黃彌娜　曹青青　李云青　費(fèi)揚(yáng)　李洋　李盛建　呂磊　趙亮

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·論著·

瑞香狼毒毒性部位的化學(xué)成分研究

黃彌娜曹青青李云青費(fèi)揚(yáng)李洋李盛建呂磊趙亮

目的研究瑞香狼毒的毒性部位及毒性部位的化學(xué)成分。方法通過(guò)小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)篩選出瑞香狼毒的毒性部位，采用多種色譜技術(shù)分離毒性部位提取物，并根據(jù)化合物的理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)分析鑒別單體化合物的結(jié)構(gòu)。結(jié)果確定乙酸乙酯極性部位為狼毒毒性部位，在乙酸乙酯部位中分離得到12個(gè)化合物，分別鑒定為：Epiafzelechin (1)、Scopoletin (2)、Isolariciresinol (3)、Lirioresinol B (4)、Stelleranol (5)、Daphnoretin (6)、Chamaechromone (7)、Neochamaejasmin A (8)、Chamaejasmine (9)、Isochamaejasmin (10)、7-methoxyneochamaejasmin A (11)及Matairesinol (12)。結(jié)論本文首次報(bào)道了瑞香狼毒的毒性部位研究，并分離鑒定毒性部位的化學(xué)成分。

瑞香狼毒；毒性部位；化學(xué)成分

瑞香狼毒StellerachamaejasmeL.始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，一般取其根部入藥，味辛、性平、有毒，入肺、肝，有逐水祛痰、散結(jié)殺蟲(chóng)的功效[1-2]，中醫(yī)用其治療一切有形的腫塊，包括惡性腫瘤、良性腫瘤、淋巴結(jié)腫大、皮疹、皮下結(jié)節(jié)等癥。多篇綜述及文獻(xiàn)曾有報(bào)道[3-7]，瑞香狼毒對(duì)于肺癌、神經(jīng)性皮炎、小鼠惡性腹水均有一定的治療作用，但考慮到其本身也存在一定的毒性，因此筆者決定對(duì)瑞香狼毒的毒性成分進(jìn)行深入系統(tǒng)地研究。本實(shí)驗(yàn)將篩選瑞香狼毒的毒性部位，并深入研究乙酸乙酯部位的化學(xué)成分，采用柱層析技術(shù)及高壓液相制備色譜技術(shù)對(duì)瑞香狼毒乙酸乙酯部位的單體化合物進(jìn)行分離純化，并且通過(guò)使用高效液相——飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)獲得單體化合物的詳細(xì)質(zhì)譜信息，同時(shí)結(jié)合高分辨核磁共振波譜結(jié)果，對(duì)提取分離到的單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。

1　儀器與試劑

Bruker AVANCE Ⅲ 600高分辨核磁共振波譜儀系統(tǒng)(布魯克科技有限公司，德國(guó))；Agilent 1260高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司，美國(guó))；Agilent 6220飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(安捷倫科技有限公司，美國(guó))；Shimadzu LC-20AP制備液相色譜儀(島津公司，日本)；Heal Force SMART-N超純水機(jī)(力康生物醫(yī)療科技控股有限公司，香港)；RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司，上海)；玻璃層析柱(南通三晶玻璃儀器有限公司，江蘇)；Kromasil 100-5 C18制備柱(50×250 mm)；所用試劑(強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司，江蘇)均為分析純?cè)噭疄閷?shí)驗(yàn)室自身制備的超純水。柱層析用硅膠、硅膠GF254薄層板(煙臺(tái)江友化工有限公司，山東)；羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH-20(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，上海)反相C18硅膠(大曹株式會(huì)社，日本)。

瑞香狼毒購(gòu)于安徽亳州藥材市場(chǎng)，原產(chǎn)地內(nèi)蒙古，批號(hào)：20140214，經(jīng)第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室的孫蓮娜教授鑒定為瑞香科植物瑞香狼毒StellerachamaejasmeL.的干燥根。ICR小鼠，體質(zhì)量19～24 g，均由第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院動(dòng)物房提供。

