李秋馨方育群

尿液巨細胞病毒DNA聯(lián)合血清巨細胞病毒特異抗體檢測對嬰兒巨細胞病毒感染的診斷價值研究*

李秋馨①方育群①

目的：研究探索在診斷嬰兒巨細胞病毒感染中采用尿液巨細胞病毒DNA聯(lián)合血清巨細胞病毒特異抗體檢測的診斷價值，評估其臨床意義。方法：選擇2014年2月-2015年5月本院收診的90例疑似巨細胞病毒感染的嬰幼兒為研究對象，采用尿液巨細胞病毒DNA和血清巨細胞病毒特異抗體對患兒進行檢測，比較單一檢測及聯(lián)合檢測與治療前后患兒檢測結(jié)果。結(jié)果：尿液巨細胞病毒DNA檢測的陽性率58.89%（53/90）、特異性62.22%（56/90）與血清巨細胞病毒特異抗體檢測陽性率51.11% （46/90）、特異性61.11%（55/90）比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；聯(lián)合檢測的陽性率78.89% （71/90）、特異性91.11%（82/90）與兩種單一檢測比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；治療后，患兒尿液巨細胞病毒DNA和血清巨細胞病毒特異抗體含量均低于治療前（P＜0.05）。結(jié)論：在診斷嬰兒巨細胞病毒感染中采用尿液巨細胞病毒DNA聯(lián)合血清巨細胞病毒特異抗體檢測的臨床效果理想，值得推廣應(yīng)用。

巨細胞病毒； 尿液巨細胞病毒DNA； 血清巨細胞病毒特異抗體； 診斷價值

First-author's address：Fanyu District Shawan People's Hospital of Guangzhou，Guangzhou 511400，China

巨細胞病毒（CMV）感染是一種人類感染性疾病，在我國感染率在逐年上升。感染主要發(fā)生在嬰幼兒期，但巨細胞病毒感染的患者無論有無癥狀都會在其體液中被檢測出來［1］。嬰幼兒感染時身體系統(tǒng)會發(fā)生多處病變，引起嚴重的并發(fā)癥，危及患兒的生命。為探索在診斷嬰兒巨細胞病毒感染中采用尿液巨細胞病毒DNA聯(lián)合血清巨細胞病毒特異抗體檢測的診斷價值，分析應(yīng)用價值，本文選取2014年2月-2015年5月收診的90例疑似巨細胞病毒感染的嬰幼兒為研究對象，報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料 選取2014年2月-2015年5月本院收診的90例疑似巨細胞病毒感染的嬰幼兒。所有患兒均符合巨細胞病毒感染診斷方案的診斷標準，患兒中男61例，女29例；年齡1～14個月，平均（2.12 ±0.65）個月；本研究經(jīng)本院倫理委員會批準進行，且家屬均已在知情同意書上簽字。

1.2檢測方法

1.2.1尿液巨細胞病毒DNA檢測 具體步驟：在滅菌離心管中加入1000μL干凈的尿液，并將離心管置于離心機上以50 r/s的速度離心10 min，分離澄清尿液和尿渣后，往尿渣中注入50μL的DNA提取液，手握緊反應(yīng)管搖動使提取液和尿渣混合均勻，將其放于達到100 ℃的儀器上進行10 min的干浴，干浴結(jié)束后進行5 min的離心操作，操作結(jié)束取上層清液進行由廣州達安基因診斷有限公司生產(chǎn)的DA-7600 PCR儀擴增操作。擴增的靶區(qū)域為患兒巨細胞的AD-169基因組中早期轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白IE1基因中的高保守非編碼區(qū)，并在該區(qū)域置入特異性的熒光探針和引物。將取好上清液放到DA-7600 PCR儀及配套的試劑盒的反應(yīng)管中，然后在擴增儀中進行擴增操作，93 ℃下2 min預(yù)變性45 s；55 ℃ 45 s，10個循環(huán)左右；93 ℃ 30 s、45 s，30個循環(huán)。操作結(jié)束后，將數(shù)據(jù)輸入電腦進行計算和分析，將基因拷貝數(shù)/mL作為尿液巨細胞病毒DNA的單位，尿液巨細胞病毒DNA拷貝數(shù)/mL超過500表示患兒檢測結(jié)果為陽性。

1.2.2血清巨細胞病毒特異性抗體檢測 具體步驟：真空管中加入從患兒空腹狀態(tài)下抽取的2 mL的靜脈血液，蓋上蓋子上下倒置使其充分混合，并將其置于離心機上以50 r/s的速度離心5 min，離心結(jié)束后放于低溫-80 ℃中備測，使用美國雅培公司生產(chǎn)的化學(xué)發(fā)光儀進行血清巨細胞病毒特異性抗體檢測，檢測值index大于0.5時表示患兒檢測結(jié)果為陽性［2］。

