董文燊，林　芝，楊　林，瞿發(fā)林*

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促透皮吸收劑對(duì)菌克軟膏中硝酸咪康唑透皮吸收的影響

董文燊1，林芝1，楊林2，瞿發(fā)林1*

目的考察促透皮吸收劑對(duì)菌克軟膏中硝酸咪康唑透皮吸收的影響，并篩選最佳透皮吸收劑及用量。方法采用Franz擴(kuò)散池法，以離體裸鼠皮為透皮屏障，HPLC法測(cè)定含量，計(jì)算累積透皮量。結(jié)果累積透皮量檢測(cè)表明，不同促滲劑的促滲強(qiáng)弱順序依次為3%氮酮>5%丙二醇>5%油酸>3%薄荷腦>不加促透劑，不同用量的氮酮促滲作用強(qiáng)弱順序依次為5%氮酮>3%氮酮>1%氮酮>菌克。結(jié)論幾種促透劑對(duì)菌克軟膏中硝酸咪康唑均有促透皮吸收作用，其中氮酮的促透效果最好，且5%氮酮的促透效果最為明顯。

菌克軟膏；硝酸咪康唑；促透皮吸收劑；透皮吸收；高效液相色譜法

0　引言

菌克軟膏為我院非標(biāo)準(zhǔn)復(fù)方制劑[批準(zhǔn)文號(hào)：南制字(2011)F16001]，主要由硝酸咪康唑、鹽酸林可霉素、醋酸地塞米松組成，具有抗菌消炎的功效。臨床主要用于急、慢性濕疹，脂溢性皮炎，過敏性皮炎，手、足、體、股、頭癬及皮膚瘙癢等疾病[1]。硝酸咪康唑?yàn)槌Ｓ玫倪淇颠蝾惪拐婢幬?，是一種高效、安全、廣譜的抗真菌藥，對(duì)大部分致病性真菌均有作用，目前已廣泛應(yīng)于皮膚真菌感染，如：手、足、體、股癬的治療[2]。本課題組前期已完成菌克軟膏處方優(yōu)化的研究[3]及體外抗菌活性觀察[4]。硝酸咪康唑?yàn)榫塑浉嘀械闹魉帲浣?jīng)皮滲透主要依靠促透皮吸收劑提高抗真菌效果。為進(jìn)一步優(yōu)化制劑工藝，增加其透皮吸收作用，提高主藥在局部皮膚內(nèi)累積濃度，本研究通過離體裸鼠皮的體外透皮試驗(yàn)，考察促透皮吸收劑對(duì)菌克乳膏中硝酸咪康唑透皮吸收的影響，篩選出最佳的透皮吸收劑及其用量，以期為該制劑的臨床療效提供理論基礎(chǔ)。

1　材料

1.1儀器Waters系列高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司，515泵，CapLC2487雙波吸光度檢測(cè)器，Empower2數(shù)據(jù)處理系統(tǒng))；XS105十萬(wàn)分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；FA1004電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；TP-2A型智能透皮擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)儀(河南佰澤儀器有限公司，透皮杯體積15 mL，有效接觸面積3.14 cm2)；PSH-3D型PH計(jì)(上海三信電訊廠)。

1.3動(dòng)物SPF級(jí)Balb/c裸鼠，雄性，體重(20±2) g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供[合格證號(hào)：SCXK(滬)2012-0002]。

2　方法與結(jié)果

2.1菌克軟膏的制備[3]取處方用量的水相(基質(zhì)119 g、林可霉素15 g，純化水588.5 g)、油相(基質(zhì)262 g，醋酸地塞米松0.5 g)，按制備工藝制備水相與油相，加熱攪拌至溶解或熔化，并進(jìn)行85 ℃左右保溫。將油相緩緩加入水相中不斷攪拌，待乳化完全后轉(zhuǎn)慢攪拌慢降溫。待溫度降至約30 ℃時(shí)，加入過80目篩的硝酸咪康唑15 g，按同一方向攪拌混勻，冷卻至室溫，分別制得含薄荷腦3%、丙二醇5%、油酸5%、氮酮(0%、1%、3%、5%)和不含硝酸咪康唑的陰性樣品。

2.2接收液中硝酸咪康唑的含量測(cè)定

2.2.1色譜條件[5]用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-乙腈-1.5%醋酸銨溶液(40∶40∶20)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm，柱溫為30 ℃，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量20 μL。