2　方法與結(jié)果

2.1急性毒性實(shí)驗(yàn)

2.1.1各極性部位溶液制備取瑞香狼毒藥材若干，用高速萬(wàn)能粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎。從中稱(chēng)取3 kg藥材粉末，加入4 L的80%乙醇溶液，浸泡1小時(shí)后開(kāi)始加熱進(jìn)行回流提取，提取時(shí)間2小時(shí)，趁熱用布氏漏斗抽濾得到濾液。于濾渣中再次加入2 L的80%乙醇溶液，重復(fù)上述操作，將兩次所得的濾液合并，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓回收乙醇溶液，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇溶液分別多次萃取濃縮得到其石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏、正丁醇浸膏及總提物浸膏。稱(chēng)取瑞香狼毒的石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏、正丁醇浸膏、總提物浸膏若干，分別加入15%乙醇溶液使其溶解，將溶液置于超聲波儀中超聲30分鐘，以期增加其溶解度，得到濃度為0.25 g/mL的四種藥物混懸溶液，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組(15%乙醇溶液)。

2.1.2灌胃實(shí)驗(yàn)將實(shí)驗(yàn)所用的ICR小鼠隨機(jī)分為5組，平均每組12只，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)前禁食12小時(shí)，不禁水，將小鼠稱(chēng)重后計(jì)算所需灌胃劑量(規(guī)格：0.4 mL/10 g體質(zhì)量)，各組分別灌胃10 g/kg的石油醚部位混懸液、乙酸乙酯部位混懸液、正丁醇部位混懸液、總提物混懸液及15%乙醇溶液(空白對(duì)照組)，記錄動(dòng)物死亡情況如圖1。

圖1　瑞香狼毒各極性部位急性毒性試驗(yàn)小鼠的死亡情況

根據(jù)上圖可發(fā)現(xiàn)，在灌胃相同劑量(10 g/kg)的不同極性部位提取物混懸藥液的情況下，乙酸乙酯組的小鼠存活率最低。灌胃完成1小時(shí)后，總提物組、石油醚組、乙酸乙酯組及正丁醇組的小鼠均出現(xiàn)不同程度的腹瀉現(xiàn)象，之后陷入萎靡狀態(tài)，空白對(duì)照組的小鼠并未發(fā)生任何異常。灌胃3小時(shí)后，乙酸乙酯組的個(gè)別小鼠開(kāi)始死亡，石油醚組與正丁醇組也相繼有小鼠死亡。統(tǒng)計(jì)灌胃當(dāng)天，石油醚組的小鼠死亡數(shù)量為2只，正丁醇組的小鼠死亡數(shù)量為1只，乙酸乙酯組的小鼠死亡數(shù)量為8只。連續(xù)觀察7天，發(fā)現(xiàn)存活下來(lái)的小鼠生命體征恢復(fù)正常，且體質(zhì)量每天逐漸增加的趨勢(shì)。該實(shí)驗(yàn)證明了在相同劑量下的不同極性部位灌胃溶液中，乙酸乙酯毒性最強(qiáng)，初步確定瑞香狼毒的毒性部位在于乙酸乙酯部位。

2.2化學(xué)成分提取與分離

取瑞香狼毒藥材30 kg粉碎后，加入200 L的80%乙醇溶液于65℃下熱提2小時(shí)，提取液趁熱過(guò)濾，于濾渣中再次加入150 L的80%乙醇溶液熱提2小時(shí)，趁熱過(guò)濾，合并兩次濾液濃縮至無(wú)醇?xì)埩?，濃縮至體積為6 L。取濃縮液2 L，依次用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇各萃取三次，每次的萃取溶劑體積為2 L。分別合并各萃取層溶劑，濃縮，干燥后得到石油醚浸膏110 g，乙酸乙酯浸膏242 g和正丁醇浸膏47 g。

