李小琴，白彩云

(延安大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 延安 716000)

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臍血中Caspase7蛋白在羊水量異常產(chǎn)婦中的表達(dá)

李小琴，白彩云

(延安大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 延安 716000)

目的探討Caspase7蛋白在羊水量異常和正常的產(chǎn)婦血清中的表達(dá)差異。方法采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)分別檢測(cè)30例羊水過少、30例羊水過多和30例羊水量正常產(chǎn)婦臍帶血中Caspase7蛋白表達(dá)水平的情況，并加以分析。結(jié)果Caspase7蛋白在3組產(chǎn)婦血清中均有陽性表達(dá)。羊水過少組血清中Caspase7蛋白平均濃度(160.2±25.8ng/mL)比對(duì)照組高(142.9±18.4ng/mL)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.99，P<0.05)。羊水過多組血清中Caspase7蛋白平均濃度(119.2±21.5ng/mL)比對(duì)照組低(142.9±18.4ng/mL)，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.59，P<0.05)。結(jié)論羊水過少或過多產(chǎn)婦血清中Caspase7蛋白表達(dá)異常，提示其可能與羊水量異常的發(fā)生有關(guān)。

羊水過少；羊水過多；臍血；Caspase7蛋白

[Abstract]ObjectiveToexplorethedifferenceinexpressionofCaspase7inumbilicalserumbetweenpregnantwomenwithabnormalamnioticfluidandnormalpregnantwomen.MethodsELISAwasperformedtodeterminetheconcentrationofCaspase7proteininumbilicalserumof30casesofoligohydramnios, 30casesofpolyhydramniosand30normalcases.ResultsCaspase7waspositivelyexpressedinumbilicalserumofthreegroups.TheexpressionofCaspase7washigherintheoligohydramniosgroup(160.2±25.8ng/mL)thaninthenormalgroup(142.9±18.4ng/mL),andtherewassignificantdifference(t=2.99,P<0.05).TheexpressionofCaspase7waslowerinthepolyhydramniosgroup(119.2±21.5ng/mL)thaninthenormalgroup(142.9±18.4ng/mL)withsignificantdifference(t=4.59,P<0.05).ConclusionTheexpressionofCaspase7inumbilicalserumofpregnantwomenofoligohydramniosandpolyhydramniosisabnormal,whichindicatesthatitmightbecorrelatedwithabnormalamnioticfluid.

[Keywords]oligohydramnios;polyhydramnios;umbilicalserum;caspase7protein

羊水量異常是妊娠期常見的妊娠合并癥，包括羊水過少和羊水過多。羊水過少是指妊娠晚期羊水量少于300mL。羊水量減少時(shí)，子宮與胎兒之間的緩沖減少，臍帶更容易受壓，同時(shí)胎肺發(fā)育受到影響，會(huì)使胎兒更容易發(fā)生胎心率異常及宮內(nèi)缺氧等危及胎兒的情況。當(dāng)妊娠期間羊水量超過2 000mL時(shí)，診斷為羊水過多[1]。目前大部分羊水量異常的病因不清，羊水多少不是靜止不動(dòng)的，而是處于循環(huán)狀態(tài)，因此研究羊水平衡的調(diào)控有著十分重要的意義。

近年來，國內(nèi)外學(xué)者開始將目光集中于參與細(xì)胞凋亡的因子在孕婦胎盤胎膜以及血清上的分布及其與羊水調(diào)節(jié)的關(guān)系。目前在婦產(chǎn)科領(lǐng)域，有關(guān)Caspase的研究多集中在妊娠期高血壓疾病及婦科腫瘤等方面，而有關(guān)與羊水過少的相關(guān)研究較少。Caspase7蛋白作為半胱天冬蛋白酶家族中的一員，參與機(jī)體內(nèi)細(xì)胞凋亡的過程，是執(zhí)行人體中細(xì)胞凋亡程序的關(guān)鍵酶之一；其在妊娠婦女胎盤胎膜細(xì)胞中的正常表達(dá)，確保胎盤胎膜細(xì)胞的正常凋亡，從而維持著母胎間的物質(zhì)交換，并保證胎兒的正常發(fā)育。因此，本研究通過運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)進(jìn)一步研究Caspase7蛋白在羊水量正常和異常產(chǎn)婦臍帶血清中的表達(dá)水平，探討其與羊水量異常的關(guān)系，為尋找羊水量異常的病因與發(fā)病機(jī)制提供新的思路。

