秦玉芝，陸 英，高 飛，番 妃，傅鵬飛，李 亞

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝園林學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128；2.湖南省馬鈴薯工程技術(shù)研究中心，湖南 長(zhǎng)沙 410128；3.南方糧油作物協(xié)同創(chuàng)新中心，湖南 長(zhǎng)沙 410128）

幾種甘薯塊根中游離糖氣相色譜分析

秦玉芝1，2，3，陸 英1，高 飛1，番 妃1，傅鵬飛1，李 亞1

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝園林學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128；2.湖南省馬鈴薯工程技術(shù)研究中心，湖南 長(zhǎng)沙 410128；3.南方糧油作物協(xié)同創(chuàng)新中心，湖南 長(zhǎng)沙 410128）

以肌醇為內(nèi)標(biāo)物，采用糖-三甲基硅醚衍生物-氣相色譜法，測(cè)定8個(gè)不同甘薯材料中的游離糖含量。結(jié)果表明：在試驗(yàn)設(shè)置的色譜條件下，測(cè)得甘薯中游離單糖和雙糖主要為果糖、葡萄糖、蔗糖，加標(biāo)回收率分別為93.76 %、91.54 %、95.53 %；8個(gè)不同甘薯材料中的所測(cè)游離糖總量在85.94～276.41 mg/g之間，其中蔗糖為141.99～35.01 mg/g，葡萄糖為20.11～81.08 mg/g，果糖為8.56～52.82 mg/g，不同甘薯材料中游離糖含量由高到低排列均為蔗糖＞葡萄糖＞果糖；其中水果薯1號(hào)的游離糖含量最高，紫色甘薯的游離糖含量均顯著低于其他甘薯類(lèi)型。

甘薯；游離糖；氣相色譜

甘薯［Ipomoea batatas（L）Lam.］是世界上最重要的糧食、飼料和工業(yè)原料作物之一［1-2］，廣泛種植于100個(gè)以上國(guó)家，其中中國(guó)是甘薯栽培面積最大的國(guó)家。糖對(duì)甘薯品質(zhì)的形成有著十分重要的影響，新鮮或經(jīng)蒸煮的總糖主要由游離糖中的蔗糖、葡萄糖、果糖組成，游離糖的存在與轉(zhuǎn)化，直接影響甘薯的香氣、品質(zhì)和滋味。同時(shí)，糖含量與薯片成色［3］及淀粉產(chǎn)量存在相關(guān)性［4-6］。

目前，糖含量的測(cè)定方法主要有紫外分光光度法、高效液相色譜法、氣相色譜法等。紫外分光光度法靈敏度較低，且只能測(cè)定糖總量；高效液相色譜法方便、快捷，但色譜柱價(jià)格較貴，同時(shí)需要專(zhuān)用檢測(cè)器，使用范圍受到限制；氣相色譜（gas chromatography，簡(jiǎn)稱(chēng)GC）不能直接用于糖的測(cè)定，但糖通過(guò)衍生化處理后具有揮發(fā)性，同時(shí)具備選擇性好、樣品用量少、分辨率強(qiáng)、靈敏度高、分析速度快以及可用于定性及定量分析等優(yōu)點(diǎn)［7-10］。筆者通過(guò)氣相色譜法，分析比較了9種特色甘薯材料的游離糖含量，為闡明不同甘薯類(lèi)型含糖特性以及研究游離糖與食味的相關(guān)性提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1甘薯樣品供試材料為8種特色甘薯（農(nóng)紫1號(hào)，紫羽1號(hào)，浙紫1號(hào)，紫羽2號(hào)，紫薯2-2，高淀粉-1，白10-2，水果薯-1）。新鮮甘薯塊根，洗凈后用刀切成細(xì)絲，置電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)60℃烘干，用微型植物粉碎機(jī)粉碎成粉末，過(guò)90 目分樣篩即得塊根干粉，密封后于4℃冰箱保存。

1.1.2試驗(yàn)試劑主要試驗(yàn)試劑有葡萄糖、果糖、蔗糖、肌醇（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）、正己烷、吡啶（色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、三甲基氯硅烷和六甲基二胺烷（化學(xué)純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