取乙酸乙酯浸膏203 g進(jìn)行正相柱層析(石油醚∶乙酸乙酯分離，1∶1洗脫)，得53 g Fr1；乙酸乙酯洗脫，得32 g Fr2。Fr1經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷∶甲醇，50∶1～10∶1洗脫)，得8.3 g Fr1-1，6.4 g Fr1-2，3.1 g Fr1-3和3.5 g Fr1-4。Fr1-1經(jīng)過(guò)硅膠層析柱(二氯甲烷∶甲醇，50∶1洗脫)，得2號(hào)化合物10 mg，將其他流分合并后上凝膠柱層析(氯仿∶甲醇，1∶1洗脫)得11號(hào)化合物9.8 mg和12號(hào)化合物10.2 mg；Fr1-2經(jīng)過(guò)硅膠層析柱(二氯甲烷∶甲醇，10∶1等度洗脫)，得1號(hào)化合物49 mg和7號(hào)化合物111 mg；Fr1-3經(jīng)Prep. HPLC高壓制備(流動(dòng)相梯度及溶液為0～30分鐘，65%～70%甲醇水溶液，流速為80 mL/min，紫外波長(zhǎng)為210 nm)，得到8號(hào)化合物52 mg，9號(hào)化合物44 mg和10號(hào)化合物25 mg。Fr2經(jīng)硅膠柱層析(石油醚∶丙酮，2∶1洗脫)，得3號(hào)化合物35 mg，4號(hào)化合物39 mg和6號(hào)化合物40 mg；將其他流分合并后上凝膠柱層析(氯仿∶甲醇，1∶1洗脫)，得5號(hào)化合物32 mg，具體流程見(jiàn)圖2。

2.3結(jié)構(gòu)鑒定

利用Agilent HPLC-ESI-TOF/MS對(duì)分離提取到的12種化合物進(jìn)行質(zhì)譜分析，同時(shí)利用Bruker AVANCE Ⅲ 600高分辨核磁共振波譜儀對(duì)其進(jìn)行核磁共振分析，采集它們的1H-NMR譜與13C-NMR譜。結(jié)合理化性質(zhì)及過(guò)往文獻(xiàn)中對(duì)于它們核磁數(shù)據(jù)的報(bào)道，對(duì)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒別，具體結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖3。

化合物1：白色粉末，C15H14O5，ESI-MS的質(zhì)核比(m/z)為275.1033 [M+H]+。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 7.19 (2H，d，J=8.8 Hz，H-2′,6′)，6.79 (2H，d，J=8.8 Hz，H-3′,5′)，5.91 (1H，d，J=1.6 Hz，H-8)，5.82 (1H，d，J=1.6 Hz，H-6)，4.59 (1H，d，J=8.0 Hz，H-2)，3.96 (1H，dd，J=5.6，13.6 Hz，H-3)，2.88 (1H，d，J=5.6 Hz，H-3)，2.49 (1H，dd，J=5.2，1.6Hz，H-4)。13C-NMR (150 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 157.81 (C-8)，157.20 (C-5)，156.98 (C-4′)，156.39 (C-6)，130.79 (C-1′)，128.98 (C-2′,6)，115.39 (C-3′,5)，100.19 (C-4)，95.61 (C-6)，94.79 (C-8)，82.22 (C-2)，68.18 (C-3)，28.29 (C-4)。核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]基本一致，判斷該化合物是Epiafzelechin。

化合物2：白色粉末，C10H8O4，ESI-MS的質(zhì)核比(m/z)為193.0521 [M+H]+。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 10.28 (1H，s,7-OH)，7.90 (1H，d，J=9.3 Hz，H-4)，7.20 (1H，s，H-5)，6.76 (1H，s，H-8)，6.20 (1H，d，J=9.4 Hz，H-3)，3.79 (3H，s，6-OCH3)。13C-NMR (150 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 162.53 (C-2)，153.01 (C-7)，151.38 (C-9)，147.12 (C-6)，146.36 (C-4)，113.57 (C-3)，112.49 (C-10)，111.49 (C-5)，104.64 (C-8)，57.89 (OCH3)。 核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]基本一致，判斷該化合物是Scopoletin。

