□ 邢　華　湛江市質(zhì)量計量監(jiān)督檢測所　廖建萌　湛江市食品藥品檢驗所　羅　林　湛江市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局

液質(zhì)聯(lián)用儀測定海產(chǎn)品中氯霉素不確定度的評定

□ 邢華湛江市質(zhì)量計量監(jiān)督檢測所廖建萌湛江市食品藥品檢驗所羅林湛江市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局

按國家標準測定氯霉素的含量，利用液質(zhì)聯(lián)用儀測定了海產(chǎn)品中氯霉素含量，對氯霉素測量不確定度的來源進行了分析和量化評定。水產(chǎn)品中氯霉素含量為5.0 μ g/k g時，測量結(jié)果的擴展不確定度為0.58 μ g/k g（k=2）。

測量不確定度；海產(chǎn)品；氯霉素；液質(zhì)聯(lián)用法

測量的目的是用某種手段或者方法獲得數(shù)值指標的真值，在化學分析或儀器分析中得到的數(shù)值由于存在分析誤差會有波動，這些數(shù)值的波動圍繞在真值的周圍，離真值很近但不是真值，在一個合理的范圍內(nèi)該測量數(shù)值可以接受，往往也可以說測量數(shù)值是一個近似估計值，具有離散性和不確定性，人們引入測量不確定度來描述這個離散性和不確定性，用測量不確定度來表達各種誤差的總和。在質(zhì)量管理體系中，對測定不確定度是重點管理范疇。原則上，所有的測定結(jié)果都應該標示不確定度，不確定度的評定方法是質(zhì)量計量研究領(lǐng)域的重點，不同的測定方法評定不確定度的內(nèi)容和過程不同。儀器分析和化學分析中不確定度是分析工作者要掌握的技能。

氯霉素是一種有效的廣譜抗生素。其化學結(jié)構(gòu)為對硝基-D-蘇阿糖型-二氯乙酰氨基-1，3-丙二醇，易溶于甲醇、乙酸乙酯、丙醇等有機溶劑，其結(jié)構(gòu)中有苯環(huán)等效發(fā)色基團存在，在275～280 nm處有最大紫外吸收峰。對于很多種類的真菌、霉菌等，氯霉素都具有很強的抑制作用，在海產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)曾被廣泛應用。但由于低濃度的氯霉素藥物殘留會誘發(fā)多種致病菌如大腸桿菌、沙門菌等的耐藥性，還會引起人體粒狀白細胞缺乏癥、骨髓造血功能、障礙性貧血等其他惡性血液性疾病，對人體健康構(gòu)成潛在性的危害，引起世界許多國家和地區(qū)的高度重視。歐盟、美國等均在法規(guī)中規(guī)定氯霉素在動物組織中不得檢出。

本文參考《可食動物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB/T 20756-2006），將該方法引入到實驗室，測定海產(chǎn)品中氯霉素含量，分析了測定海產(chǎn)品中氯霉素含量的步驟和方法帶來的不確定度，并對測量氯霉素含量不確定度進行了評定。

1　實驗部分

1.1試劑與儀器

高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀：LCMS-8030（日本島津公司）；液相色譜柱：C18；電子分析天平：XS205（METTELER TOLEDO）；氯霉素標準物質(zhì)：純度99.0%（Dr.E公司）。

1.2測定方法

取魚、蝦肌肉組織用肉類組織粉碎機粉碎。然后稱取樣品5 g（精確至0.01 g），置于50 mL離心管中，加入15 mL 1%氨化乙酸乙酯，5 g無水硫酸鈉，均質(zhì)提取30 s，4000 r/min離心5 min。重復提取1次，合并上清液，定容50 mL，取10.0 mL乙酸乙酯提取液在45 ℃濃縮至干，用流動相復溶解并定容至2.0 mL，過0.22 μm濾膜，上機進行測定。測量流程如圖1所示。

圖1　測量流程圖

1.3數(shù)學模型

測定海產(chǎn)品中氯霉素含量按(1)公式計算。

式（1）中，X為試樣中氯霉素含量，μg/kg；c為在標準曲線擬合讀取的氯霉素樣品溶液濃度，μg/L；V為樣品最終定容體積，mL；m為樣品的稱樣量，g；r為回收率。

1.4測量不確定度來源

結(jié)合樣品的處理過程和儀器測定過程，分析測量不確定度主要有以下的來源：樣品取樣的隨機性和在稱樣是用到電子分析天平，其測量的隨機誤差構(gòu)成樣品稱樣量的不確定度；用來校準未知樣濃度的標準擬合曲線的不確定度；定容體積引入的不確定度；提取、濃縮、轉(zhuǎn)移過程的誤差；儀器精密度和重復性引起的不確定度；LC/ MS儀器測定及校準引入的不確定度；標準溶液配制所產(chǎn)生的不確定度。測定氯霉素含量的步驟及不確定度來源見圖2。

2　不確定度評定

2.1氯霉素標準工作溶液濃度的不確定度

氯霉素標準工作溶液配制方法為：準確稱取氯霉素標準物質(zhì)0.010 0 g，置于含有少量甲醇100 mL容量瓶中，溶解后用甲醇溶解定容，得到氯霉素標準儲備液，濃度為100 mg/L；然后取1.0 mL氯霉素標準儲備液，置于100 mL容量瓶中并用甲醇定容。

