方歡樂，陳衍斌，盧新義，孫寶平

(1.西安培華學院醫(yī)學院，西安　710125；2.陜西步長制藥有限公司，西安　710075)

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丹參在炮制大生產(chǎn)過程中丹酚酸B的損失情況研究

方歡樂1，陳衍斌2，盧新義2，孫寶平2

(1.西安培華學院醫(yī)學院，西安710125；2.陜西步長制藥有限公司，西安710075)

目的考察丹參藥材炮制大生產(chǎn)過程中指標性成分丹酚酸B的含量變化及損耗情況。方法進行10批次丹參飲片炮制生產(chǎn)，應用HPLC法，在生產(chǎn)過程各主要工藝點進行跟蹤取樣，測定丹酚酸B的含量并計算損耗；同時在其中一個批次藥材炮制大生產(chǎn)過程中，檢測每個工藝環(huán)節(jié)對丹酚酸B的含量的影響。結果原藥材、水洗藥材、潤透藥材和切片4個取樣點丹酚酸B的平均含量分別為6.83%，4.72%，4.46%和3.55%，相對原藥材的損失情況分別為30.84%，34.59%和47.99%。水洗工藝直接導致丹酚酸B損失22.11%，最終損失高達47.48%。結論嚴格控制(優(yōu)化)水洗工藝，可有效保留丹酚酸B的含量，提高丹參的炮制效率。

丹酚酸B；丹參；炮制；損耗

丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhizaBge.的干燥根及根莖；具有活血調(diào)經(jīng)、涼血消癰和養(yǎng)血安神的功效[1]；用于胸痹心痛、脘腹脅痛、瘕瘕積聚、熱痹疼痛、心煩不眠、月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)經(jīng)閉和瘡瘍腫痛等癥狀。丹參的化學成分包括脂溶性有效成分、水溶性有效成分及其他成分，丹酚酸B是主要的水溶性有效成分，被《中國藥典》列為丹參含量測定指標之一。丹酚酸B是丹參治療心血管疾病的主要藥效物質(zhì)基礎成分之一[2]，具有抗氧化、抗凝血、抗血栓形成、調(diào)血脂及細胞保護等藥理作用，同時還具有保護心血管系統(tǒng)、肝臟、腎臟和肺等組織器官、防治糖尿病并發(fā)癥及抗腫瘤等藥理作用[3]。

丹參片是常用的炮制品，《中國藥典》[4]規(guī)定其加工過程為：除去雜質(zhì)和殘莖，洗凈，潤透，切厚片，干燥。在飲片炮制時，存在于根皮中的水溶性有效成分丹酚酸B極易損失，李慧芬等[5]對丹參炮制前后丹酚酸B的含量變化進行了研究，陸小華[6]考察了不同炮制方法對丹參藥材中丹酚酸B的影響，李懿[7]、閆東暉[8]通過不同實驗研究考察了炮制對丹參有效成分含量的影響，不同炮制品中丹酚酸B的含量均明顯降低，張喜鋒等[9]在建立丹參飲片炮制質(zhì)量標準的過程中發(fā)現(xiàn)，丹參片、酒丹參和醋炙丹參中水溶性成分轉移率偏低。在工業(yè)化大生產(chǎn)過程中，受到炮制設備、炮制時間等多種因素影響，飲片中有效成分變化情況更為復雜，目前針對丹參飲片工業(yè)化大生產(chǎn)中丹酚酸B的含量變化情況還未見報道。本研究通過跟蹤10批丹參片產(chǎn)業(yè)化大生產(chǎn)中的關鍵環(huán)節(jié)(水洗、浸潤和切制工藝)，通過大量數(shù)據(jù)測定及分析，累積多批次丹參飲片中丹酚酸B的含量變化數(shù)據(jù)，確定丹參藥材炮制過程中丹酚酸B的損耗變化規(guī)律，為丹參飲片大生產(chǎn)提供理論依據(jù)和炮制方法改進建議。

1　儀器與試藥

1.1儀器GZX-GFC.101-1-BS型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海博泰實驗設備有限公司)；FW200A型高速萬能粉碎機，HSYZ-SP型電熱恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司)；MA30型快速水分測定儀(德國賽多利斯公司)；AR1140型電子天平(美國梅特勒奧豪斯公司)；LC-2010AHT型高效液相色譜儀(日本島津公司)；ZSX-PD-3004型切藥機(江陰市奔達藥化機械設備廠)；010411型帶式干燥機(常州市一新干燥設備有限公司)。

1.2試藥丹參藥材，產(chǎn)地山東，按照2010年版《中國藥典》檢驗，全部合格，批號：20120202，20120203，20120204，20120205，20120206，20120301，20120302，20120303，20120304，20120305，每批5kg；丹酚酸B對照品，批號111562-201110，含量測定用，中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈為色譜純；水為高純水；其余試劑均為分析純。

