趙 飛，高廣慧

(遼寧省食品檢驗檢測院，遼寧 沈陽 110015)

分析與測試

超高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜檢測生鮮肉中四環(huán)素類抗生素殘留

趙 飛，高廣慧

(遼寧省食品檢驗檢測院，遼寧 沈陽 110015)

建立了超高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜(UPLC-MS/MS)檢測生鮮肉中四環(huán)素類抗生素殘留的分析方法。方法采用C18色譜柱(50 mm×2.1 mm，1.7μm)分離，柱溫30 ℃，樣品室溫度10 ℃。流動相由A相(乙腈)和B相(0.1%甲酸溶液)組成，流速為0.4 mL/min，采用梯度洗脫。在ESI正離子模式下，采用多反應離子監(jiān)測模式進行測定，可以在5 min內完成檢測。四種四環(huán)素類抗生素土霉素、金霉素、四環(huán)素和強力霉素均在10～200 μg/mL范圍內有良好的線性關系，相關系數大于0.995。樣品最低檢出限為50 μg/kg，回收率在80%～89%之間，相對標準偏差為2.5%～6.3%。該方法準確度高，靈敏度好，適用于生鮮肉中四環(huán)素類抗生素的檢測。

超高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜；四環(huán)素類抗生素；生鮮肉

四環(huán)素類抗生素是一類廣譜抗生素，主要包括金霉素、土霉素、四環(huán)素及強力霉素等。四環(huán)素類抗生素可以選擇性地與細菌核糖體30S亞基結合，阻止氨基酰-tRNA在其上的聯結，而起到抑制肽鏈的增長及細菌蛋白質的合成。四環(huán)素類抗生素被廣泛用于養(yǎng)殖業(yè)中多種細菌及衣原體、支原體等所致感染的治療中。但若超量使用，會造成藥物殘留，人類食用后可能產生消化道反應、肝損害、腎損害等不良反應，因此國際及我國均對該類抗生素殘留量有嚴格的限制。本文采用UPLC-MS/MS檢測生鮮肉中四環(huán)素類抗生素殘留，通過優(yōu)化生鮮肉樣品的前處理方法、色譜條件和質譜條件，建立了UPLC-MS/MS檢測生鮮肉中四環(huán)素類抗生素殘留的檢測方法，本方法可為生鮮肉中四環(huán)素類抗生素殘留的定性定量分析提供高效高靈敏度的檢測方法。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

WATERS TQD超高效液相色譜-串聯四級桿質譜聯用儀(美國沃特世公司)； 渦旋混合器(德國IKA)；氮吹濃縮儀(上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司)；均質器(IKA)。標準品：土霉素、金霉素、四環(huán)素和強力霉素標準物質：純度不小于95%。

甲醇(色譜純，美國FISHER公司)，乙腈(色譜純，美國FISHER公司)，正己烷(色譜純，美國FISHER公司)，高氯酸(分析純，上海信裕生物科技有限公司)，實驗用水為一級水。

1.2 標準溶液的配制

分別精密稱取適量土霉素、金霉素、四環(huán)素和強力霉素標準物質，以甲醇為溶劑配制質量濃度為1.0 mg/mL的標準溶液，置于棕色容器中，于-18℃冰箱中保存。

1.3 樣品前處理

1.3.1 樣品準備

采用四分法將待測樣品進行切割，并加以粉碎并混合均勻。

1.3.2 提取

準確稱取混合均勻的樣品5.0 g(精確至0.01 g)于50 mL帶有螺旋蓋的離心管中，精密加入25 mL甲醇，用均質器均質1 min，5000 r/min離心15 min，將上清液轉移至另一離心管中，加入25 mL正己烷，渦旋1 min，待靜置分層。

1.3.3 濃縮

精密移取下層20 mL于另一離心管中，45℃下氮氣流吹至近干。

1.3.4 凈化和復溶

向離心管中精密加入1 mL 5 %高氯酸溶液，渦旋1 min，10000 r/min離心10 min，上清液待測。

1.4 UPLC色譜條件

Waters超高效液相色譜柱：ACQUITY UPLC BEH 1.7 μ m 2.1×50 mm；流動相：乙腈(A)，0.1 %甲酸水溶液(B)，梯度洗脫程序見表1；柱溫：30 ℃；樣品室溫度：10 ℃；進樣體積：5 μL；流速：0.4 mL/min。