化合物3：白色粉末，C20H24O6，ESI-MS的質(zhì)核比(m/z)為361.0019 [M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CDCl3，δ，ppm)： 6.88 (1H，d，J=8.1 Hz，H-5′)，6.87 (1H，d，J=8.1 Hz，H-5)，6.84 (1H，dd，J=8.1，1.76 Hz，H-6′)，6.81 (1H，dd，J=8.1，1.76 Hz，H-6)，6.70 (1H，d，J=1.84 Hz，H-2′)，6.69 (1H，d，J=1.85 Hz，H-2)，4.79 (1H，d，J=6.6 Hz，H-7)，4.08 (1H，dd，J=8.5，6.6 Hz，H-9α)，3.75 (1H，m，H-9β)，3.90 (1H，m，H-9′α)，3.77 (1H，m，H-9′β)，2.93 (1H，dd，J=5.2，13.6 Hz，H-7α)，2.57 (1H，dd，J=5.2，13.6 Hz，H-7β)，2.73 (1H，m，H-8)，2.43 (1H，m，H-8′)。13C-NMR (150 MHz，CDCl3，δ，ppm)： 148.08(C-3)，147.97(C-3′)，146.47(C-4′)，145.43 (C-4)，136.21 (C-1′)，133.71 (C-1)，122.63 (C-6)，120.18 (C-6′)，115.86 (C-5)，115.62 (C-5′)，112.65 (C-2)，109.76 (C-2′)，84.26 (C-7′),74.32 (C-9)，62.34 (C-9′)，62.34 (C-9′)，57.36 (OCH3)，43.84 (C-8′)，34.74 (C-7)。核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]基本一致，判斷該化合物是Isolariciresinol。

化合物4：白色粉末，C22H26O8，ESI-MS 的質(zhì)核比(m/z)為419.1680 [M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CDCl3，δ，ppm)： 6.58 (4H，s，H-2，6，H-2′，6′)，5.49 (2H，s,-OH)，4.73 (2H，d，J=4.4 Hz，H-7，7′)，4.28 (2H，m，H-9，9′)，3.91 (2H，m，H-9，9′)，3.90 (12H，s，-OCH3×4)，3.12 (2H，m，H-8，8′)。13C-NMR (150 MHz，CDCl3，δ，ppm)： 148.58 (C-3，3′，5，5′)，135.71 (C-1,1′)，133.52 (C-4，4′)，104.11 (C-2，2′，6，6′)，87.50 (C-7,7′)，73.23 (C-9，9′)，57.80 (OCH3×2)，55.78 (C-8，8′)。 核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]基本一致，判斷該化合物是Lirioresinol B。

圖2　瑞香狼毒乙酸乙酯部位的單體分離過(guò)程

圖3　12種單體化合物的結(jié)構(gòu)圖

化合物5：棕色粉末，C30H22O11，ESI-MS的質(zhì)核比(m/z)為559.1358 [M+H]+。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 7.08 (2H，d，J=8.7 Hz，H-2?，6?)，6.72 (2H，d，J=8.7 Hz，H-3?，5? )，6.56 (2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，6′)，6.49 (2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，5′)，6.06 (1H，d，J=2.1 Hz，H-8″)，6.03 (1H，d，J=2.1 Hz，H-8″)，6.52 (1H，s，H-2″)，5.95 (1H，s，H-6)，5.68 (1H，s，H-2)，4.84 (1H，br s，H-3)，2.45 (1H，d，J=16.6 Hz，H-4)，2.36 (1H，dd，J=17.1，4.0 Hz，H-4)。13C-NMR (150 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 192.79 (C-4″)，188.87 (C-5)，170.26 (C-7)，169.40 (C-7″)，165.33 (C-8″)，162.33 (C-5″)，160.05 (C-8α，4″)，158.25 (C-4′)，131.74 (C-2″，6″)，130.18 (C-1′)，129.07 (C-2′，6′),124.14 (C-1?)，116.52 (C-3′，5′)，116.11 (C-3?，5?)，110.38 (C-4α)，102.62 (C-6)，101.86 (C-4″α)，98.68 (C-6″)，98.22 (C-8″)，91.83 (C-2″)，87.15 (C-8)，81.87 (C-2)，81.05 (C-3″)，65.16 (C-3)，28.80 (C-4)。 核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]基本一致，判斷該化合物是Stelleranol。

