邵志翔

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·論著·

miR-146b在沿海居民甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)及意義

邵志翔

目的探討miR-146b在沿海居民甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)及意義。方法收集2012年1月1日至2015年1月1日手術(shù)切除的丹東沿海甲狀腺乳頭狀癌患者組織及癌旁正常甲狀腺組織存檔蠟塊50例，采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)甲狀腺乳頭狀癌組織與周圍正常組織中miR-146b的表達(dá)，并分析甲狀腺乳頭狀癌組織中miR-146b相對(duì)表達(dá)量與臨床病理特征的關(guān)系，采用kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析。結(jié)果沿海居民甲狀腺乳頭狀癌組織中miR-146b相對(duì)表達(dá)量的中位數(shù)及全距為1.545(0.442，2.881)高于癌旁組織為1.078(0.312，2.665)(Z=-2.999，P<0.01)。miR-146b高表達(dá)是腫瘤直徑≥1 cm、包膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ的危險(xiǎn)因素(P<0.05)；而性別、年齡、病灶數(shù)與miR-146b表達(dá)水平無(wú)關(guān)(P>0.05)。不同miR-146b相對(duì)表達(dá)水平的甲狀腺乳頭狀癌患者的生存率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.971)。結(jié)論miRNA-146b在沿海居民甲狀腺乳頭狀癌組織中高表達(dá)，與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

甲狀腺乳頭狀癌；miR-146b；微RNAs；沿海居民；相關(guān)性

甲狀腺癌是最常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)腫瘤，發(fā)病率約占所有惡性腫瘤中1.7%[1]。而甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)是甲狀腺癌最常見的病理類型，占甲狀腺惡性腫瘤的90%左右。微RNA(microRNA, miRNA)是一種內(nèi)源性、非編碼單鏈小分子RNA，它通過(guò)與靶基因mRNA堿基配對(duì)引導(dǎo)沉默復(fù)合體(RISC)降解mRNA或阻礙其翻譯，從而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)[2-4]。它們通常與 miRNAs 的3’-非編碼區(qū)互補(bǔ)結(jié)合，通過(guò)后轉(zhuǎn)錄控制著基因的表達(dá)水平，從而參與調(diào)控細(xì)胞的增殖、生長(zhǎng)、凋亡及免疫應(yīng)答等生命活動(dòng)。最近發(fā)現(xiàn)，miRNA 在許多人類癌癥中存在異常表達(dá)，包括甲狀腺癌[5]。研究表明，許多miRNA與腫瘤的預(yù)后和轉(zhuǎn)移相關(guān)，而miR-146b正是其中之一[6]。沿海居民攝入海產(chǎn)品相對(duì)較多，攝碘量相對(duì)較大，屬甲狀腺癌高發(fā)人群，本研究通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)miR-146b在沿海居民甲狀腺乳頭狀癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)，探討miR-146b的表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系，為甲狀腺乳頭狀癌的分子診斷和靶向治療提供參考依據(jù)。

1　資料與方法

1.1一般資料選取丹東市第一醫(yī)院病理科2012年1月1日至2015年1月1日臨床資料完整的手術(shù)切除的甲狀腺乳頭狀癌組織及癌旁正常甲狀腺組織存檔蠟塊50例，所有病例均為丹東沿海常住居民。男24例，女26例;年齡23～68歲，中位年齡41歲。根據(jù)2009年第七版國(guó)際抗癌聯(lián)盟甲狀腺癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期24例，Ⅱ期17例，Ⅲ期9例。所有患者術(shù)前未接受化療或放射治療。

1.2主要儀器與試劑本研究RNA提取試劑Trizol購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司，qRT-PCR反轉(zhuǎn)錄及實(shí)時(shí)定量染料購(gòu)自Takara寶生物工程(大連)有限公司，miR-146b莖環(huán)法引物由廣州銳博公司設(shè)計(jì)合成，Real-time PCR儀器為ABI7900HT，由美國(guó)福斯特市應(yīng)用生物系公司生產(chǎn)。

1.3實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)按照操作說(shuō)明書依據(jù)Trizol法檢測(cè)組織中的總DNA。按操作說(shuō)明書采用RT引物探針在ABI7900HT中運(yùn)行檢測(cè)miR-146b的表達(dá)，RNU6B作為內(nèi)參對(duì)照。經(jīng)過(guò)3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)，計(jì)算出相對(duì)定量(relative quantification,RQ)的值進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.4miR-146b基因表達(dá)水高低判定標(biāo)準(zhǔn)以miR-146b基因表達(dá)水平2-ΔΔCt計(jì)算，將2-ΔΔCt結(jié)果由大到小排序，取中位數(shù)1.545為判定標(biāo)準(zhǔn)，>1.545為高表達(dá)，反之為低表達(dá)。