1.2.3兩種方法聯(lián)合檢測 將兩種單獨檢測方式聯(lián)合對患兒的血清和尿液進行檢測，具體步驟同上。

1.2.4陽性結(jié)果判斷 尿液巨細胞病毒DNA檢測操作結(jié)束后，將數(shù)據(jù)輸入電腦進行計算和分析，將基因拷貝數(shù)/mL作為尿液巨細胞病毒DNA的單位，尿液巨細胞病毒DNA拷貝數(shù)/mL超過500表示患兒檢測結(jié)果為陽性。血清巨細胞病毒特異性抗體檢測時，檢測值index大于0.5時表示患兒檢測結(jié)果為陽性。

1.3治療方法 通過兩種檢測方式檢測確診為巨細胞病毒感染的患兒，采用10 mg/（kg·d）劑量的更昔洛韋進行治療，服用2周。

1.4觀察指標 比較單一檢測及聯(lián)合檢測的檢查結(jié)果，并對比分析治療前后患兒尿液巨細胞病毒DNA含量、血清巨細胞病毒特異抗體含量。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理 采用PEMS 3.1統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計量資料以（±s）表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料的比較采用 字2檢驗，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩種方法單一檢測及聯(lián)合檢測結(jié)果比較 尿液巨細胞病毒DNA檢測的陽性率、特異性與血清巨細胞病毒特異抗體檢測陽性率、特異性比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；聯(lián)合檢測的陽性率、特異性與兩種單一檢測比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1　兩種單一檢測及聯(lián)合檢測的檢查結(jié)果比較 例（%）

2.2治療前后患兒檢測結(jié)果比較 治療前后患兒尿液巨細胞病毒DNA含量比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；治療前后患兒血清巨細胞病毒特異抗體含量比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2　治療前后患兒檢測效果比較（±s）

表2　治療前后患兒檢測效果比較（±s）

血清巨細胞病毒特異抗體含量（U/mL）治療前（n=90）　6.11±2.99　3.01±0.22治療后（n=90）　2.28±1.12　1.32±0.16 t值　10.1302　41.535 P值　＜0.05?。?.05時間　尿液巨細胞病毒DNA含量（拷貝數(shù)/mL）

3　討論

巨細胞病毒（CMV）感染是在嬰幼兒時期沒有明顯的臨床表現(xiàn)的一種人類感染性疾病，我國感染率在逐年上升，特別是在發(fā)展中國家最多。感染主要發(fā)生在嬰幼兒期，巨細胞病毒感染的患者無論有無癥狀都會在其體液中被檢測出來。通過檢測血清巨細胞病毒特異抗體和尿液巨細胞病毒DNA能對患兒是否被巨細胞病毒感染起到很好的輔助診斷作用。兩種檢測方式結(jié)合在一起檢測陽性率高且檢測的特異性強，能極大程度地診斷出被巨細胞感染的患兒，及時給予治療，減少患兒并發(fā)癥和后遺癥的發(fā)生，在臨床上逐漸被廣泛應(yīng)用。

本研究顯示，兩種單一檢測及聯(lián)合檢測結(jié)果比較，尿液巨細胞病毒DNA檢測的陽性率58.89% （53/90）、特異性62.22%（56/90）與血清巨細胞病毒特異抗體檢測陽性率51.11%（46/90）、特異性61.11%（55/90）比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；聯(lián)合檢測的陽性率78.89%（71/90）、特異性91.11% （82/90）與兩種單一檢測比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。治療前后患兒檢測結(jié)果比較，治療前患兒尿液巨細胞病毒DNA含量（6.11±2.99）拷貝數(shù)/mL與治療后尿液巨細胞病毒DNA含量（2.28±1.12）拷貝數(shù)/mL比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；治療前血清巨細胞病毒特異抗體含量（3.01±0.22）U/mL與治療后血清巨細胞病毒特異抗體含量（1.32±0.16）U/mL比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果表明，兩種檢測方式在單一進行檢測時各自檢測的陽性率和特異性無明顯差異，但將兩種檢測方式同時應(yīng)用，其檢測出的陽性率和特異性明顯高于單一檢測，準確率明顯提高，減少了患兒可能引起的并發(fā)癥和后期可能發(fā)生的后遺癥，給患兒一個健康的未來，也給患兒的家屬減輕不必要的經(jīng)濟負擔(dān)和精神壓力，提高了我國優(yōu)生優(yōu)育的質(zhì)量。