2　方法與結果

2.1丹參飲片炮制方法參照2010年版《中國藥典》一部[4]丹參炮制項下方法進行操作：將丹參藥材中的雜質(zhì)和殘莖去除，將去除了雜質(zhì)和殘莖的丹參藥材置于洗藥機中，迅速用水沖洗藥材表面的泥土，沖洗過程約1min，將洗凈的藥材置于中轉物料槽中，加蓋，悶潤，至藥材全部潤透，將潤透藥材用切藥機ZSX-PD-3004切厚片，干燥，得丹參飲片。

2.2丹酚酸B含量測定方法

2.2.1色譜條件及系統(tǒng)適用性以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)為流動相；流速為1mL·min-1；檢測波長為286nm。理論板數(shù)按照丹酚酸B峰計算應不低于5 000。

2.2.2對照品溶液的制備取丹酚酸B對照品74.1mg，置于50mL量瓶中，加體積分數(shù)為70%的甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為1.482mg·mL-1的對照品儲備溶液；精密吸取2mL，置于20mL量瓶中，加體積分數(shù)為70%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為0.148 2mg·mL-1的對照品溶液，。

2.2.3供試品溶液的制備樣品在60±5 ℃干燥后用FW200A高速萬能粉碎機粉碎，過3號篩，作為供試藥粉。取供試藥粉0.2g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入體積分數(shù)為75%的甲醇50mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1h，放冷，再稱定質(zhì)量，用體積分數(shù)為75%的甲醇補足減失質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2.4對照品標準曲線的制備精密吸取質(zhì)量濃度為1.482mg·mL-1的丹酚酸B對照品儲備溶液2，2，5，2，2和5mL，分別置于200，100，100，20，10和10mL量瓶中，配制成質(zhì)量濃度分別為0.014 82，0.029 64，0.074 1，0.148 2，0.296 4和0.741mg·mL-1的丹酚酸B對照品，按照上述色譜條件，依次精密吸取對照品溶液10μL，注入液相色譜儀，測定峰面積。以對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(X)、峰面積為縱坐標(Y)，得回歸方程：Y=12 891 035 X-19 687(r=0.999 9)。結果表明，進樣量為0.148 2～7.41μg時，丹酚酸B呈良好的線性關系。

2.2.5精密度實驗取丹參藥材，按照2.2.3項下方法進行操作，精密吸取質(zhì)量濃度為0.148 2mg·mL-1的對照品溶液和供試品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，供試品溶液連續(xù)進樣6次，測定峰面積，計算丹酚酸B的含量，RSD值為0.52%(n=6)，表明精密度良好。

2.2.6穩(wěn)定性實驗取丹參藥材，按照2.2.3項下方法進行操作，分別在0，3，6，9，12和18h測定峰面積，計算丹酚酸B的含量，RSD值為1.02%(n=6)。表明供試品溶液在18h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7重復性實驗取丹參藥材(批號20120202) 粉末6份，每份0.2g，精密稱定，按照2.2.3項下方法進行操作，計算丹酚酸B的含量，結果丹酚酸B的平均含量為6.58%，RSD值為1.09%(n=6)，表明重復性良好。2.2.8加樣回收率實驗取丹參藥材(批號20120202)粉末6份，每份0.1g，精密稱定，加入質(zhì)量濃度為1.482mg·mL-1的丹酚酸B對照品儲備液3，4和5mL各2份，按照2.2.3項下方法分別制備供試品溶液，測定丹酚酸B的含量，計算回收率。結果丹酚酸B的平均回收率為99.55%，RSD值為1.23%(n=6)，表明回收率良好。結果見表1。

2.2.9樣品測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，以外標法計算丹酚酸B的含量。色譜圖見圖1。

2.310批丹參炮制生產(chǎn)丹酚酸B的損耗情況跟蹤10批丹參飲片大生產(chǎn)，按照2.2項下方法，在4個關鍵點進行取樣。第1個點為打開包裝后取樣，即原藥材；第2個點為丹參藥材除去雜質(zhì)和殘莖，快速洗凈后取樣，即水洗藥材；第3個點為潤透的丹參藥材，即潤透藥材；第4個點為切厚片、干燥后取樣，即丹參飲片。處理4個取樣點的樣品，測定丹酚酸B的含量，計算相對原藥材的累計損失率，結果見表2。

表1加樣回收率實驗結果

Tab.1Resultsofrecoverytest

取樣量/g樣品中量/mg加入量/mg測得量/mg回收率/%平均值/%RSD/%0.09906.514.44611.03101.5899.551.230.10436.864.44611.2498.440.10757.075.92812.9699.400.10707.045.92812.99100.250.09706.387.41013.7599.390.10056.617.41013.9098.27