氯霉素標準使用溶液的濃度按式（2）計算。

圖2　測定氯霉素含量的步驟及不確定度來源

式（2）中，配制氯霉素標準使用液溶液濃度用C（m g/L）表示；v1為移取1.0 mL氯霉素標準儲備液體積，v2為兩次定容的體積相乘。

2.2稱量過程物質(zhì)帶來的不確定度

2.2.1稱取氯霉素標準物質(zhì)質(zhì)量帶來的不確定度

由于稱取氯霉素標準物質(zhì)采用精度為0.000 1 g的電子分析天平，這個不確定度是由電子分析天平校準不確定度引入，對測定結(jié)果的影響很小，可以忽略不計。

2.2.2氯霉素標準物質(zhì)含量的不確定度。

因為沒有絕對純的物質(zhì)，氯霉素標準物質(zhì)的絕對含量不可能為100%，按照購買有資質(zhì)機構(gòu)提供的氯霉素標準物質(zhì)證書，顯示氯霉素含量的不確定度為：u（m）=0.5%。

2.2.3容量瓶定容體積的不確定度

使用前對容量瓶進行檢定，根據(jù)具有資質(zhì)的機構(gòu)給出的檢定證書，100 mL容量瓶的不確定度為：u1（V1）=u2（V3）=0.05 mL；

同樣，1.0 mL可調(diào)移液器具有資質(zhì)的機構(gòu)給出的檢定證書顯示不確定度為：u3（V2）=0.034 mL。

綜合上述的各個因素，氯霉素溶液濃度的不確定度為整個標準物質(zhì)配制過程合成相對標準不確定度，結(jié)果為：

2.3液質(zhì)聯(lián)用儀測量引入的不確定度

液質(zhì)聯(lián)用儀測量引入的不確定度可根據(jù)液質(zhì)聯(lián)用儀校準證書提供：U=5%，k=2，液質(zhì)聯(lián)用儀測量引入的相對不確定度為:u(S1)=5%/2=0.025。其中，引入的為以下幾個方面：自動進樣器；儀器的調(diào)諧校準；霧化器的霧化效率穩(wěn)定性；質(zhì)量傳輸穩(wěn)定性；質(zhì)量漂移的準確性；標準工作溶液的不確定度等。由于標準和樣品測定同樣受到B類不確定度影響，液質(zhì)聯(lián)用儀測定氯霉素含量主要是有擬合標準曲線引入不確定度。

2.4樣品稱量引入的不確定度

稱樣5.00 g，天平的檢定證書給出MPE為±0.05 g，取矩形分布，導致的不確定度為:

2.5前處理操作過程引入的不確定度

依據(jù)所述方法，對加標樣品做6次前處理平行實驗，測定結(jié)果重復性的相對標準偏差為:RSD（%）=5.19%，由前處理操作過程引入的相對標準不確定度即為相對標準偏差RSD（%）=0.051 9%在不確定度公式中用urel(rep)表示。

3　合成相對標準不確定度

將上述的整個檢測流程引入的不確定度，計算測定水產(chǎn)品中氯霉素的合成相對標準不確定度為:

在根據(jù)標準不確定度的公式得到: U(W)=urel(W)×=0.058×5=0.29μ g/k g

4　擴展不確定度與測量結(jié)果表示

根據(jù)擴展不確定度的定義，取包含因子k=2時，則測定水產(chǎn)品中氯霉素含量擴展不確定度為:U=k×u(W)=0.58 μg/kg。

用國家標準方法 GB/T 20756-2006，測定結(jié)果含量為5.0 μg/kg時，氯霉素測量結(jié)果應表述為:W=(5.0±0.58) μg/kg，k=2。

5　結(jié)語

對氯霉素測量結(jié)果不確定度貢獻較大的分量有前處理操作過程引入的不確定度和液質(zhì)聯(lián)用儀測量引入的不確定度。水產(chǎn)品中氯霉素含量為5.0 μg/kg時，氯霉素測量結(jié)果應表述為:W=(5.0±0.58)μg/kg，k=2.測量結(jié)果的擴展不確定度為0.58 μg/kg(k=2)。

［1］中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.可食動物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GB/T 20756-2006）［S］.北京：中國標準出版社，2006.

［2］中國合格評定國家認可委員會.化學分析中不確定度的評估指南（CNAS GL06）［S］.2006.

［3］中華人民共和國國家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 測量不確定度評定與表示（JJF 105921999）［S］.1999.

［4］李東剛，李春娟，吳凡，等.高效液相色譜法測定巴氏殺菌乳中糠氨酸不確定度的評定［J］.化學分析計量，2008，17（3）：7-9.

［5］余孔捷，黃杰，劉正才，等.液質(zhì)聯(lián)用法測定水產(chǎn)品中孔雀石綠、結(jié)晶紫的不確定度評定［J］.分析試驗室，2008，27（5）：203-209.

邢華（1975-），女，漢族，河北廣宗人，本科，助理工程師。研究方向：計量管理。