化合物6：無(wú)色透明晶體，C19H12O7，ESI-MS的質(zhì)核比(m/z)353.0639 [M+H]+。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 8.03 (1H，d，J=9.6 Hz，H-4′)，7.85 (1H，s，H-4)，7.70 (1H，d，J=8.6 Hz，H-5′)，7.20 (1H，s，H-5)，7.17 (1H，d，J=2.4 Hz，H-8′)，7.10 (1H，dd，J=8.6，2.4 Hz，H-6′)，6.84 (1H，s，H-8)，6.37 (1H，d，J=9.5 Hz，H-3′)。13C-NMR (150 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 161.84 (C-2)，161.54 (C-2′)，158.83 (C-7′)，156.87 (C-9′)，152.21 (C-7)，149.29 (C-9)，147.53 (C-3′)，145.93 (C-6′)，137.61 (C-3)，132.73 (C-4)，131.77 (C-5′)，116.27 (C-10)，115.76 (C-10′)，115.32 (C-4′)，112.06 (C-5)，111.28 (C-6)，105.89 (C-8)，104.63 (C-8′)，57.90 (-OCH3)。 核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]基本一致，判斷該化合物是Daphnoretin。

化合物7：黃色粉末，C30H22O10，ESI-MS的質(zhì)核比(m/z)為543.1637 [M+H]+。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 8.15 (1H，s，H-2)，7.12 (1H，d，J=8.6 Hz，H-27，31)，6.98 (1H，d，J=8.6 Hz，H-21，25)，6.55 (1H，d，J=8.6 Hz，H-28，30)，6.45 (1H，d，J=8.6 Hz，H-22，24)，6.42 (1H，d，J=11.9 Hz，H-12)，6.22 (1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.08 (1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，5.68 (1H，s，H-18，16)。13C-NMR (150 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 204.73 (C-13)，181.28 (C-4)，166.71 (C-7)，165.95 (C-17),165.85 (C-15)，165.85 (C-19)，163.32 (C-5)，158.82 (C-9)，157.89 (C-2),157.16 (C-23)，157.16 (C-29)，136.17 (C-26)，135.15 (C-20)，131.26 (C-21)，131.26 (C-25)，130.34 (C-27)，130.34 (C-31)，122.26 (C-3)，116.71 (C-28)，116.71 (C-30)，116.45 (C-22)，116.45 (C-24)，106.21 (C-14)，105.49 (C-10)，100.73 (C-6)，96.52 (C-16)，96.52 (C-18)，95.39 (C-8)，54.43 (C-11)，48.72 (C-12)。 核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]基本一致，判斷該化合物是Chamaechromone。

化合物8：淡黃色粉末，C30H22O10，ESI-MS的質(zhì)核比(m/z)為543.1266 [M+H]+。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 6.99 (4H，d，J=8.6 Hz，H-2′，H-6′，H-2?，H-6?)，6.77 (4H，d，J=8.6 Hz，H-3′，H-5′，H-3?，H-5?)，5.72 (2H，d，J=2.1 Hz，H-6，H-6″)，5.86 (2H，d，J=2.1 Hz，H-8，H-8″)，4.72 (2H，s，H-2，H-2″)，3.66 (2H，s，H-3，H-3″)。13C-NMR (150 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 196.5 (C-4，4″)，169.5 (C-7，7″)，165.3 (C-5，5″)，164.3 (C-9，9″),160.2 (C-4′，4?)，131.4 (C-2′，6′，2?，6?)，128.5 (C-1′，1?)，117.4 (C-3′，5′，3?，5?)，102.7 (C-10，10″)，98.2 (C-6，6″)，97.0 (C-8，8″)，82.4 (C-2，2″)，49.0 (C-3，3″)。 核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]基本一致，判斷該化合物是Neochamaejasmin A。