1.5隨訪從行甲狀腺乳頭狀癌切除術(shù)后開始至死亡或者末次臨床隨訪結(jié)束的時(shí)間即2015年12月1日為止。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料非正態(tài)分布或方差不齊采用中位數(shù)及全距表示，并采用配對(duì)設(shè)計(jì)Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)比較甲狀腺乳頭狀癌及癌旁組織中miR-146b的相對(duì)表達(dá)量差異。miR-146b表達(dá)水平與性別、年齡、腫瘤直徑、病灶數(shù)、包膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期等臨床因素的相關(guān)性用Chi-square檢驗(yàn)。不同miR146b相對(duì)水平的甲狀腺乳頭狀癌患者生存分析采用kaplan-Meier法，并采用Log rank檢驗(yàn)比較2組患者生存率差異，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1不同組織中miR-146b的相對(duì)表達(dá)量實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)甲狀腺乳頭狀癌組織及癌旁組織中miR-146b的相對(duì)表達(dá)量，并比較兩組中miR-146b的相對(duì)表達(dá)量有無(wú)差異。由于甲狀腺乳頭狀癌組織與癌旁正常組織中的miR-146b相對(duì)表達(dá)量均不符合正態(tài)分布，故采用配對(duì)設(shè)計(jì)Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)比較兩組miR-146b的相對(duì)表達(dá)量差異。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，甲狀腺乳頭狀癌組織中miR-146b相對(duì)表達(dá)量的中位數(shù)及全距為1.545(0.442，2.881)高于癌旁組織1.078(0.312，2.665)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-2.999，P=0.003)。見圖1。

圖1甲狀腺乳頭狀癌組織及癌旁組織中miRNA-146b的相對(duì)表達(dá)水平

2.2miRNA-146b表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌患者臨床病理特征的關(guān)系比較甲狀腺乳頭狀癌患者的表達(dá)水平與臨床病理特征發(fā)現(xiàn)miR-146b高表達(dá)是腫瘤直徑≥1 cm、包膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ的危險(xiǎn)因素(P<0.05)；而性別、年齡、病灶數(shù)與miR-146b表達(dá)水平無(wú)關(guān)(P>0.05)。見表1，圖2。

2.3miR-146b表達(dá)水平與甲狀腺乳頭狀癌患者預(yù)后的相關(guān)性對(duì)50例甲狀腺乳頭狀癌患者隨訪1～4年，隨訪中位時(shí)間為521 d，分析發(fā)現(xiàn)不同miR-146b水平的甲狀腺乳頭狀癌患者的總體生存率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.971)。見圖3。

3　討論

微RNA簡(jiǎn)稱miRNAs，是一類長(zhǎng)約22核苷酸(nt)的非編碼的單鏈RNA分子，約70 nt的前體miRNA(pre-miRNA)經(jīng)Dicer酶剪切而來(lái)。miRNA參與生物體生命過(guò)程中一系列的重要進(jìn)程，包括發(fā)育、造血、器官的形成和凋亡、細(xì)胞增殖，甚至是癌癥發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)，越來(lái)越多的miRNA在腫瘤發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[7-9]。單個(gè)miRNA通過(guò)在腫瘤細(xì)胞中獨(dú)特的表達(dá)改變影響一系列下游基因，以miRNA為靶點(diǎn)可以引發(fā)廣泛的治療效應(yīng)，這為以miRNA相關(guān)的靶向治療提供了廣泛誘人的前景。miRNA在人類腫瘤中常出現(xiàn)異常表達(dá)，在腫瘤中低表達(dá)的miRNA通過(guò)特異性抑制下游致癌基因發(fā)揮腫瘤抑制因子作用，高表達(dá)的miRNA通過(guò)特異性抑制下游抑癌基因而發(fā)揮致癌作用。有研究發(fā)現(xiàn)，miRNA與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，miRNA調(diào)控腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制成為了研究熱點(diǎn)，miR-146b就是其中之一[10]。

表1　甲狀腺乳頭狀癌患者miR-146b表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系　例(%)