1.1.3儀器設(shè)備主要儀器有GC2010氣相色譜儀（日本島津公司）、DB-1701毛細(xì)管色譜柱（美國(guó)瑞斯泰克公司）、電熱恒溫水浴鍋（金壇市金城國(guó)盛實(shí)驗(yàn)儀器廠(chǎng)）、電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1氣相色譜分析條件色譜柱DB-1701毛細(xì)管色譜柱：（30 m×φ0.25 mm）；檢測(cè)器為氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）；檢測(cè)器溫度為260 ℃；進(jìn)樣口溫度240 ℃；載氣為氮?dú)猓魉贋?0.0 mL/min；柱流速0.6 mL/min，空氣流速為400 mL/min，氫氣流速為40.0 mL/min，進(jìn)樣量1 μL，分流比7∶1，肌醇為內(nèi)標(biāo)物。采用升溫程序，起始溫度120 ℃保持1 min，以8 ℃/ min的速度升至250 ℃，保持13 min。

1.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制準(zhǔn)確稱(chēng)取果糖5.40 mg，葡萄糖5.74 mg，蔗糖7.87 mg用吡啶超聲溶解后定容至25 mL，得混合標(biāo)準(zhǔn)母液，該母液用吡啶逐級(jí)稀釋至一系列所需濃度。取1 mL標(biāo)樣吡啶溶液，依次加入0.1 mL內(nèi)標(biāo)肌醇（0.5 mg/mL），0.2 mL六甲基二硅胺烷，0.1 mL三甲基氯硅烷，混勻后放入70℃烘箱中反應(yīng)30 min，取出冷卻，加入1 mL蒸餾水和1 mL正己烷，搖勻，靜置30 min，取1 μL正己烷溶液進(jìn)氣相色譜儀測(cè)定。以各游離糖峰面積與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積的比值為縱坐標(biāo)（y），糖的質(zhì)量為橫坐標(biāo)（x），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

1.2.3供試液的制備參考文獻(xiàn)［10］方法，稱(chēng)取上述甘薯樣品0.100 g，加入200 mL的80 %乙醇，在80℃水浴鍋回流提取2 h；過(guò)濾，取濾液加80 %乙醇定容至200 mL，然后取1 mL加入試管用氮?dú)獯蹈?；加? mL吡啶，震振溶解；加入0.1 mL內(nèi)標(biāo)肌醇（與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)測(cè)定內(nèi)標(biāo)物相同），搖勻，再加入0.2 mL六甲基、0.1 mL三甲基，搖勻后放入70 ℃烘箱烘30 min；冷卻后加入1 mL蒸餾水、1 mL正己烷，搖勻，靜置30 min；取1 μL混合液進(jìn)氣相色譜儀測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算糖含量。

1.2.4精密度試驗(yàn)按試驗(yàn)方法對(duì)水果薯中進(jìn)行了5次測(cè)定，計(jì)算3種糖的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.2.5回收率試驗(yàn)精密量取5份樣品溶液，其中2份加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，按1.2.3中的方法操作，測(cè)定樣品含量及加標(biāo)后含量，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品的回收率。

1.2.6數(shù)據(jù)處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2003及DPS7.05軟件進(jìn)行整理與分析。

2 結(jié)果與分析

2.1混合標(biāo)樣及樣品的GC圖譜

因?yàn)樘潜旧頉](méi)有足夠的揮發(fā)性，在用氣相色譜分析之前必須預(yù)先將其轉(zhuǎn)化成易揮發(fā)、對(duì)熱穩(wěn)定的衍生物。糖和六甲基二硅胺烷、三甲基氯硅烷在吡啶中反應(yīng)，生成具有揮發(fā)性的三甲基硅醚衍生物，在衍生化過(guò)程中，易產(chǎn)生衍生物的異構(gòu)體［11-12］，因而一種糖得到的色譜峰往往不只是一個(gè)單峰，可能是2個(gè)或2個(gè)以上的色譜峰。因此，試驗(yàn)時(shí)首先對(duì)每種糖標(biāo)準(zhǔn)樣品分別進(jìn)行色譜分析，以確定其色譜峰的個(gè)數(shù)及其保留時(shí)間，然后進(jìn)行混合標(biāo)準(zhǔn)樣測(cè)定，用單標(biāo)準(zhǔn)對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)中色譜峰進(jìn)行確認(rèn)，確定對(duì)應(yīng)的糖。

