王軍海

肝癌和肝病患者血清甲胎蛋白異質(zhì)體的檢測及意義

王軍海①

目的：探討血清甲胎蛋白異質(zhì)體（AFP-L3）對于診斷原發(fā)性肝癌（PHC）的發(fā)生、發(fā)展的應(yīng)用價值。方法：選取2015年1-12月本院收治的PHC患者87例、肝硬化患者58例、慢性肝炎患者61例作為研究對象，分別檢測其AFP-L3水平。結(jié)果：PHC患者AFP-L3水平和AFP-L3陽性率均高于肝炎與肝硬化患者，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；不同TNM分期患者AFP-L3水平與AFP-L3陽性率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；腫瘤直徑越大，AFP-L3水平越高，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：AFP-L3是反映PHC的發(fā)病的敏感指標(biāo)，其與腫瘤大小密切相關(guān)。

肝癌； 肝硬化； 慢性肝炎； 甲胎蛋白； 甲胎蛋白異質(zhì)體

First-author's address：Tai'an Tumour Prevention and Treatment Hospital，Tai'an 271000，China

原發(fā)性肝癌（Primary hepatic cancer，PHC）是臨床中最常見的惡性腫瘤之一，不僅惡性程度高，而且病情進(jìn)展迅速，患者死亡率較高［1］。甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）是目前臨床廣泛應(yīng)用的PHC診斷與監(jiān)測指標(biāo)，但研究表明，少數(shù)PHC患者不存在AFP水平升高，而妊娠、慢性肝炎、肝硬化、胚胎性腫瘤等病變也可能引起AFP水平升高［2-3］。我國大部分PHC患者長期存在慢性肝炎及肝硬化病史，AFP無法明確鑒別PHC與良性肝病，使PHC的臨床診斷造成很大的困難。因此，尋求敏感性、特異性更高的標(biāo)志物仍是PHC臨床治療中的迫切需要解決的問題。隨著研究的不斷深入，有關(guān)資料顯示，LCA結(jié)合型AFP異質(zhì)體3（AFP-L3）為肝癌細(xì)胞所特有，能夠作為PHC早期診斷的敏感標(biāo)志物［4］。本研究對比了肝癌與肝病患者的AFP-L3水平，旨在探索AFP-L3在PHC的診斷中的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料 選取2015年1-12月本院收治的PHC患者87例為PH組，均經(jīng)臨床、影像學(xué)、病理檢查，符合第四屆全國肝癌學(xué)術(shù)會議制訂的PHC診斷標(biāo)準(zhǔn)，并排除多發(fā)性肝癌，其中男52例，女35例；年齡32～76歲，平均（57.02±8.73）歲；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期22例、Ⅲ期36例、Ⅳ期29例。影像學(xué)檢查顯示：腫瘤直徑≤3 cm 25例、3～5 cm 33例、≥5 cm 29例；選取同期肝硬化患者58例為肝硬化組，其中男32例，女26例；年齡31～67歲。平均（52.55±11.04）歲；選取同期慢性肝炎患者61例為慢性肝炎組，其中男43例，女18例；年齡27～74歲，平均（48.93±10.83）歲。肝硬化和慢性肝炎患者均符合2000年中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)會、肝病學(xué)分會聯(lián)合修訂的病毒性肝炎防治方案中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2方法 所有患者均于入組次日采集空腹靜脈血5 mL，離心取血清，保存于-20 ℃低溫環(huán)境。AFP檢測采用雅培I2000化學(xué)發(fā)光儀及其配套檢測試劑（均購自美國雅培公司），嚴(yán)格根據(jù)產(chǎn)品說明書進(jìn)行檢測。AFP-L3檢測采用微量離心柱法，試劑購自北京熱景生物公司，離心柱中保存與小扁豆凝集素（LCA）發(fā)生了耦聯(lián)作用的瓊脂糖，能夠特異性地與AFP-L3發(fā)生化合反應(yīng)，當(dāng)血清在離心柱中流過時，AFP-L3與LCA結(jié)合，留存于離心柱中，先進(jìn)行離心洗脫，提取AFP-L3，再應(yīng)用化學(xué)發(fā)光儀對AFP-L3的含量進(jìn)行檢測，并計算AFP-L3 與AFP的比例。根據(jù)美國FDA制訂的標(biāo)準(zhǔn)，以AFP-L3＞10%作為其陽性率臨界值。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS 19.0 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，組間計量資料以（±s）表示，比較采用F檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1三組患者檢測結(jié)果比較 PHC患者AFP-L3百分比和AFP-L3陽性率均高于肝炎和肝硬化患者，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而肝炎和肝硬化患者AFP-L3百分比和AFP-L3陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1　三組患者檢測結(jié)果比較

