS96-7表現(xiàn)較好。

2.1.7各煙草品種農(nóng)藝產(chǎn)量性狀耐病性分析 接種后的農(nóng)藝產(chǎn)量性狀與自然狀態(tài)下相比較，表現(xiàn)較好的都是云煙87、RG17和9601。從個體水平上分析TMV與煙草互作，對比接種與否各品種腰葉縱橫徑、鮮葉總重和單葉鮮重的受損率可知：互作中云煙87表現(xiàn)出來的受損率顯著最低，在TMV與其互作時表現(xiàn)出較好的農(nóng)藝產(chǎn)量性狀耐病性。表明云煙87具有較好的對TMV的農(nóng)藝產(chǎn)量性狀耐病性。

2.2CMV抗性評價

2.2.1CMV接種后20 d各煙草品種的病情指數(shù) 最終病情指數(shù)的計算取接種后20 d最后一次的觀測值，對于用評價接種濃度1∶40稀釋度評價各品種對CMV抗性的可行性分析驗證同TMV。經(jīng)過顯著性比較，結果發(fā)現(xiàn)：評價濃度可行，各煙草品種對CMV并未表現(xiàn)特別高的抗性。由接種后20 d的病情指數(shù)比較結果（圖3）發(fā)現(xiàn)，這7個煙草品種的病情指數(shù)由高到低依次為RG17、云煙87、MSK326、9032、9601、K326和MS96-7。其中，MS96-7對CMV抗性最強，與其他除K326外的5 個品種具有顯著性差異；K326與RG17也具有顯著性差異；除MS96-7和RG17外的5 個品種間不具有顯著性差異。以K326為CMV中感品種參照，則新育成的MS96-7為CMV中感品種，RG17為CMV高感品種，其余（含新育成的品種MSK326）為CMV中感至高感間的品種。

圖3 CMV接種后20 d各煙草品種病情指數(shù)

2.2.2CMV接種后9 d各煙草品種的發(fā)病率 從發(fā)病率來看，各品種對CMV的抗擴展性都表現(xiàn)不佳，接種后11 d發(fā)病率基本達到100%。接種后9 d，云煙87發(fā)病率明顯低于其他品種，通過各品種的發(fā)病率顯著性比較結果（圖4）發(fā)現(xiàn)，發(fā)病率由高到低依次為9601、K326、MS96-7、MSK326、RG17、9032和云煙87。

圖4 CMV接種后9 d各煙草品種發(fā)病率

其中，云煙87這一品種抗CMV擴展特性最強，與K326、MS96-7、9601具有顯著性差異；9601這一品種抗CMV擴展特性最弱，與云煙87、9032具有顯著性差異；9032和云煙87之間不具有顯著性差異，僅和9601具有顯著性差異；除云煙87和9601外其他5 個品種間則不存在顯著性差異。

3　結論與討論

栽培抗病品種是防治植物病害最經(jīng)濟、最有效的途徑，也是防治病毒病的最根本措施，而系統(tǒng)的品種抗性評價是進行選育種和推廣種植的基礎。本試驗7個主栽品種病毒抗性評價在廣東省是首次進行，也未見我國其他省份相關文獻報道，新品種MS96-7和MSK326這兩個雜種F1代品種的病毒抗性情況更未見報道。

廣東省當前主栽品種的抗性評價情況：（1）總體上，沒有一個品種表現(xiàn)對TMV免疫或高抗水平，其中MS96-7表現(xiàn)為中抗，云煙87、RG17、9601、9032、K326和MSK326表現(xiàn)為中感。（2）廣東省缺乏免疫、高抗或中抗CMV的主栽品種，RG17為CMV高感品種，其余5 個為CMV中感至高感間的品種。（3）從各項農(nóng)藝產(chǎn)量性狀來看，云煙87、RG17和9032表現(xiàn)較好。云煙87具有較好的對TMV的農(nóng)藝產(chǎn)量性狀耐病性。

本研究驗證了K326可作為室內鑒定的CMV中感對照，但卻在RG17的CMV抗性上與王鳳龍等［8］的結果有差異。王鳳龍等報道RG17可作為CMV中感品種，而本研究測定其為高感品種。究其原因可能是實驗條件的不同，導致了抗性表現(xiàn)不同；也可能是兩次實驗所用RG17的抗性不同，因為同一品種在經(jīng)過連續(xù)多年的高壓（病原）選擇、篩選種植，有可能提高其抗性。