圖1HPLC圖

A.對照品；B.供試品；1.丹酚酸B

Fig.1HPLCchromatograms

A.referencesubstance；B.sample；1.salvianolicacidB

表2丹酚酸B的損耗實驗結果

Tab.2LosstestresultsofsalvianolicacidB

批次原藥材含量/%水洗藥材含量/%累計損失率/%潤透藥材含量/%累計損失率/%丹參飲片含量/%累計損失率/%201402026.924.4735.404.0841.043.9143.50201402038.175.4832.934.5544.313.7953.61201402046.525.889.825.6713.043.9439.57201402055.944.4525.084.4225.592.8851.52201402066.553.7642.604.2035.883.2051.15201403016.264.0135.944.7024.923.7140.73201403026.504.8924.774.3233.543.7542.31201403037.134.3538.993.3353.303.0157.78201403047.554.6138.944.8935.233.6851.26201403056.715.3021.014.4833.233.6345.90x±s6.82±0.654.72±0.6730.55±10.164.46±0.6034.01±11.193.55±0.3847.73±6.15

注：累計損失率=(原藥材含量-樣品含量)/原藥材含量×100%。

由表2可知，在水洗、潤透、切片和干燥的炮制大生產(chǎn)過程中，丹參原藥材、水洗藥材、潤透藥材和丹參飲片中丹酚酸B的含量呈遞減趨勢，同原藥材相比丹酚酸B的累計損失量不斷增加。由表2可知，4個取樣點10批樣品的平均含量分別為6.83%，4.72%，4.46%和3.55%。水洗藥材、潤透藥材和丹參飲片與原藥材比較，丹酚酸B的損失情況分別為30.84%，34.59%和47.99%。由此可見，在丹參飲片炮制大生產(chǎn)過程中，水洗工藝使丹酚酸B損失量最大。

2.4大生產(chǎn)條件下按照工藝步驟多次隨機抽取樣品實驗跟蹤20140305批藥材生產(chǎn)過程，針對每個工藝環(huán)節(jié)進行多次取樣，考察在大生產(chǎn)過程中，各個環(huán)節(jié)丹酚酸B的損耗情況。

打開商品包裝后，按照《中國藥典》取樣原則直接取原藥材，為1#樣品；原藥材揀凈雜質(zhì)，經(jīng)洗藥機清洗后取樣，為2#樣品；洗凈藥材悶潤1h取樣，為3#樣品；洗凈藥材悶潤2h取樣，為4#樣品；洗凈藥材悶潤3h取樣，為5#樣品；悶潤3h，藥材潤透，開始用切藥機切厚片，經(jīng)帶式干燥機在70±5 ℃干燥后取樣，為6#樣品；悶潤4h，切厚片，干燥后取樣，為7#樣品；悶潤5h，切厚片，干燥后取樣，為8#樣品。每個取樣點取樣3份，處理各取樣點的樣品，測定丹酚酸B的含量，計算損耗率，其含量變化見表3。

表3按照工藝步驟多次取樣測定結果

Tab.3Testresultsformultiplesamplingbyprocesssteps

取樣點丹酚酸B含量/%樣1樣2樣3平均含量/%累積損耗率/%1#6.716.726.806.74±0.05—2#5.305.185.275.14±0.0622.11±1.003#4.674.714.824.73±0.0829.82±0.644#4.484.414.394.43±0.0534.27±1.105#4.124.164.234.17±0.0538.13±0.416#4.254.224.274.25±0.0236.94±0.317#3.883.823.933.88±0.0542.43±0.568#3.633.453.543.54±0.0947.48±1.43

由表3可知，水洗工藝直接導致22.11%的丹酚酸B損失，3#～5#為浸潤工藝過程的樣品、6#～8#為切制工藝過程的樣品。由數(shù)據(jù)可見，在水洗過程中丹酚酸B的含量損失較大，浸潤和切制工藝中丹酚酸B的含量隨時間推移而不斷損失，隨著炮制大生產(chǎn)的進行，最終丹酚酸的累積損耗率高達47.48%。

3　討論

丹參為常用中藥材，飲片用量非常大，丹參飲片與丹參藥材中丹酚酸B的含量有明顯差異，有效成分的大量損耗導致藥效降低和藥材資源浪費。通過研究，掌握丹參有效成分在大生產(chǎn)過程中損失的規(guī)律，有益于提高丹參飲片中有效成分的含量，是一項非常有意義的課題。