2.2不同TNM分期PHC患者檢測結(jié)果比較 不同TNM分期患者AFP-L3百分比和AFP-L3陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2　不同TNM分期PHC患者檢測結(jié)果比較

2.3不同腫瘤大小PHC患者檢測結(jié)果比較 腫瘤直徑越大，AFP-L3百分比越高，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），不同腫瘤大小患者AFP-L3陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

表3　不同腫瘤大小PHC患者檢測結(jié)果比較

3　討論

慢性肝炎與肝硬化等肝病患者極可能演化為原發(fā)性肝癌（PHC），因此提高鑒別良惡性肝病的準(zhǔn)確性，對于PHC的早期診斷極其重要。甲胎蛋白（AFP）被公認(rèn)為臨床PHC的血清標(biāo)志物，但是有資料表明，PHC患者中AFP呈陰性者高達(dá)30%～40%［5］。另外研究還發(fā)現(xiàn)，一些良性肝病AFP水平可有不同程度的升高，尤其是PHC的高危人群，例如慢性肝炎和肝硬化患者中AFP水平升高者占20%～50%，因此應(yīng)用AFP診斷PHC存在一定的局限性［6］。AFP可分為不能與LCA結(jié)合的AFP-L1 與AFP-L2，以及能與LCA結(jié)合的AFP-L3。已有研究表明，AFP-L1主要存在于良性肝病患者中，AFP-L2來自妊娠婦女，而AFP-L3是PHC患者所特有，因此AFP-L3可作為PHC的敏感標(biāo)志物［7］。本研究檢測了PHC與慢性肝炎、肝硬化患者AFP-L3水平，以探討AFP-L3在診斷PHC中的應(yīng)用價值。