2.2.2溶液的制備

①對(duì)照品溶液：精密稱取干燥至恒重的硝酸咪康唑?qū)φ掌愤m量，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制得含硝酸咪康唑102 μg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

②供試品溶液：從規(guī)定時(shí)間Franz擴(kuò)散池的接收液中精密移出接收液1.0 mL，室溫放置，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

③陰性對(duì)照品溶液：按處方制備的不含硝酸咪康唑的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制成供試溶液。

2.2.3專屬性試驗(yàn)按照“2.4”項(xiàng)下方法分別進(jìn)行樣品和陰性樣品透皮試驗(yàn)，24 h后取出接收液過濾，各進(jìn)樣20 μL，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果表明，空白基質(zhì)及皮膚對(duì)此檢測(cè)方法無(wú)影響，見圖1。

圖1　硝酸咪康唑HPLC色譜圖

2.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制將對(duì)照品儲(chǔ)備液(硝酸咪康唑102 μg/mL)按一定比例稀釋，得硝酸咪康唑濃度分別為10.2、5.1、2.04、1.02、0.204、0.020 4 μg/mL，依次進(jìn)樣，按“2.2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，得硝酸咪康唑的回歸方程：Y=24 528 X+672.27，r=0.999 8。結(jié)果表明，硝酸咪康唑在0.408～204 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。根據(jù)信噪比S/N≥3計(jì)算，測(cè)得本方法的最低檢測(cè)質(zhì)量濃度為10 ng/mL。

2.2.5精密度試驗(yàn)精密吸取供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果顯示，硝酸咪康唑的RSD為1.2%，表明精密度良好。

2.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品溶液，于室溫下放置，并于0、3、6、9、12、18、24 h時(shí)，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果顯示，硝酸咪康唑峰面積無(wú)明顯變化，表明樣品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.7回收率試驗(yàn)取空白接受液9份，分別加入一定量的硝酸咪康唑?qū)φ掌?，制成高、中、低質(zhì)量濃度(5.1、1.02、0.204 μg/mL)的系列溶液，每個(gè)質(zhì)量濃度制備3份，測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果高、中、低3個(gè)濃度的回收率分別為98.6%、101.1%、101.7%，平均回收率為100.47%，平均RSD為1.83%，表明制劑加樣回收率符合要求。

2.3離體鼠皮的制備方法[6]將健康裸鼠脫臼處死后，用生理鹽水沖洗干凈，剪下背部皮膚，小心剝離脂肪及黏液組織，選取完整的皮膚，用生理鹽水反復(fù)沖洗干凈，置-40 ℃低溫冰箱中保存，1周內(nèi)備用。

2.4體外透皮實(shí)驗(yàn)[7-8]采用垂直式改良的Franz單室擴(kuò)散池為透皮擴(kuò)散裝置，接受液為丙二醇∶0.9%氯化鈉注射液(1∶1)混合液，接受池體積為15 mL，透皮有效面積為3.4 cm2，轉(zhuǎn)速為300 r/min，水浴溫度為(37±0.5)℃。取出制備好的離體裸鼠皮，分別置于37 ℃的生理鹽水中解凍20 min，并將其固定在擴(kuò)散池與接收池之間，角質(zhì)層朝上，均勻涂抹1.0 g樣品，與擴(kuò)散池接觸，皮膚下層與接收液液面接觸，排出氣泡。分別于0、2、4、8、12、18、24 h時(shí)從接收池取樣口精密取樣1.0 mL，每次取樣后補(bǔ)加同樣體積、溫度的新鮮接收液，并排出氣泡。

2.6實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析

2.6.1不同促滲劑累積透皮量分析由表1、圖2、表2可知，不同促滲劑對(duì)硝酸咪康唑均具有促滲作用，促滲強(qiáng)弱順序依次為3%氮酮>5%丙二>醇>5%油酸>3%薄荷腦>不含促透劑。其中，3%氮酮菌克乳膏累積透皮量最高，24 h累積透皮量為31.344，滲透速率為1.090 μg/(cm2·h)，是不含促透皮劑滲透速率[0.434 μg/(cm2·h)]的 2.475倍。因此，篩選出氮酮作為乳膏的促滲劑，對(duì)不同濃度的氮酮進(jìn)行考察。

表1　不同促透皮吸收劑累積滲透量，μg/cm2)

圖2　不同促透皮吸收劑累積滲透量比較

表2　不同促透劑對(duì)硝酸咪康唑透皮速率的影響

注：J為平均滲透速率，ER為促滲倍數(shù)(下同)