丹酚酸B是丹參發(fā)揮療效作用的主要水溶性成分之一，炮制過程中，成分損失的主要原因有：生產(chǎn)過程中，水洗和浸潤需要大量用水，丹酚酸B溶解在水中，隨洗藥水的排放而流失；丹酚酸B在水中不穩(wěn)定，而大生產(chǎn)批量大、切片時間長、未切片藥材的浸潤時間相對延長、含量隨分解和氧化等反應發(fā)生而不斷降低；切制后藥材需要進一步干燥，加熱過程又導致丹酚酸B的損失。

本研究顯示，丹參在炮制生產(chǎn)過程中，水洗工藝使丹酚酸B損失量最嚴重，結合文獻資料，對丹參飲片大生產(chǎn)的炮制工藝提出幾條改進建議：①采用搶水洗，縮短藥材與水的接觸時間，同時減少用水量，以藥材潔凈為度，能夠有效防止有效成分丹酚酸B的流失。②李智等[10]采用氣相置換法進行潤藥，效果明顯優(yōu)于普通方法，此方法可以快速軟化藥材，軟化效果良好，能夠真正做到藥透水盡。同時，軟化后藥材的水分低、易控制，有效降低了藥材有效成分的損失，生產(chǎn)自動化大大提高了效率。③減少切制工序時間，從而減少藥材與水的接觸時間，快速地進入干燥工序，防止丹酚酸B的損失。④控制好干燥溫度及干燥時間，朱靜等[11]、張文芯等[12]研究表明，丹酚酸B對濕熱不穩(wěn)定，在高于70 ℃時丹酚酸B水溶液易受熱分解，因此建議應用帶式干燥機等快速干燥設備，溫度控制在60±5 ℃，縮短干燥時間，能有效降低丹酚酸B的損耗。

掌握丹參有效成分在大生產(chǎn)過程中損失的規(guī)律，進行炮制工藝優(yōu)化，有益于提高丹參飲片中有效成分的含量，提高丹參的炮制效率，節(jié)約企業(yè)成本，同時推動丹參的產(chǎn)業(yè)化大生產(chǎn)。

[1] 龔千峰．中藥炮制學[M]．北京:中國中醫(yī)藥出版社，2007:171．

[2] 江蘇新醫(yī)學院．中藥大辭典[M].上海：上海人民出版社，1977:478.

[3] 趙先，王婧雯，陸楊，等.丹酚酸B藥理作用的研究進展[J].西北藥學雜志，2015，30(1)：107-110.

[4] 國家藥典委員會.中國藥典2010年版[M].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2013:57.

[5] 李慧芬，張學蘭.丹參炮制前后丹酚酸B的含量變化[J].山東中醫(yī)藥大學學報，2009，33(5)：434-435.

[6] 陸小華.不同炮制方法對丹參藥材中丹酚酸B的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2012，18(2):103-105.

[7] 李懿.炮制對丹參有效成分含量的影響[J].科技資訊，2010，(22):221.

[8] 閆東暉.炮制對丹參有效成分含量的研究[J].當代醫(yī)學，2011，17(33):150-151.

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[10]李智，劉桂萍，孫玉紅.改進丹參飲片的炮制方法提高丹酚酸B含量[J].中國現(xiàn)代藥物應用，2010，4(17)：137-138.

[11]朱靜，陳慧清，白鵬，等.丹酚酸B水溶液分解反應的動力學研究[J].中成藥，2009，31(4):541-544.

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Salvianolic acid B losses of Salvia miltiorrhiza in processing production

FANG Huanle1，CHEN Yanbin2，LU Xinyi2，SUN Baoping2

(1.Medical College of Xi′an Peihua University，Xi′an 710125，China；2.Shannxi Buchang Pharmaceutical Limited Company，Xi′an 710075，China)

ObjectiveToinvestigatethelossesofsalvianolicacidBinSalvia miltiorrhizainprocessingprocedure.Methods10batchesofSalvia miltiorrhizaslicesprocessingprocedurewereanalyzedbyHPLCandthecontentofsalvianolicacidBlosswascalculated.ResultsThesalvianolicacidBaveragecontentoftheoriginalmedicinalherbs，watermedicinalmaterials，nourishesherbs，andthesectionfoursamplingpointswere6.83%，4.72%，4.46%and3.55%，respectively，suggestingoriginalmedicinalmateriallosseswere30.84%，34.59%and47.99%，respectively.MultiplesamplingmeasurementresultsshowedthatthewashingprocesswasthekeyprocedureofsalvianolicacidBloss.Thelosswas22.11%andthefinallosswasashighas47.48%.ConclusionTostrictlycontrol(oroptimize)thewashingprocesscaneffectivelykeepthesalvianolicacidB，andimprovetheprocessingefficiencyofSalvia miltiorrhiza.

salvianolicacidB；Salvia miltiorrhiza；processing；wastagerates

10.3969/j.issn.1004-2407.2016.05.005

R284

A

1004-2407(2016)05-0455-05

2015-11-04)