化合物9：淡黃色粉末，C30H22O10，ESI-MS的質(zhì)核比(m/z)為543.0741 [M+H]+。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 2.85 (2H，br s，H-3，3″)，5.44(2H，br s，H-2，H-2″)，5.74(2H，br s，H-6，H-6″)，5.85(2H，br s，H-8，H-8″)，6.72 (4H，d，J=8.5 Hz，H-2′，H-6′，H-2?，H-6?)，6.98(4H，d，J=8.5 Hz，H-3′，H-5′，H-3?，H-5?)。13C-NMR (150 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 196.71(C-4，4″)，167.52(C-7，7″)，164.10 (C-5，5″)，163.43 (C-9，9″)，157.79(C-4′，4?)，130.17 (C-2′，2?)，128.11 (C-6，6?)，127.17 (C-1′，1?)，116.29 (C-3′，3?)，115.96 (C-5′，5?)，102.77 (C-10，10″)，96.34 (C-6，6″)，95.43 (C-8，8″)，80.59 (C-2，2″)，46.88 (C-3，3″)。核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]基本一致，判斷該化合物是Chamaejasmine。

化合物10：棕色粉末，C30H22O10，ESI-MS的質(zhì)核比(m/z)為543.1861 [M+H]+。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 6.98 (4H，d，J=8.6 Hz，H-2′，H-6′，H-2?，H-6?)，6.77 (4H，d，J=8.6 Hz，H-3′，H-5′ ，H-3?，H-5?)，5.86 (2H，d，J=2.1 Hz，H-8，H-8″)，5.72 (2H，d，J=2.1 Hz，H-6，H-6″)，4.74 (2H，s，H-2，H-2″)，3.58 (2H，s，H-3，H-3″)。13C-NMR (150 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 196.6 (C-4，4″)，169.2 (C-7，7″)，165.4 (C-5，5″)，164.3 (C-9，9″),160.2 (C-4′，4?)，131.4 (C-2′，6′，2?，6?)，128.5 (C-1′，1?)，117.4 (C-3′，5′，3?，5?)，102.8 (C-10，10″)，98.2 (C-6，6″)，97.0 (C-8，8″)，82.4 (C-2，2″)，49.0 (C-3，3″)。 核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]基本一致，判斷該化合物是Isochamaejasmin。

化合物11：淡黃色粉末，C31H24O10，ESI-MS的質(zhì)核比(m/z)為557.1829 [M+H]+。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 11.77 (2H，s，5-OH，5″-OH)，6.99，6.98 (each 2H，d，J=8.5 Hz,H- 2′，6′，2?，6?)，6.88 (2H，d，J=8.2 Hz，H-3′,5′)，6.73(2H，d，J=8.6 Hz，H-3?,5?)，6.08 (1H，d，J=2.2 Hz，H-6)，6.03(1H，d，J=2.2 Hz，H-8)，5.86 (1H，d，J=2.3 Hz，H-6″)，5.77 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8″)，5.77 (1H，br s，H-2)，5.72 (1H，br s，H-2″)，3.79 (2H，br s，H-3,3′)，3.75 (3H，s，OCH3)。13C-NMR (150 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 198.60 (C-4)，197.77(C-4″)，169.58(C-7)，167.45(C-7″)，165.32(C-5)，165.02(C-5″)，164.30 (C-9)，164.23 (C-9″)，161.82 (C-4)，160.17(C-4″)，128.30 (C-1′)，128.14 (C-1?)，117.42 (C-3′，5′)，117.30 (C-3?，5?)，104.42 (C-10)，103.42 (C-10″)，98.18 (C-6，8)，97.09 (C-6″，8″)，84.88 (C-2，2″)，57.18 (OCH3)，50.98 (C-3，3″)。 核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]基本一致，判斷該化合物是7-methoxyneochamaejasmin A。

