楊玲霞，朱旭江，劉婷婷

(1.甘肅省藥品檢驗研究院，甘肅 蘭州 730070；2.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院 藥學(xué)部，陜西 西安 710065)

趕黃草袋泡茶中黃酮類成分的定量分析

楊玲霞1*，朱旭江1，劉婷婷2

(1.甘肅省藥品檢驗研究院，甘肅 蘭州 730070；2.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院 藥學(xué)部，陜西 西安 710065)

目的：測定趕黃草袋泡茶中黃酮類成分的含量。方法：采用HPLC法，色譜柱為Kromasil C18柱(250 mm×4.0 mm，5.0 μm)；流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液(50∶50)；檢測波長為360 nm；流速為1.0 mL·min-1；進樣量：10 μL。結(jié)果：槲皮素、山柰酚分別在0.203 6～2.036 0、0.043 2～0.432 0 μg具有良好線性關(guān)系，平均回收率分別為98.43%(RSD=1.75%)和97.61%(RSD=2.17%)。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、靈敏，可用于趕黃草袋泡茶中黃酮類成分槲皮素和山柰酚的含量測定。

趕黃草袋泡茶；槲皮素；山柰酚；高效液相色譜法

趕黃草始載于明代《救荒本草》，為虎耳草科(Saxifragaceae)扯根菜屬Penthorum植物扯根菜PenthorumchinensePursh的干燥地上部分。具有清熱解毒、活血散瘀、利水消腫、退黃、平肝的功能。由于趕黃草顯著的保肝作用，利用其開發(fā)的保健品趕黃草袋泡茶也越來越受到人們的認(rèn)可。近年來關(guān)于趕黃草的化學(xué)、藥理、臨床研究已取得一定進展，其中黃酮類化合物為其主要活性成分[1-10]。但有關(guān)趕黃草及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)評價多局限于單一的槲皮素、沒食子酸等成分的測定[11-13]。本文首次采用高效液相色譜法同時測定了趕黃草袋泡茶中槲皮素和山柰酚的含量，為趕黃草及其保健制劑的內(nèi)在質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-2010A高效液相色譜儀(日本島津公司)；AE-240型電子天平(瑞士Mettler Toledo公司)。

1.2 試藥

槲皮素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100081-200406，含量測定以93.3%計)；趕黃草袋泡茶(古藺宏安藥業(yè)有限公司，規(guī)格：1.6 g/袋，批號：130304；四川省錦云堂中藥飲片有限公司，規(guī)格：2 g/袋，批號：130201；都江堰春盛中藥飲片有限公司，規(guī)格：3 g/袋，批號：121202)；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18柱(250 mm×4.0 mm，5.0 μm)；流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液(50∶50)；檢測波長：360 nm；流速：1.0 mL·min-1；進樣量：10 μL。

2.2 對照品溶液的制備

分別精密稱取槲皮素10.18 mg、山柰酚2.16 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得對照品儲備溶液(槲皮素質(zhì)量濃度為203.6 μg·mL-1、山柰酚質(zhì)量濃度為43.2 μg·mL-1)。精密吸取對照品儲備溶液5 mL，加甲醇定容至10 mL，即得對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取趕黃草袋泡茶內(nèi)容物適量，精密稱取約0.5 g，精密加入甲醇-25%鹽酸溶液(4∶1)25 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇-25%鹽酸溶液(4∶1)補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，用0.46 μm的微孔濾膜濾過，即得。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，按2.1項下色譜條件進樣測定，色譜圖見圖1。結(jié)果表明，在此色譜條件下，槲皮素和山柰酚均與樣品中其他組分色譜峰基線分離，理論塔板數(shù)按槲皮素峰計算為8491，按山柰酚計算為5862。