1對(duì)象和方法

1.1研究對(duì)象

選擇2014年6至12月在延安大學(xué)附屬醫(yī)院產(chǎn)科住院剖宮產(chǎn)分娩足月孕婦，分為羊水過少組、羊水過多組及正常組產(chǎn)婦，每組各30例。研究對(duì)象既往無內(nèi)外科合并癥及其他妊娠合并癥(妊娠期高血壓疾病、胎膜早破、胎兒宮內(nèi)生長受限、胎兒畸形及其他并發(fā)癥)，近期無藥物服用史、感染及母體脫水等因素。所有研究對(duì)象剖宮產(chǎn)的指征為：前次剖宮產(chǎn)和頭盆不稱。產(chǎn)前B超檢測(cè)羊水指數(shù)(amnioticfluidindex，AFI)≤5.0cm和/或羊水最大暗區(qū)垂直深度(AFV)≤2.0cm，為羊水過少；AFI≥25.0cm和/或AFV≥8.0cm，為羊水過多。剖宮產(chǎn)術(shù)中進(jìn)一步核實(shí)羊水量，羊水總量<300mL確診為羊水過少，羊水總量>2 000mL確診為羊水過多。如果術(shù)中羊水量和術(shù)前羊水指數(shù)不相符，該病例予以剔除。

1.2血清標(biāo)本采集及檢測(cè)

所有研究對(duì)象于胎兒娩出后及胎盤娩出前，抽取臍帶血2.5mL，立即將其注入已編號(hào)的未添加任何抗凝劑的潔凈試管內(nèi)，隨后在室溫下靜置50min，待其自然凝固，然后將其置入離心機(jī)中分離15min，轉(zhuǎn)速為2 000r/min，依次用合適的移液器將上層透亮的血清移至己標(biāo)號(hào)的潔凈聚丙烯管中，蓋緊后置于-70℃冰箱保存?zhèn)溆?。ELISA試劑盒購自北京博奧森生物工程有限公司，批內(nèi)和批間變異系數(shù)均<9%。血清中Caspase7蛋白測(cè)定采用ELISA法，具體方法嚴(yán)格按照說明書操作。

1.3結(jié)果判定

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1各組孕產(chǎn)婦年齡、妊娠周數(shù)及妊娠次數(shù)的情況

羊水過少組孕產(chǎn)婦年齡、妊娠周數(shù)及妊娠次數(shù)與對(duì)照組相比，其表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為1.82、1.81、0.62，均P>0.05)；羊水過多組孕產(chǎn)婦年齡、妊娠周數(shù)及妊娠次數(shù)與對(duì)照組相比，其表達(dá)差異也均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為0.47、1.04、0.90，均P>0.05，見表1。

Table 1　Comparison of age, gestational weeks and thenumber of pregnancy between three groups ±S)

2.2各組孕產(chǎn)婦血清中Caspase7蛋白的比較

羊水過少組血清中的Caspase7蛋白平均濃度高于對(duì)照組，其表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.99，P<0.05)；羊水過多組血清中的Caspase7蛋白平均濃度低于對(duì)照組，其表達(dá)差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.59，P<0.05)，見表2。

組別例數(shù)(n)Caspase7(ng/mL)羊水過少組30160.2±25.8羊水過多組30119.2±21.5對(duì)照組30142.9±18.4

3討論

3.1Caspase7蛋白在羊水量異常產(chǎn)婦中表達(dá)的分析

Caspase-7即為半胱氨酸蛋白酶-7，是由303個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，分子量約為35kD。Caspase-7與Caspase-3具有高度同源性，在細(xì)胞凋亡途徑中作用類似。Caspase-7在N端有一氨基酸殘基片段，它一旦被激活就啟動(dòng)凋亡程序，并以級(jí)聯(lián)放大方式傳導(dǎo)和放大凋亡信號(hào)，向下游凋亡執(zhí)行因子傳遞，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[1]。胰島素樣生長因子可調(diào)控Cyt-C釋放入胞質(zhì)，從而抑制Caspase-7引發(fā)的細(xì)胞凋亡[2-5]。一旦體內(nèi)的凋亡機(jī)制發(fā)生異常將引起多種疾病的發(fā)生。

