張艷利

河南省滑縣職業(yè)教育中心

金盞菊葉柄組織培養(yǎng)技術(shù)初探

張艷利

河南省滑縣職業(yè)教育中心

以金盞菊生長(zhǎng)期間葉柄的莖為組培材料，結(jié)果表明：愈傷組織誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基為：B3MS+6-BA0.5+NAA0.1；用1‰的升汞溶液消毒時(shí)間5分鐘污染率為2%，說(shuō)明5分鐘消毒時(shí)間為污染率最佳的消毒時(shí)長(zhǎng)。

組織培養(yǎng)金盞菊培養(yǎng)基

金盞菊（Calendula of ficinalis L.）別名金盞花、生長(zhǎng)菊，為菊科金盞菊屬。多年生草本花卉，常作二年生花卉栽培。整個(gè)植株高度約40～60厘米，整株有被毛。葉片全緣，基生葉互生，橢圓狀或倒卵形。有葉柄，上部葉抱莖生長(zhǎng)?；▎紊c上部，頭狀花序，花徑大約4～12厘米，花兩性，外圍舌狀花兩輪或多輪平展，里面筒狀花多層，舌狀花是其主要的觀賞部位?；ㄉ薪瘘S色和橘黃色兩種，花期2～6月份。果實(shí)7～8份成熟，瘦果彎曲呈船形，果實(shí)成熟后呈褐色帶刺。常見(jiàn)的園藝品種有重瓣和卷瓣，目前國(guó)外還育出了單瓣、重瓣的種間雜交種，還有一些10～20厘米矮生種。金盞菊原產(chǎn)于南歐，現(xiàn)全世界各國(guó)都普遍栽培。金盞菊適應(yīng)性很強(qiáng)，對(duì)土壤要求不嚴(yán)，尤其是幼苗在石灰性土壤上生長(zhǎng)良好，適宜的pH值為6.5～8。喜光照，耐寒冷，忌夏季的酷暑高溫，炎熱的夏季自動(dòng)停止生長(zhǎng)。金盞菊植株矮化，花朵密集，花色鮮艷，開(kāi)花早，花期長(zhǎng)，常作花壇、花境、花臺(tái)、花柱材料。也可栽培于廣場(chǎng)、公園、車站、學(xué)校等公共場(chǎng)所。金盞菊對(duì)二氧化硫、氟化物、硫化氫、氯化物等有害氣體。金盞菊已在我國(guó)大范圍種植應(yīng)用，為今后園林的綠化提供更好服務(wù)。

一、材料與方法

1.試驗(yàn)材料

本研究所需的材料由河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院花卉實(shí)驗(yàn)室提供，取生長(zhǎng)期金盞菊的葉柄段為外植體。

2.試驗(yàn)處理

金盞菊的葉柄段誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：（1）B1 MS+6-BA0.5毫克/升 （單位同下）+GA30.5；（2）B2MS+6-BA0.5+GA31；（3）B3MS+6-BA0.5+NAA0.1；（4）B4MS+6-BA1+GA30.5；（5）B7MS+6-BA1+GA31；（6）B5MS+6-BA1+NAA0.1；本實(shí)驗(yàn)共設(shè)計(jì)了6組不同配比的培養(yǎng)基類型，每組配比試驗(yàn)重復(fù)3次。本實(shí)驗(yàn)采用固體培養(yǎng)基共1200毫升，用圓口塑料瓶進(jìn)行分裝，每瓶分別裝入25～30毫升的培養(yǎng)基，一共裝40瓶。每瓶培養(yǎng)基接種5個(gè)3～5毫米的葉柄莖段，做3次重復(fù)，消毒液用1‰的升汞消毒時(shí)間為4分鐘、5分鐘分鐘、6分鐘。

3.試驗(yàn)方法

試驗(yàn)材料用自來(lái)水下沖洗12小時(shí)，后用洗潔精再次清洗再次，最后用蒸餾水在沖洗干凈。后放在接種臺(tái)上用75%的酒精滅菌3秒左右，再用蒸餾水沖洗干凈，然后用1‰的升汞溶液滅菌4分鐘、5分鐘、6分鐘，最后用蒸餾水無(wú)菌水沖洗干凈。葉柄用消毒后的吸水紙吸干多余水分，分別放在準(zhǔn)備好的培養(yǎng)皿中進(jìn)行分切，切成2～4毫米左右的小段待用。把切好的葉柄材料接種在不同配比的培養(yǎng)基上，進(jìn)行愈傷組織的培養(yǎng)。做好觀察，篩選出金盞菊愈傷組織發(fā)育好的最佳初代培養(yǎng)基類型。

本實(shí)驗(yàn)采用材料的消毒時(shí)間分別為4分鐘、5分鐘、6分鐘，外植體消毒液都是用1‰的升汞消毒，接種12d后觀察金盞菊葉柄的死亡指數(shù)，污染率及萌芽數(shù)，以便篩選出適合的金盞菊消毒的最好時(shí)間，為以后的實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。

二、結(jié)果與分析

1.不同配比的培養(yǎng)基對(duì)愈傷組織的影響

生長(zhǎng)期的金盞菊葉片的葉柄段分別接種在不同配比濃度的MS培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)室溫為25～27℃內(nèi)，光照15小時(shí)/天進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)7天開(kāi)始觀察愈傷組織，愈傷組織開(kāi)始生長(zhǎng)發(fā)黃，20天后可以明顯觀察出不同配比濃度的MS培養(yǎng)基上，愈傷組織的變化情況。B3培養(yǎng)基上的愈傷組織的情況明顯好于其它培養(yǎng)基上愈傷組織。B2和B4培養(yǎng)基上愈傷組織形成的較少，顏色嫰黃、質(zhì)脆；B1和B5培養(yǎng)基上的愈傷組織黃褐、質(zhì)軟；B6培養(yǎng)基的愈傷組織嫰黃、較硬實(shí)；B3培養(yǎng)基的黃色、硬實(shí)。從表1可以明顯看出B3培養(yǎng)基最適合金盞菊葉柄愈傷組織的形成。

2.不同消毒時(shí)間對(duì)愈傷組織的影響

不同的消毒時(shí)間對(duì)愈傷組織的污染也不同，從表2可以看出，用1‰的升汞溶液消毒時(shí)間5分鐘污染率為2%，愈傷組織形成的也最多。金盞菊葉柄莖段為外植體為組培材料在消毒處理時(shí)間上，以5分鐘消毒最佳，（詳細(xì)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2）。

表2　　消毒時(shí)間的不同對(duì)芽的影響

三、結(jié)論與討論

綜合各組設(shè)計(jì)不同配比的培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在生長(zhǎng)期金盞菊葉柄莖段的組織培養(yǎng)中，B3MS+ 6-BA0.5+NAA0.1為最佳愈傷組織培養(yǎng)基。以葉柄段為外植體材料用1‰的升汞溶液消毒處理結(jié)果顯示，消毒時(shí)間長(zhǎng)為5分鐘是最佳消毒時(shí)間。消毒時(shí)間長(zhǎng)4分鐘和消毒時(shí)間長(zhǎng)6分鐘的污染率都明顯高于5分鐘的。由于培養(yǎng)基配比設(shè)計(jì)有限，只能篩選出適合葉柄段愈傷組織形成的最佳培養(yǎng)基，愈傷組織養(yǎng)誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。

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