注：A.槲皮素和山柰酚對照品色譜圖；B.供試品色譜圖；1.槲皮素；2.山柰酚。圖1 趕黃草袋泡茶高效液相色譜圖

2.5 線性關(guān)系的考察

將對照品儲備溶液分別稀釋成一系列濃度梯度的對照品溶液，用0.46 μm的微孔濾膜濾過，依次進樣10 μL。以槲皮素、山柰酚峰面積為縱坐標(biāo)，進樣量為橫坐標(biāo)，進行回歸計算，槲皮素的回歸方程為Y=4 210 317X+3931，r=1.000 0，槲皮素在0.203 6～2.036 0 μg線性關(guān)系良好；山柰酚的回歸方程為Y=4 187 350X+28 868，r=0.999 8，山柰酚在0.043 2～0.432 0 μg線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗

精密吸取對照品溶液，按2.1色譜條件重復(fù)進樣5次，每次10 μL，分別計算，得槲皮素峰面積的RSD為1.25%，山柰酚峰面積的RSD為1.64%。表明該方法精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性

精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0、2、4、8、16、24 h注入液相色譜儀，測定槲皮素和山柰酚的峰面積，結(jié)果槲皮素峰面積的RSD為2.37%，山柰酚峰面積的RSD為2.16%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗

精密稱取同一樣品(批號：121202)6份，按照2.3項下的方法制備供試品溶液，按照2.1項下的色譜條件依次進樣測定，結(jié)果槲皮素平均含量的RSD為1.79%，山柰酚平均含量的RSD為2.41%，表明本法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗

取已知含量的趕黃草袋泡茶樣品(古藺宏安藥業(yè)有限公司，批號：130304，槲皮素和山柰酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為5.32、1.12 mg·g-1)6份，精密稱定，分別精密加入對照品溶液適量，按2.3項下的方法制備供試品溶液，依法測定，計算回收率。結(jié)果見表1～2。結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確性良好。

2.10 樣品的含量測定

取趕黃草袋泡茶按2.3項下方法制備供試品溶液，照2.1項下的色譜條件測定，進樣10 μL，記錄色譜圖峰面積，以峰面積計算樣品中槲皮素和山柰酚的含量。結(jié)果見表3。

表1 槲皮素的加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)

表2 山柰酚的加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)

表3 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

現(xiàn)代生活中，人們由于壓力比較大，常伴隨一些不良的生活習(xí)慣，長期飲酒已被證實是損害肝臟的第一殺手。趕黃草具有顯著的保肝作用，以其為主要原料生產(chǎn)的袋泡茶日益受到人們的青睞。但趕黃草袋泡茶生產(chǎn)廠家多，規(guī)格不一，缺乏有效的含量控制指標(biāo)。所以制定趕黃草袋泡茶的含量控制方法具有很重要的意義。

含量測定結(jié)果表明，不同廠家生產(chǎn)的袋泡茶每g所含黃酮類成分含量接近，但考慮到包裝規(guī)格的差異較大，飲用的劑量會有較大的差異，應(yīng)對袋泡茶的規(guī)格、日服用量等進行規(guī)范。

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DeterminationofFlavonoidConstituentinGanhuangcaoTeaBagbyHPLC

YANG Lingxia1*，ZHUXujiang1，LIUTingting2

(1.InstituteforDrugControlofGansuProvince；LanzhouGansu730070，China；2.TheMedicineDivisionofFirstAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity，Xi’an710065，China)

Objective：To establish an HPLC method for the determination of quercetin and kaempferol in Ganhuangcao tea bag.Methods：The HPLC analysis was carried out on Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)with a mixture of methanol-0.1% phosphate(50∶50)as the mobile phase.The determination wavelength was set at 360nm with the flow rate of 1.0 mL·min-1.Results：The quercetin and kaempferol showed good linearity in the range of 0.2036 ～2.036 0 μg and 0.043 2～0.432 0 μg respectively.The average recovery rate of quercetin and kaempferol were 98.43%(RSD=1.75%)and 97.61%(RSD=2.17%)，respectively.Conclusion：The method is simple and accurate.It can be used for the content determination of quercetin and kaempferol in Ganhuangcao tea bag.

Ganhuangcao tea bag；quercetin；kaempferol；HPLC

2015-09-13)

*

楊玲霞，副主任藥師，研究方向：中藥化學(xué)、中藥分析、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究；Tel:(0931)7822945,E-mail:yanglingxia@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.2.021