本研究通過運(yùn)用ELISA方法發(fā)現(xiàn)：Caspase7蛋白在羊水過少組產(chǎn)婦臍帶血清中的濃度明顯比羊水正常組高，在羊水過多組產(chǎn)婦臍帶血清中的濃度明顯比羊水正常組低。本課題組還同時(shí)采用免疫組化方法(SP法)檢測(cè)了這些研究對(duì)象胎膜中Caspase7蛋白的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：Caspase7蛋白在羊水過少組與羊水正常組產(chǎn)婦的胎膜中均有陽性表達(dá)，同時(shí)羊水過少組胎膜中Caspase7蛋白的表達(dá)比羊水正常組明顯升高[6]。由此推測(cè)：Caspase7蛋白在正常妊娠胎膜絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞的正常表達(dá)，確保正常胎膜細(xì)胞的凋亡，維持著母胎之間的物質(zhì)交換及胎兒的正常發(fā)育。在羊水過少組的孕婦胎膜及血清中，Caspase7蛋白的表達(dá)異?？捎绊懱ケP胎膜細(xì)胞的自身凋亡，干擾胎盤胎膜細(xì)胞的結(jié)構(gòu)及其功能，從而使得胎盤的血管網(wǎng)減少，使得物質(zhì)交換發(fā)生障礙，嚴(yán)重地影響體內(nèi)的水分子及其它小分子物質(zhì)代謝及其循環(huán)，影響母體、胎兒及胎膜之間的水分子及其它小分子物質(zhì)交換，導(dǎo)致羊水量異常。另外，胎盤胎膜細(xì)胞凋亡增加，影響胎盤胎膜細(xì)胞上水通道蛋白(AQP)的結(jié)構(gòu)及其功能。目前在孕婦胎盤或胎膜上僅發(fā)現(xiàn)有AQP1、AQP3、AQP8和AQP9的表達(dá)，暫時(shí)未發(fā)現(xiàn)其他水通道蛋白；且發(fā)現(xiàn)上述因子在羊水量異常的產(chǎn)婦中表達(dá)異常[7-10]。水通道蛋白表達(dá)水平一旦下降，一方面使得母胎液體交換、胎兒血容量及胎兒皮膚腎臟水分的排泄減少，從而減少了胎兒尿液的生成，影響羊水的生成途徑；另一方面會(huì)改變細(xì)胞膜對(duì)羊水的通透性，阻止過多的液體重吸收進(jìn)入胎兒血循環(huán)，在一定程度上減少了羊水膜內(nèi)途徑的重吸收，從而達(dá)到平衡羊水生成與吸收的目的。最后，AQP在胎盤胎膜組織中的表達(dá)減少可能參與胎盤老化及胎膜早破的病理分子機(jī)制。

3.2展望

羊水過少的病因及發(fā)病機(jī)制至今尚未明確，Caspase7蛋白在羊水量異常孕婦的血清中異常表達(dá)，為羊水過少的診斷及治療提供了新思路及重要參考價(jià)值，從而可改善臨床結(jié)局，降低剖宮產(chǎn)率、圍生兒病率和死亡率，提高圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)質(zhì)量。但是，它在羊水量調(diào)節(jié)平衡中的確切作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究，如Caspase的表達(dá)異常是引起羊水量異常的發(fā)病機(jī)制，那Caspase可作為一種新的治療羊水過少的手段。因此下一步期望通過制作動(dòng)物模型及擴(kuò)大樣本量對(duì)羊水量異常進(jìn)行多因素分析和研究，進(jìn)一步尋找羊水量異常發(fā)生的生物學(xué)特性，揭示其發(fā)生、發(fā)展的規(guī)律，最終為早預(yù)防、早診斷和早治療羊水量異常提供新的方向。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：于學(xué)文]

Expression of Caspase7 in umbilical serum of pregnant women with abnormal amniotic fluid

LI Xiao-qin, BAI Cai-yun

(Department of Gynecology and Obstetrics, Yan’an University Affiliated Hospital, Shaanxi Yan’an 716000, China)

2015-06-30

李小琴(1973-),女，副主任醫(yī)師，主要從事產(chǎn)科疾病的診治與研究。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.01.011

R714.2

A

1673-5293(2016)01-0031-03