根據(jù)單標(biāo)樣的色譜圖，果糖有3個(gè)峰，保留時(shí)間分別為11.754、11.824和12.025 min；葡萄糖有2個(gè)峰，保留時(shí)間分別為12.989、14.185 min；蔗糖1個(gè)峰，保留時(shí)間為22.905 min；內(nèi)標(biāo)物肌醇的保留時(shí)間為15.529 min?；旌蠘?biāo)樣的氣相色譜圖見(jiàn)圖1。甘薯樣品的GC圖見(jiàn)圖2。由圖2可知，甘薯中主要含有果糖、葡萄糖、蔗糖3種游離糖，在試驗(yàn)確定的色譜條件下均得到良好地分離。

圖1　3種混合糖標(biāo)樣氣相色譜圖（1.果糖；2.葡萄糖；3. 蔗糖；4. 肌醇）

圖2　水果薯氣相色譜圖（1.果糖；2.葡萄糖；3. 蔗糖；4. 肌醇）

2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

按1.2.2方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程，線(xiàn)性回歸方程和相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表1。由表1可知，各糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性關(guān)系良好。

表1　糖標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸方程和相關(guān)系數(shù)

2.3 精密度試驗(yàn)

按試驗(yàn)方法對(duì)水果薯樣品進(jìn)行了5次測(cè)定，結(jié)果顯示，3種糖測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.62%、5.31%、3.13%，符合檢測(cè)要求。

2.4加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

加標(biāo)回收率結(jié)果表明，果糖、葡萄糖、蔗糖回收率分別為93.76 %、91.54 %、95.53 %，符合檢測(cè)要求。

2.5不同甘薯樣品中3種糖的含量

由表2可知，8個(gè)甘薯品種的游離糖總量在85.94～276.41 mg/g之間，蔗糖在141.99～35.01 mg/g之間，葡萄糖在20.11～81.08 mg/g之間，果糖在8.56～52.82 mg/g之間。不同甘薯材料中游離糖含量由高到低排列均為蔗糖＞葡萄糖＞果糖；其中，水果薯1號(hào)的游離糖含量最高，達(dá)到276.41 mg/g，其果糖、葡萄糖和蔗糖的含量也居所有供試材料之首。供試紫色甘薯的游離糖含量均顯著低于其他甘薯類(lèi)型，其中農(nóng)紫2號(hào)、農(nóng)紫1號(hào)的游離糖含量較低，分別為85.94和87.61 mg/g，僅為水果薯1號(hào)的30%左右，其余供試材料的游離糖含量在100～140 mg/g之間。

表2　不同甘薯樣品的游離糖含量比較（mg/g）

3 結(jié)論與討論

糖本身不具有揮發(fā)性，其硅醚化衍生物卻具有較好的揮發(fā)性，因而可用于糖的定性定量分析。糖的三甲基硅烷化會(huì)產(chǎn)生多種異構(gòu)體，給定性和定量帶來(lái)一定困難，因而首先需要用單標(biāo)來(lái)確定異構(gòu)體的個(gè)數(shù)及保留時(shí)間。糖的異構(gòu)體產(chǎn)生與反應(yīng)溫度有很大關(guān)系，預(yù)試驗(yàn)對(duì)衍生溫度及時(shí)間作了考察，確定為70 ℃、30 min，雖然有異構(gòu)化，但穩(wěn)定性好，能滿(mǎn)足試驗(yàn)要求。

定量分析中常采用外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法，試驗(yàn)中需要萃取，且萃取劑具有揮發(fā)性，因此內(nèi)標(biāo)法比外標(biāo)定量法更為穩(wěn)定。

對(duì)8種甘薯中3種游離糖的測(cè)定表明，不同品種間蔗糖和果糖含量均存在顯著差異；葡萄糖含量除水果薯1號(hào)和高淀粉薯相對(duì)較高以外，其他測(cè)試材料為23±2 mg/g；不同甘薯材料中游離糖含量由高到低排列均為蔗糖＞葡萄糖＞果糖；紫色甘薯類(lèi)型的游離糖總量較其他甘薯類(lèi)型低。

［1］ 陸漱韻，劉慶昌，李惟基. 甘薯育種學(xué)［M］. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1998. 1- 4，268- 270.