2.6.2氮酮不同濃度累積透皮量分析由表3、圖3、表4可知，不同濃度氮酮的促滲強(qiáng)弱順序依次為5%氮酮>3%氮酮>1氮酮%>菌克(含氮酮0.6%)，且5%氮酮的促滲作用最強(qiáng)，24 h累積透皮量為42.540。5%氮酮24 h時(shí)ER達(dá)到3.359，較原處方菌克軟膏(含氮酮0.6%) 24 h時(shí)的ER (1.185)高2.83倍。

3　討論

由于不同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的皮膚結(jié)構(gòu)不同，其體外透皮吸收量結(jié)果差異很大，而人體皮膚是體外透皮實(shí)驗(yàn)的最佳皮膚，但較難獲得。因此，有報(bào)道，體外透皮擴(kuò)散試驗(yàn)多采用裸鼠皮膚，因其可避免由于使用脫毛劑或剪毛所可能造成的皮膚損傷，重復(fù)性好，且與人體皮膚具有相近的毛囊數(shù)目和直徑[9-10]。因此，本研究選擇裸鼠作為本次試驗(yàn)的透皮屏障。

表3　不同濃度氮酮的累積透皮量，μg/cm2)

圖3　不同濃度氮酮的累積透皮量比較

表4　不同濃度氮酮對(duì)硝酸咪康唑透皮速率的影響

菌克軟膏處方中的硝酸咪康唑在甲醇中略溶，在三氯甲烷或乙醇中微溶，在水或乙醚中不溶。有報(bào)道，硝酸咪康唑相關(guān)制劑體外經(jīng)皮透過試驗(yàn)的接收液包括丙二醇∶0.9%氯化鈉注射液(1∶1)或(1∶2)及0.9%氯化鈉注射液，而0.9%氯化鈉注射液中加入丙二醇能增加硝酸咪康唑的溶解性[11]，因此，本試驗(yàn)參考文獻(xiàn)[12]及根據(jù)處方量，選擇丙二醇∶0.9%氯化鈉注射液(1∶1)為接收液。

本研究結(jié)果表明，單一促透皮吸收劑氮酮、薄荷腦、油酸、丙二醇對(duì)菌克乳膏中硝酸咪康唑均具有促滲作用，但氮酮透皮吸收效果最好，并且氮酮的用量越大，累積透皮量越高，5%氮酮24 h時(shí)ER達(dá)到3.359，較原處方菌克軟膏(含氮酮0.6%)24 h時(shí)ER(1.185)高2.83倍。氮酮是目前公認(rèn)的優(yōu)良促透劑，對(duì)皮膚的毒性、刺激性很低，其最佳用量為處方量的0.5%～5%[13]。因此，應(yīng)增加菌克處方中促透皮吸收劑氮酮的用量，提高硝酸咪康唑在局部皮膚內(nèi)的累積濃度，以更好地發(fā)揮制劑的臨床療效。

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Effects of penetration enhancers on percutaneous permeability of miconazole nitrate in Junke cream

DONG Wen-shen1,LIN Zhi1,YANG Lin2,QU Fa-lin1*

(1.The 102th Hospital of PLA,Changzhou 213003,China;2.Bengbu Medical College,Bengbu 233030,China)

ObjectiveTo study the effects of penetration enhancers on percutaneous permeability of miconazole nitrate in Junke cream,and to screen for the best transdermal absorption and amount.MethodsFranz diffusion cell method was used and isolated nude mice skin was as the percutaneous barrier,the content was detected by HPLC,and the cumulative permeation quantity was calculated.ResultsThe cumulative permeation quantity showed that the rank order of absorbefacient effect in different penetration enhancers was as follows:3% azone>5% propylene glycol>5% oleic acid>3% menthol>without penetration enhancer;the rank order of absorbefacient effect in different dosage of azone was as follows:5% azone>3% azone>1% azone>Junke.ConclusionAll the penetration enhancer can enhance the transdermal absorption of miconazole nitrate in Junke cream,and the best penetration enhancer is azone,in which,5% azone has the most obvious effect.

Junke cream;Miconazole nitrate;Penetration enhancers;Transdermal absorption;HPLC

2015-12-14

1.解放軍第102醫(yī)院，江蘇 常州 213003；2.蚌埠醫(yī)學(xué)院，安徽 蚌埠 233030

10.14053/j.cnki.ppcr.201608024