表1 梯度洗脫程序

1.5 MS/MS質譜條件

離子化方式：電噴霧離子化；掃描方式：負離子模式；監(jiān)測方式：多反應離子監(jiān)測；毛細管電壓：2.5 kV；離子源溫度：150 ℃；脫溶劑氣溫度：500 ℃；脫溶劑氣流量：800 L/h；錐孔反吹氣流量：50 L/h；質量條件參數見表2。

表2 MRM分析的質譜參數

2 結果與討論

2.1 標準曲線

0.2 mg/mL的四中四環(huán)素類抗生素標準溶液的色譜圖如圖1所示。

圖1 四環(huán)素類抗生素的MRM色譜圖

在設定的條件下，將系列標準混合溶液依次進樣檢測，得到四種四環(huán)素類抗生素的標準曲線如圖2所示。

圖2 標準曲線

金霉素、土霉素、四環(huán)素和強力霉素在10-200μg/mL范圍內均成良好線性關系，相關系數均大于0.998。

2.2 方法的檢出限

以產生3倍信噪比時的樣品中四種四環(huán)素類抗生素的濃度為樣品檢出限，得到本方法的樣品檢出限為50μg/kg。

2.3 方法的精密度和準確度試驗

稱取空白樣品18份，分別加入一定濃度的標準溶液，按樣品前處理方法進行處理，并依次進樣測試，分別計算回收率和精密度，得出回收率在80%～95%之間，RSD小于5.0%，測定結果見表3。

表3 方法的精密度和準確度試驗(n=6)

3 小結

本文采用超高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜法檢測生鮮肉中四種四環(huán)素類抗生素殘留具有以下優(yōu)勢：超高效液相色譜具有高效高靈敏度的特點，完成一次檢測僅需5 min；該法樣品的前處理操作簡便快速，適用于大批量樣品的檢測；串聯四級桿檢測具有選擇性更好，抗干擾能力強。綜上，本文研究的超高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜法檢測生鮮肉中四環(huán)素類抗生素殘留方法具有準確、快速、高靈敏優(yōu)勢。

[1] 楊 旭, 劉美嬌, 林 深,等. 限進材料固相萃取-高效液相色譜在線聯用檢測牛奶中四環(huán)素類抗生素殘留[J].分析化學, 2016,44(1)：155-160.

[2] 夏天驕, 夏訓峰, 徐東耀,等. 基于固相萃取-高效液相色譜法的畜禽糞便中四環(huán)素類抗生素殘留量檢測[J]. 安全與環(huán)境學報, 2013(2): 123-127.

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[4] 王彥斌. 抗生素在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中的應用、潛在危害及去除[J]. 農業(yè)開發(fā)與裝備, 2015(12): 24-25.

[5] 史艷偉，孟麗華，劉 方,等. 高效液相色譜法測定漁業(yè)水質中多西環(huán)素、四環(huán)素、土霉素、金霉素殘留量[J].中國漁業(yè)質量與標準, 2015, 5(6):45-49.

(本文文獻格式：趙 飛，高廣慧.超高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜檢測生鮮肉中四環(huán)素類抗生素殘留[J].山東化工，2016，45(14)：48-50.)

Determination of Antibiotics Residues in Fresh Meat by Ultra Performance Liquid Chromagraphy-tandem Mass Spectrometry

ZhaoFei,GaoGuanghui

(Liaoning Tnstitute for Food Inspection and Testing,Shengyang 110015,China)

An ultra performance liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry( UPLC-ESI-MS/MS) method for the determination of Antibiotics Residues in fresh meat was developed. Methods C18 chromatographic column (50mm × 2.1mm, 1.7 μ m), the solvent system was composed of mobile phase A (Acetonitrile), and mobile phase B (water with 0.1% methanoic acid ). The flow rate was 0.4 mL/min and gradient elution, and the temperature is held constant at 30℃ within a thermostated column. Multiple reaction monitoring (MRM)in ESI positive mode was used for quantitation. The Antibiotics Residues was successfully detected within 5 min. Antibiotics Residues have good linear relationship in the range of 0.5 μg /L -8 μg /L with the correlation coefficient larger than 0.995. The detection limit was 50 μg /kg, and the recovery is between 80%- 89% with the relative standard deviation between 2.5%～6.3%. An accurate and sensitivity method was developed in this study. The established method has been successfully applied to the determination of antibiotics residues in fresh meat.

UPLC -MS/MS; antibiotics residues; fresh meat

2016-05-05

趙 飛(1986—)，遼寧撫順人，碩士，工程師，主要從事食品、保健食品和藥品的理化項目檢測方法研究與開發(fā)。

O657.72;TS252.7

A

1008-021X(2016)14-0048-03