［2］ 柳洪鵑，李作梅，史春余，等. 腐植酸提高食用型甘薯塊根可溶性糖含量的生理基礎(chǔ)［J］. 作物學(xué)報(bào)，2011，37（4）：711-716.

［3］ 卞 科，劉孝沾. 甘薯中可溶性糖的HPLC法測(cè)定及其在加工中的變化研究［J］ . 河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2012，33（1）：1-5.

［4］ Kaoru K，Katsuyo shi N. Effect o f Soluble Sugars on Gelatinization and Ret rogradation of Sweet potato Starch ［J］ . J Agric Food Chem，1991，（39）：1406-1410.

［5］ 沈淞海，沈海銘，吳建華. 甘薯生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中游離糖含量與淀粉積累的關(guān)系［J］ . 浙江農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1994，20（4）：400-404.

［6］ 梁媛媛，傅玉凡，孫富年，等. 甘薯塊根游離糖含量在生長(zhǎng)期間的變化研究［J］. 西南大學(xué)學(xué)報(bào)（ 自然科學(xué)版），2009，31（6）：20-25.

［7］ 陶樂(lè)平，丁在富，張部昌. 氣相色譜在多糖結(jié)構(gòu)測(cè)定中的應(yīng)用［J］.色譜，1994，12（5）：351-354.

［8］ Sweeley C C，Bentley，Makita M M. Gas-liquid chromatography of tri-methylsilyl derivates of sugars and related substances［J］. Journal of the American Chemical Society. 1963，85：24-97.

［9］ 李鐵林，吳昌賢，蔣挺大，等. 單糖三甲基硅醚化衍生物的氣相色譜分析［J］. 分析化學(xué)，1981，9（3）：295-298.

［10］ 張艷萍，俞志遠(yuǎn). 氣相色譜法分析羊棲菜多糖的單糖組成及其含量［J］. 糧油食品科技，2006，14（2）：50 -52.

［11］ 毛多斌，曲志剛，張峻松，等. 煙草中游離糖的毛細(xì)管氣相色譜分析［J］. 色譜，2003， 21（4）：437-438.

［12］ 姜 波，劉長(zhǎng)建，成建立，等. 毛細(xì)管柱氣相色譜法測(cè)定銀杏葉中可溶性單糖［J］. 理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè)，2009，45（2）：182-184.

（責(zé)任編輯：成 平）

Gas Chromatographic Analysis on Free Sugars in the Roots of Several Types of Sweet Potato

QIN Yu-zhi1，2，3，LU Ying1，GAO Fei1，PAN Fei1，F(xiàn)U Peng-fei1，LI Ya1
（1. College of Horticuture and Landscape， Hunan Agricutural University， Changsha 410128， PRC； 2. Hunan Province Potato Engineering and Technology Research Center， Changsha 410128， PRC； 3. Southern Regional Collaborative Innovation Center for Grain and Oil Crops in China，Changsha 410128， PRC）

Taking inositol as internal standard， determined free sugar from 8 different sweet potato by using sugar - three methyl ether derivatives - gas chromatography method. The results showed that under the test set of chromatographic conditions， measured free monosaccharides and disaccharides in sweet potato is mainly fructose， glucose and sucrose， the recovery of them were 93.76%， 91.54%，and 95.53%； from 8 different sweet potato， the total free sugar was measured between 85.94-276.41 mg/g， the sucrose 141.99-35.01 mg/ g， glucose 20.11-81.08 mg/g， fructose 8.56-52.82 mg/g， the contents of free sugar in all kinds of sweet potato materials were sucrose＞ glucose ＞ fructose. The free sugar content of Fruit Potato No.1 was the highest， the free sugar content of purple sweet potato was significantly lower than that of other sweet potato varieties.

sweet potato； free sugar； gas chromatography

S531

A

1006-060X（2016）08-0096-03

10.16498/j.cnki.hnnykx.2016.08.028

2016-06-17

湖南省博士后科研資助專(zhuān)項(xiàng)計(jì)劃（2014RS4010）

秦玉芝（1971-），女，土家族，湖南永順縣人，副教授，主要從事園藝種質(zhì)資源開(kāi)發(fā)與利用研究。

陸 英