化合物12：淡黃色粉末，C20H22O6，ESI-MS的質(zhì)核比(m/z)為359.1443 [M+H]+。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 6.73 (1H，d，J=1.74 Hz,H-2)，6.67 (1H，d，J=8.0 Hz，H-2′)，6.64 (1H，d，J=7.9 Hz，H-5′)，6.59 (1H，d，J=1.74 Hz，H-5)，6.57 (1H，dd，J=8.0，1.79 Hz，H-6′)，6.46 (1H，dd，J=7.9，1.76 Hz，H-6)，4.08 (1H，m，H-9′α)，3.83 (1H，m，H-9′β)，3.69 (3H，s，OCH3)，3.68 (3H，s，OCH3)，2.80 (1H，dd，J=13.8，5.4 Hz，H-7′α)，2.73 (1H，dd，J=11.1，6.9 Hz，H-8′)，2.67 (1H，dd，J=13.8，6.4 Hz，H-7′β)，2.44 (3H，m，H-7α，7β，8)。13C-NMR (150 MHz，DMSO-d6，δ，ppm)： 180.38 (C-9)，149.37 (C-3′)，149.29 (C-3)，146.98 (C-4′)，146.82 (C-4)，131.48 (C-1′),130.79 (C-1)，123.47 (C-6)，122.58 (C-6′)，117.26 (C-5′)，117.19 (C-5)，115.37 (C-2)，114.59 (C-2′)，72.58 (C-9′)，57.44 (OCH3)，57.38 (OCH3)，47.53 (C-8)，42.78 (C-8′)，38.77 (C-7′)，35.77 (C-7)。 核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]基本一致，判斷該化合物是Matairesinol。

3　討論

本研究采用小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)對(duì)瑞香狼毒的各個(gè)極性部位進(jìn)行毒性篩選，確定了乙酸乙酯極性部位為其毒性部位。通過(guò)柱層析法對(duì)乙酸乙酯極性部位的化學(xué)成分做了系統(tǒng)分離，鑒定了12個(gè)化合物，其中分離得到的化合物多為黃酮類(lèi)化合物，該研究為進(jìn)一步探索瑞香狼毒的毒性作用機(jī)理提供物質(zhì)基礎(chǔ)，在后續(xù)的研究中將對(duì)各單體化合物的毒性作用進(jìn)行深入探索。

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(本文編輯： 董歷華)

Study on chemical constituents of toxicity parts inStellerachamaejasmeL.

HUANGMi-na，CAOQing-qing，LIYun-qing，etal.

DepartmentofPharmacy，EasternHepatobiliarySurgeryHospital，SecondMilitaryMedicalUniversity，Shanghai200438，China

Correspondingauthor：ZHAOLiang，E-mail：zhaoliangphar@163.com

ObjectiveTo isolate and identify the compounds of the toxic part from theStellerachamaejasmeL. MethodsToxic part of theStellerachamaejasmeL. was screened by acute toxicity，the compounds were separated and purified by chromatographic technique and their structures were established by spectroscopic methods. ResultsThe toxicity part of theStellerachamaejasmeL. was the polar parts of ethyl acetate，and twelve compounds were obtained from ethyl acetate extracts of theStellerachamaejasmeL.，which were identified as Epiafzelechin (1), Scopoletin (2), Isolariciresinol (3), Lirioresinol B (4), Stelleranol (5), Daphnoretin (6), Chamaechromone (7), Neochamaejasmin A (8), Chamaejasmine (9), Isochamaejasmin (10), 7-methoxyneochamaejasmin A (11) and Matairesinol (12). ConclusionThis is the first report of the toxicity of polar fractions ofStellerachamaejasmeL.，separate and identify the chemical composition of the toxicity of polar parts.

StellerachamaejasmeL.；Toxic part；Chemical constituents

國(guó)家自然科學(xué)基金-青年項(xiàng)目(81303300)

200438上海，中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院藥材科

黃彌娜(1981- )，女，本科，藥師。研究方向：中藥質(zhì)量控制。E-mail：huangmina1981@163.com

趙亮(1980- )，博士，副主任藥師。研究方向：中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及新藥開(kāi)發(fā)。E-mail：zhaoliangphar@163.com

R284

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2016.09.007

2016-04-14)