與治療前相比，患兒治療后的血清巨細胞病毒特異抗體含量和尿液巨細胞病毒DNA含量均明顯下降，表明通過治療可以治愈患兒的巨細胞感染，早期診斷和早期對患兒進行治療對患兒治愈有很重要的作用。分析原因：血清巨細胞病毒特異抗體檢測的特點是特異性強、靈敏度高、能快速檢測、自動化等優(yōu)點，尿液巨細胞病毒DNA檢測可以快速檢測并且能建立擴增曲線，能很好地通過曲線檢測DNA等優(yōu)點，進而兩種檢測方式結(jié)合在一起對患兒進行檢測時能提高陽性檢測率和特異性。巨細胞感染早期患兒臨床癥狀表現(xiàn)不明顯，早期檢測早期進行治療，對治愈患兒的巨細胞感染有很重要的意義與袁浩等［17］研究結(jié)果相似。

巨細胞病毒是一種傳播途徑為胎盤或生殖道進行感染等方式的皰疹病毒，絕大部分患兒感染后身體呈亞臨床期或潛伏感染期。并且患兒身體內(nèi)會產(chǎn)生特異性抗體，當抽取患兒空腹時靜脈血清單份稀釋達到（1/8）以上，通過化學(xué)發(fā)光法對血清巨細胞病毒特異抗體進行檢測時對診斷患兒是否受巨細胞感染有很重要臨床應(yīng)用價值［20］。但是由于患兒機體的免疫能力較弱因而產(chǎn)生的特異性抗體較弱導(dǎo)致檢測過程中檢測的陽性率較低并且特異性不夠靈敏，進而易出現(xiàn)假陰性，使得少數(shù)患兒沒有被檢測出來，特異性雖較強但敏感程度較弱，易導(dǎo)致后期發(fā)現(xiàn)的時候治療起來棘手。對患兒潔凈的尿液進行實時熒光定量PCR法（FQ-PCR）時，能對患兒基因的各種表達進行定量分析，可以進行一個點的突變分析及等位基因進行分析，也可以對單核酸的多態(tài)性進行分析，但先要在基團置入特異性熒光探針和引物。因而通過實時熒光定量PCR法檢測尿液巨細胞病毒DNA時能很好的通過熒光顯示，檢測是否患兒被巨細胞病毒感染［20］。因體內(nèi)免疫能力未受抑制時潛伏的病毒未能活化增殖使得檢測的陽性率偏低并特異性較弱進而使得檢測存在一定的假陰率，造成少數(shù)患兒未能被檢測出來，錯過患兒的早期治療，增加后期治療費用。但相比于血清巨細胞病毒特異性抗體檢測，尿液檢測具有取樣便捷、對患兒沒有機體創(chuàng)傷等優(yōu)點。進而兩種檢測方式聯(lián)合進行檢測時相比于單一檢測能提高檢測的陽性率且增強特異性，兩種檢測方式聯(lián)合檢測是臨床上檢測巨細胞感染的一種較好的方法，值得推廣應(yīng)用。

綜上所述，在診斷嬰兒巨細胞病毒感染中采用尿液巨細胞病毒DNA聯(lián)合血清巨細胞病毒特異抗體檢測的臨床效果理想，早期診斷出來并進行治療對治療巨細胞感染具有重要意義，值得推廣應(yīng)用。

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Value of Diagnosis of CMV DNA in Urine and Serum of CMV-specific Antibody Detection of Cytomegalovirus Infection in Infants

LI Qiu-xin，F(xiàn)ANG Yu-qun.

Medical Innovation of China，2016，13（19）：118-121

Objective：To study the diagnostic value of exploring the use of CMV DNA in urine and serum of CMV-specific antibody detection in the diagnosis of cytomegalovirus infection in infants， to assess its clinical significance.Method：From February 2014 to May 2015 in our hospital received 90 cases of suspected diagnosis of cytomegalovirus infection in infants for the study，they were given the urine CMV DNA and CMV-specific serum antibody detection in children.The results of a single test and combined two detection methods were compared with treatment of children before and after.Result：The positive rate of CMV DNA detection in urine was 58.89% （53/90），specificity was 62.22% （56/90） and specificity of serum antibody positive rate of CMV was 51.11%（46/90），specificity was 61.11%（55/90） showed no significant difference（P＞0.05）.The positive rate of CMV DNA in urine and serumof CMV-specific antibody detection was 78.89% （71/90），and specificity was 91.11%（82/90），compared with two single species detection methods detect，the differences were statistically significant（P＜0.05）.After treatment，CMV DNA and serum of CMV-specific antibody were lowher than before treatment（P＜0.05）.Conclusion：In the diagnosis of infantile cytomegalovirus infection cytomegalovirus DNA over urine and serum antibody detection of CMV-specific clinical results，should be widely applied.

Cytomegalovirus； Urine cytomegalovirus DNA； CMV-specific antibodies in serum；Diagnostic value

廣東省科技計劃項目［粵財字（2011）511號］

①廣州市番禺區(qū)沙灣人民醫(yī)院 廣東 廣州 511400

李秋馨

10.3969/j.issn.1674-4985.2016.19.034

2016-03-04） （本文編輯：蔡元元）