本研究結(jié)果顯示，PHC患者AFP-L3水平及AFP-L3陽性率均高于其他兩種良性肝病患者。AFP是一種糖蛋白，主要產(chǎn)生于肝臟和胎兒的卵黃囊［8］。研究發(fā)現(xiàn)，由于糖鏈結(jié)構(gòu)的差異，AFP與外源性凝集素親和性的不同，不同來源的AFP與LCA的結(jié)合能力不同，能夠?qū)FP來源作出判斷［9］。其中AFP-L3僅由肝癌細(xì)胞所分泌，因此應(yīng)用于診斷PHC的特異性與敏感性明顯高于AFP［10］。已有多項研究證明，AFP-L3應(yīng)用于診斷早期PHC中能發(fā)揮巨大作用［11-13］。AFP-L3在臨床診斷PHC之前即可出現(xiàn)陽性，因而用于肝癌定性診斷時不受AFP 400 ng/mL這一傳統(tǒng)PHC診斷標(biāo)準(zhǔn)的限制，且無需動態(tài)觀察AFP含量變化，從而縮短了從AFP含量升高至PHC確診的時間［14］。AFP-L3陽性的肝癌有快速生長和早期轉(zhuǎn)移的潛在特性，因而AFP-L3 對AFP低濃度的PHC尤其具有早期診斷意義［15-16］。Toyoda等［17］研究表明，當(dāng)AFP＜20 ng/mL時的患者在未進(jìn)行治療前，高AFP-L3的患者的存活率明顯比低AFP-L3的患者低。還有研究報道，即使癌灶直徑小于2 cm的患者中，也有超過35%者可以檢測到AFP-L3的升高［18］。另外，應(yīng)用AFP-L3與AFP的百分比作為指標(biāo)，還能夠排除AFP的絕對濃度量的干擾，針對AFP水平較低的患者，應(yīng)用AFP-L3百分比進(jìn)行診斷，更有夠提高診斷的準(zhǔn)確性。本次研究中，有5例患者在B超檢查時顯示為陰性，但AFP-L3檢測顯示陽性，結(jié)果在后期CT與病理檢查中，有2例確診PHC?？梢姡珹FP-L3陽性結(jié)果對于PHC的早期診斷有重要的預(yù)警作用。本研究結(jié)果還顯示，腫瘤直徑越大，AFP-L3水平越高，這提示AFP-L3是由肝癌細(xì)胞所分泌的，而腫瘤體積越大，肝癌細(xì)胞的數(shù)量越多，因此其產(chǎn)生的AFP-L3的數(shù)量也相應(yīng)增多。本研究與以往有部分研究的結(jié)果存在差異，其原因可能是研究對象不同，這些研究將多發(fā)性PHC患者也納入研究范圍，而本研究根據(jù)影像學(xué)檢查，對研究對象進(jìn)行嚴(yán)格篩選，僅選擇單發(fā)PHC患者［19］。還有研究采用AFP-L3的絕對含量作為指標(biāo)，分析其與腫瘤大小的相關(guān)性，結(jié)果呈陰性，其原因可能是由于存在非結(jié)合型AFP的干擾［20-21］。本研究結(jié)果還顯示，不同TNM分期患者AFP-L3百分比水平無明顯差異，推測其原因可能是由于TNM分期的評估標(biāo)準(zhǔn)并不完全反映腫瘤細(xì)胞的直接損害。也就是說，并非腫瘤細(xì)胞的數(shù)量越多，腫瘤的TNM分期就相應(yīng)地越高，而AFP-L3主要反映腫瘤細(xì)胞的數(shù)量，因此與TNM分期的相關(guān)性受到一定影響。本研究中發(fā)現(xiàn)，不同TNM分期患者和不同腫瘤大小患者的AFP-L3陽性率均無明顯差異，這可能是由于AFP-L3診斷不同TNM分期患者和不同腫瘤大小患者的陽性率都較高，存在天花板效應(yīng)，因此PHC分組之間顯示不出差異。

綜上所述，AFP-L3是反映PHC的發(fā)病的敏感指標(biāo)，AFP-L3水平與腫瘤大小密切相關(guān)。但是AFP-L3仍存在一定的漏診率，目前還沒有一種指標(biāo)能診斷全部PHC，因此在檢測血清標(biāo)志物的同時還應(yīng)結(jié)合臨床及影像學(xué)檢查，以免發(fā)生漏診。

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Detection and Significance of Serum Alpha-fetoprotein Variant in Patients with Liver Cancer and Liver Disease

WANG J un-hai.

Medical Innovation of China，2016，13（19）：021-024

Objective：To explore the application value of serum alpha-fetoprotein variant （AFP-L3）in the diagnosis of primary liver cancer （PHC）.Method：From January to December in 2015，87 patients with PHC，58 patients with cirrhosis and 61 patients with chronic hepatitis in our hospital were selected as the research objects.AFP-L3 levels were detected respectively.Result：The AFP-L3 level and positive rate of PHC with AFP-L3 were higher than the chronic hepatitis and cirrhosis patients，There were no significant differences in AFP-L3 level and AFP-L3 positive rate in different TNM stages（P＞0.05）.The tumor diameter was greater，AFP-L3 level was higher，the differences were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion：AFP-L3 is a sensitive index reflecting the incidence of PHC，and it is closely related to the tumor size.

Liver cancer； Cirrhosis； Chronic hepatitis； Alpha-fetoprotein； Alpha-fetoprotein variant

10.3969/j.issn.1674-4985.2016.19.006

①山東省泰安市腫瘤防治院 山東 泰安 271000通信作者：王軍海

2016-01-29） （本文編輯：李穎）