圖2　甲狀腺乳頭狀癌患者不同臨床病理特征的miR-146相對(duì)表達(dá)水平

圖3　甲狀腺乳頭狀癌患者miR-146b表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性

甲狀腺癌是最常見的內(nèi)分泌相關(guān)腫瘤，其中甲狀腺乳頭狀癌是甲狀腺癌最常見的病理類型。居住在沿海城市的居民平時(shí)較多攝入海產(chǎn)品，且愛吃腌制海產(chǎn)品，相對(duì)攝碘量較大，屬于甲狀腺癌的高發(fā)人群。故研究miR-146b在沿海居民甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)及意義對(duì)甲狀腺乳頭狀癌的分子診斷和靶向治療可提供一定的參考依據(jù)。本研究認(rèn)為與癌旁正常組織相比miR146b相對(duì)表達(dá)量在甲狀腺乳頭狀癌組織中顯著提高(P<0.01)。這與楊明等[11]研究甲狀腺腺瘤患者miR-146b的表達(dá)及與BRAF突變的相關(guān)性研究中結(jié)論miRNA-146在TC組織中呈低表達(dá)的結(jié)論不同。而另有研究認(rèn)為miR146b在甲狀腺乳頭狀癌中表達(dá)升高，有望成為甲狀腺乳頭狀癌新的分子標(biāo)志物的結(jié)論[12,13]，與本研究結(jié)論相符。本研究發(fā)現(xiàn)miR-146b高表達(dá)是腫瘤直徑≥1cm、包膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ的危險(xiǎn)因素(P<0.05)，這與Chou等[14]研究認(rèn)為miRNA146b與甲狀腺外侵襲顯著相關(guān)，且miRNA-146b在高風(fēng)險(xiǎn)組表達(dá)水平顯著提高的結(jié)論相同。截至隨訪結(jié)束，本研究認(rèn)為不同miR-146b相對(duì)表達(dá)水平的甲狀腺乳頭狀癌患者的生存率差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與楊明等[11]研究不能確定miR-146b表達(dá)水平與生存預(yù)后關(guān)系的結(jié)論一致。

綜上所述，miR-146b在沿海居民甲狀腺乳頭狀癌中高表達(dá)，是腫瘤直徑≥1 cm、包膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ的危險(xiǎn)因素。本研究尚未發(fā)現(xiàn)miR-146b表達(dá)水平與生存預(yù)后的關(guān)系，而miR-146b在沿海居民甲狀腺乳頭狀癌中通過(guò)靶基因調(diào)控細(xì)胞的侵襲遷移機(jī)制尚未得到明確答案，需進(jìn)一步研究，從而為臨

床阻斷甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞的遷移和侵襲提供治療參考。

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Expression and significance of miR-146b in the papillary thyroid carcinoma of the coastal residents

SHAOZhixiang.

DepartmentofPathology,TheFirstHospitalofDandongCity,Liaoning,Dandong118000,China

ObjectiveTo investigate the expression and significance of miR-146b in papillary thyroid carcinoma of the coastal residents.MethodsThe tumor specimens and normal tissues beside tumor from 50 patients with papillary thyroid carcinoma who underwent surgical resection were collected in The First Hospital of Dandong City from January 1,2012 to January 1,2015. The expression levels of miR-146b in 50 cases of papillary thyroid carcinoma tissues and normal tissues beside tumor were detected by RT-PCR. Kaplan-Meier analysis was used to evaluate the survival status of patients.Moreover the correlation between relative expression levels of miR-146b and clinicopathological characteristics of papillary thyroid carcinoma was analyzed.ResultsThe median and full range of miR-146b expression levels in papillary thyroid carcinoma tissues were 1.545 (0.442,2.881,respectively),which were significantly higher than those [1.078 (0.312,2.665,respectively)] in adjacent normal tissues (Z=-2.999,P<0.01).The high-expression of miR-146b was the risk factors of tumor size, tumor capsular invasion, lymph node metastasis and TNM advanced stage (Ⅲ+Ⅳ) (P<0.05).However patient’s sex and age, focus number were not related with the expression levels of miR-146b (P>0.05). There were no significant differences in the survival rates among the patients with different expression levels of miR-146b (P>0.05).ConclusionThe high-expressions of miRNA-146b exist in papillary thyroid carcinoma tissues of the coastal residents,which are closely correlated to the pathogenesis,development,invasion and metastasis of papillary thyroid carcinoma.

papillary thyroid carcinoma; miR-l46b; microRNA; coastal residents; correlation

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.18.010

118000遼寧省丹東市第一醫(yī)院病理科

R 736.1

A

1002-7386(2016)18-2758-04

2016-03-29)