關于對接種前后TMV農(nóng)藝產(chǎn)量性狀及耐病性的評價，本研究結果顯示，云煙87、RG17表現(xiàn)顯著好于對照K326。潘建菁等［13］也已進行過以K326作對照，對9個煙草品種性狀進行比較試驗，發(fā)現(xiàn)CV85顯著好于K326。進行這類評價的原因在于病理抗性更注重花葉等導致的內在品質變化，農(nóng)藝產(chǎn)量性狀及耐病性的評價更注重葉大小、重量等外在變化。對于良種選育和煙草花葉病發(fā)生較少地區(qū)選用合適栽培品種都有著很大的指導意義。

因此，針對煙草花葉病發(fā)生較少的地區(qū)，推薦種植云煙87、RG17和9032；對于梅州和韶關等TMV發(fā)生較重的地區(qū)，推薦種植新品種MS96-7；對于清遠連州縣級市等CMV發(fā)生較重的地區(qū)，應避免種植RG17這一高感品種，同時需要考慮引種事宜。國內外的種質資源中，許美玲等［14］鑒定的高抗TMV品種有Coker176、PVH03、PVH05、PVH06、PVH08、懶出頭、牡單81-56、牡單80-7、牡單82-5-1、H423、6349、22-22、B22、8022、W 3-1-1、朝鮮抗赤、筑波1號、V amorr48、Ky12、 Carifonia valle（美國）、Candel（加拿大）和落地黃（中國安徽）；王鳳龍等鑒定的高抗CMV品種有神農(nóng)大葉煙、晉太18號、柳葉青和新農(nóng)3-1。這些種質資源都可以酌情參考選用。因條件所限，本研究未能對廣東省7 個品種的CMV農(nóng)藝產(chǎn)量性狀耐病性加以評價，關于7個品種的經(jīng)濟性狀比較也尚需補充。至于大田的抗病性評價工作也需要深入開展，室內苗期抗性評價的結果是否與大田的抗病性結果具有相關性尚待驗證。

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（責任編輯 白雪娜）

Evaluation on the resistance to tobacco virus disease of tobacco dominating cultivars in Guangdong province

SUN Li-xia1，YANG Lei-liang1，2，WU Ying-er1，LI Hua-ping2，GUAN Wei1，
QIU De-yi1，CHEN Ding-hu1，WANG Zhang-gen1
（1. China Inspection and Quarantine Bureau，Zhongshan 528400，China；
2. College of Agriculture，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China）

In order to evaluate the resistance to TMV and CMV of 7 main cultivars from Guangdong province，by using concentration grades （0，1∶10，1∶100，1∶1 000，1∶10 000，1∶100 000） of TMV-infected tobacco leaves as contrasts on Nicotiana glutinosa，the seedlings of 7 cultivars of tobacco （K326，YUNYAN87，RG17，9601，9032，MSK326，MS96-7），were respectively inoculated at the concentration of 1∶10 000 by method of common friction inoculation. According to the results of agricultural product characters on the 70th day after inoculation，YUNYAN87，RG17 and 9601 were better in agricultural product characters；According to the DI （Disease index） on the 70th day after inoculation，MS96-7 was the lowest （81.06），and 9032 was the highest （95.46）；According to the incidence of disease on the 30th day after inoculation，MS96-7 was the lowest （71.21%），RG17 was the highest （100.00%）. There was no immune or high-resistant cultivar to TMVin Guangdong province，and MS96-7 was identified as middle-resistant cultivar to TMV，the others （K326，YUNYAN87，RG17，9601，9032，MSK326） were identified as middle-susceptible cultivars. By using method of common friction inoculation，tobacco seedlings of 7 cultivars were respectively inoculated by CMV at the concentration of 1：40 dilution. From the results of DI on the 20th day after inoculation，the percentage of seedlings with classic symptom on the 9th day after inoculation，YUNYAN87 was identified as the most resistant to the movement of CMV among 7 cultivars，9601 was identified as the most susceptible cultivar among 7 cultivars. And RG17 was identified as the high-susceptible cultivar，the resistant levels of others were middle and high-susceptible to CMV. There was no immune，high-resistant cultivar to TMV in Guangdong province，and there was no immune，high-resistant or middle-resistant cultivar to CMV.

Guangdong province；tobacco；cultivars；tobacco virus disease；resistance；evaluation

S436. 418. 12

A

1004-874X（2016）07-0018-07

2016-02-16

廣東煙草專賣局項目；國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局科技計劃項目（2015IK081）；國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局質檢公益性行業(yè)科研專項（201410080）

孫麗霞（1979-），女，碩士，農(nóng)藝師，E-mail：14650913@qq.com

楊雷亮（1980-），男，博士，高級農(nóng)藝師，E-mail：49104098@qq.com